与卡波济氏肉瘤和腹膜后纤维瘤病相关的γ疱疹病毒的DNA聚合酶制造技术

含有编码疱疹病毒ＤＮＡ聚合酶之区域的分离的多核苷酸，所述多核苷酸含有与选自ＳＥＱ．ＩＤ ＮＯ：１和ＳＥＱ．ＩＤ ＮＯ：３的核苷酸２７－５０１至少有６９％相同的核苷酸序列。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术一般涉及病毒学领域，尤其是疱疹病毒家族的病毒。本专利技术更具体地涉及病毒亚族的DNA聚合酶的鉴定和特征描述，所述病毒亚族的成员与包括人的灵长类动物的纤维增殖性和肿瘤疾病相关。
技术介绍
卡波济氏肉瘤是一种损坏外形并潜在致命的出血性肉瘤形式，其特征在于在皮肤上以深色斑或小结出现的多发性脉管肿瘤。在组织学水平上，其特征在于相对一致的纺锤形细胞的增殖，形成束和脉管裂缝。在炎症浸润中经常会出现浆细胞，T细胞和单核细胞，胃肠损害处或相关的淋巴瘤处出血的最终结果可能是死亡(一般参见Martin等人，Finesmith等人)。一旦遇到相对而言起因不明的疾病，公众的注意力立刻会转向该疾病与AIDS的相关性。多达20％的某些感染了AIDS的群体在疾病过程中会患卡波济氏肉瘤，卡波济氏肉瘤也出现在与免疫缺损相关的其它疾病中，包括肾透析和治疗级免疫抑制，然而此疾病的流行病学暗示免疫缺损不是唯一的引发因素。具体地说，卡波济氏肉瘤与某些性服务高水平的相关性暗示非人类免疫缺损病毒这一病原因子的介入(Berel等人)。已鉴定出得自AIDS病人卡波济氏损害的组织样品中疱疹病毒样DNA序列(Chang等人，由Ambroziuk等人进一步证实)，通过表现度差异分析得到序列(Lisitsyn等人)，其中使用不相关的引物寡核苷酸扩增了已感染和未感染组织中的DNA，然后使所述DNA与细胞之间最重要的差异部分杂交到一起。此序列与Epstein Barr病毒和疱疹病毒saimiri的已知序列部分相同，它编码两个结构组分-衣壳和外被蛋白。在概括研究多种来源的组织时发现不论病人的HIV状况如何，95％的卡波济氏肉瘤损害中都有此序列(Moore等人)。相同病人的21％未介入组织呈阳性，而对照群体样品中5％呈阳性，样品之间大约有0.5％的序列差异。在体腔淋巴瘤中也检测到较高拷贝数的此序列，所述淋巴瘤的渗出物中所含B细胞的基因型只在AIDS病人中出现(Cesarman等人)。其它与AIDS相关的淋巴瘤为阴性。疱疹病毒家族含有很多大小约为100nm的多包膜病毒，所述病毒能够感染脊椎动物(一般性评论例见Emery等人，Field等人)。双链DNA基因组异乎寻常得大-长度约为88-229个千碱基，它在病毒生命周期的不同时期可产生50个以上不同的转录本。在其中一个时期，产生了多种核苷酸和多核苷酸加工酶以供病毒复制的需要，包括DNA聚合酶，DNA酶，dUTP酶，核糖核苷酸还原酶，尿嘧啶-DNA糖基化酶和胸苷激酶。与外部的病毒成分相比，不同种间的这些功能性蛋白质趋于相对较保守(Karlin等人)。疱疹病毒家族已被分成几个亚族，对每一类目的划分起先是基于生物学特性基础，当基因组序列数据出现时才得以精简。α亚族含有的病毒具有宽宿主范围，短的复制周期，和对感觉神经节的亲和性，它们包括人单纯疱疹病毒和水痘-带状疱疹病毒。β亚族含有的病毒的宿主范围受到限制，它们包括巨细胞病毒和人疱疹病毒6型。γ亚族含有的病毒通常嗜淋巴细胞，其DNA的特征在于约110千碱基的低GC含量的片段旁侧有多个高GC含量的串联重复，此亚族包括Epstein Barr病毒(EBV)，疱疹病毒saimiri，马疱疹病毒2和5型，和牛疱疹病毒4型。疱疹病毒与具有复杂临床进程的疾病有关，很多疱疹病毒的特征是能够在宿主体内进入潜伏期达相当长的时间。α亚族的病毒在感觉和植物性神经节中保持潜伏状态，而γ亚族的病毒在例如淋巴细胞谱系的细胞中保持潜伏状态。潜伏期与某些病毒基因的转录有关，并可以持续几十年直至身体状况最适于病毒恢复活性复制，这种身体状况可包括免疫缺损。