血液稀释剂制造技术

本发明专利技术提供一种改进的等渗多用途血液稀释剂及其使用方法。该稀释剂特别适用于对单个血细胞样品中的血细胞进行电子计数和大小分类、测量血红蛋白参数以及区分白细胞亚型，而所用的溶解剂却不含有氰化物。业已发现该稀释剂尤其适合在较宽的操作温度下应用。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及血液学和免疫学领域，涉及用于血细胞分析的试剂的改进，特别是本专利技术涉及一种改进的稀释剂，借助于适当的电子仪器，该稀释剂尤其适用于单个血细胞样品中血细胞的计数和分类、血红蛋白参数的测定以及白白细胞亚型的区分。分析一个病人的血样以确定该血样的分类，是普通的医学诊断过程。对医生来说，这个过程是一个重要的手段。重要的参数有红细胞计数(RBC)、血细胞比容(HCT)、血红蛋白(HGB)、血细胞平均容积(MCV)、红细胞平均血红蛋白(MCH)、红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)、血小板计数(PLT)、平均血小板体积(MPV)。全血细胞计数(CBC)中包括所有这些参数。其他重要的分析有白细胞计数(WBC)和将白细胞分成三种或三种以上亚型的分类。通常，血细胞分析包括用一种作为稀释剂的液体稀释血样，然后分析一部分已稀释血样从而测出红细胞和血小板参数，再将一种溶解剂加入其余已释的血样中以除去红细胞和血小板，以便进行白细胞计数和分类。有报道的最早的稀释剂之一是生理盐水。比较先进的用于全血样分析的典型的稀释剂含有某种生理盐、专门的缓冲液和防腐剂。此外，血细胞分析中还用到其它一些试剂，像在血样中加入抗凝剂、去污剂、单克隆抗体、染色剂等，会导致生物样品和化学试剂之间发生不可预料的反应，尤其是在操作温度改变的情况下。由于红细胞、白细胞、血小板和血红蛋白浓度对化学试剂的敏感性，难于找到一种既发生降解也不会不合需要地改变需分析的细胞特性和血红蛋白参数的化学试剂的组合，特别是在改变操作温度的条件下。往往，加入的一种化合物，例如为保持试剂的稳定性加入的防腐剂，可能会严重影响血细胞的物理参数。或者为了达到某种功能，在稀释液中加入一种化合物，但该成分将会对其它血细胞分析产生不利的影响。有这样的例子，业已发现为稳定白细胞所加入的成分对分析血红蛋白浓度产生了不利的影响。由于细胞的物理参数会受到任何稀释剂成分和分析方法的影响(无论是自动、半自动或手工操作)，现有的稀释剂都规定了必须用专门的试验方法或使用专有的仪器。这些现有的稀释剂不能通用或用于多种目的，不能用于多种试验仪器或试验方法。例如，一般来说，因为稀释剂的荧光性或稀释剂对荧光探针或单克隆抗体的竞争性问题，一种市售的用于血红蛋白分析的稀释剂不同于荧光流式血细胞计数仪分析用稀释剂。许多目前使用的稀释剂存在一种或多种缺点，这些稀释剂需取决于分析仪器、操作温度、样本采集的时间及待测定的样本的特殊参数。用于自动血红蛋白仪的血液稀释剂有如下美国专利专利号和专利权人是3962125，Armstrong；4185964，Lancaster；4213876，Crews等；4529705，Larsen；4617275，Matsuda等；4745071，Lapicola等；4485175，Ledis等；4346018，4521518，4962038，Carter等；4968629，Lapicola；5250438，Ryan.此外，以下专利还提供了另一些有关血稀释剂及其使用的信息专利号和专利权人是4255385，Stroupe等的美国专利报道了用于测定血样中血红蛋白的方法和试剂。该文献公开了一种用于溶解和稀释全血样品以便进行细胞分析的试剂，这种试剂含有用于测定血红蛋白的铁氰化钾。专利号和专利权人是4506018，North的美国专利报道了一种避免血细胞容积改变的血液稀释剂，这是通过平衡用于稀释剂中的防腐剂和表面活性剂的效应而达到此目的。专利号和专利权人是4656139，Matsuda等人的美国专利报道了一种制备用于血液分析的细胞的方法，该方法包括用一种稀释剂稀释血样，该稀释剂由硼酸缓冲液、乙二胺四乙酸(EDTA)和2-硫代-1-氧吡啶钠组成，其中2-硫代-1-氧吡啶钠可用于分析血红蛋白。专利号和专利权人是5008202，Edmondson等人的美国专利报道了一种用于血细胞分析的血液稀释剂和稀释血液的方法，该稀释剂大致由一种有机缓冲剂，一种细胞稳定剂，一种无机盐、一种溶剂和EDTA组成(其中EDTA作为抗微生物剂)，或者EDTA和氟化钠混合物(作为抗微生物剂)组成。专利号和专利权人是5227304，Wong的美国专利报道了一种复杂的，在Cell Dyn牌血液分析仪上进行血细胞计数和大小分类时用的试剂系统。该试剂系统包括一种等渗的稀释剂和去垢剂，其中稀释剂由咪唑有机缓冲液、抗微生物剂、无机盐和PH调节剂组成。在说明书中，Wong说明EDTA作为螯合剂，并增强了该稀释剂的抗微生物能力，该抗微生物剂是巯氧吡啶钠(2-硫代-1-氧吡啶)和Triadene3(六羟基-1，3，5三(2-羟乙基)