另外，一些γ亚族的疱疹病毒能够遗传转化它们感染的细胞，例如，EBV与B细胞淋巴瘤，口毛白斑病，淋巴组织间质肺炎和鼻咽癌有关。在人和其它脊椎动物中出现的许多其它疾病涉及纤维增殖和前-肿瘤细胞的产生，出现在人中的疾病的例子是腹膜后纤维变性，小结状纤维瘤病，假肉瘤纤维瘤病，和硬化肠系膜炎。在华盛顿大学的地区性灵长类动物研究中心的猕猴群体中已观察到已知为地方性腹膜后纤维瘤病(RF)的另一种疾病(Giddens等人)。此疾病晚期的特征在于纤维组织围绕肠系膜和腹膜腔的背面部分增殖，延伸至腹股沟内，穿过隔膜，并进入腹壁。一旦在临床上出现此病的明显症状，病人一律在1-2个月内死亡。此病与由D型猿猴逆转录病毒SRV-2造成的猿猴免疫缺损(SAIDS)相关(Tsai等人)，但是在感染了SAIDS的其它猴群体中未显示出相同的RF频率，近年来华盛顿的RF频率已有所降低。在非人灵长类动物中研究这种疾病是重要的，这不仅是由于它可作为人疾病的模型，也是因为一种灵长类动可作为感染另一种灵长类动物的病毒的来源库，例如，疱疹病毒saimiri在其天然宿主松鼠猴(Saimirisciureus)中似乎不会引起疾病，但它在其它灵长类动物，尤其是猫头鹰(owl)猴中会引起多克隆的T-细胞淋巴瘤和急性白血病。有必要开发试剂和方法以用于检测和治疗疱疹病毒感染。例如，有必要开发能够用于诊断和评价卡波济氏肉瘤和类似疾病的试剂和方法。能够检测新病人的病原因子在鉴别诊断中会起作用；能够评价正在发生的疾病病原因子的水平在临床处理时会起作用。在此方面，Chang等人的编码外被蛋白的多核苷酸的实用性已受到限制，需要得到能够区分活动感染和潜伏感染的标记物，也需要得到免疫原性的标记物，当在抗体应答中证明时，所述标记物可用于评价对病原因子的免疫学暴露。第二，有必要开发能够用于开发治疗卡波济氏肉瘤和类似疾病的新药物的试剂和方法。对卡波济氏肉瘤的最新治疗方法是放射性疗法与传统的化学疗法，如长春新碱(Northfelt，Mitsuyasu)的联合，尽管损害会对这些物理疗法作出反应，但反应是暂时的，不好的临床进程一般会恢复，甚至实验性的疗法，如用细胞因子治疗也是针对疾病综合征而不是病因。基于病原因子的药物筛选和合理的药物设计可直接针对对于具有长期效力的临床方案的长期需要。第三，有必要开发能够用于鉴定可能与其它纤维增殖性疾病相关的病毒因子的试剂和方法。Chang等人使用的表现度差异分析技术非常复杂，可能不适于作为一般的筛选试验。在研究多种怀疑含有相关病原因子的组织样品的更常规的试验中能用作试剂的一套引物或探针更加合乎需要，优选此试剂能充分地交叉反应以鉴定以前未描述过的病原因子，但此试剂要有足够的特异性以避免鉴定出不需要的病毒或宿主的内源成分。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供分离的多核苷酸、多肽、和抗体，它们或得自新的DNA聚合酶基因，或能与所述基因的产物反应，所述基因存在于疱疹病毒中，该病毒与尤其发生于人和非人灵长类中的纤维增殖性疾病和肿瘤相关。本专利技术的另一个目的是提供多核苷酸引物和探针以检测和鉴定疱疹病毒家族，尤其是γ疱疹病毒亚族的任何成员中的DNA聚合酶基因。本专利技术的另一个目的是提供基于这些多核苷酸、多肽、和抗体的材料和方法以用于诊断和治疗灵长类，尤其是人中的γ疱疹病毒感染。本专利技术的实施方案包括下列内容· 含有编码疱疹病毒DNA聚合酶之区域的分离的多核苷酸，所述多核苷酸含有与选自SEQ. ID NO1和SEQ. ID NO3的核苷酸27-501至少有69％相同的序列(优选长度为475个核苷酸)。· 含有上述实施方本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：T·M·罗瑟，M·L·波斯，K·斯特兰德，G·J·托达罗，
申请(专利权)人：华盛顿州大学，
类型：发明
国别省市：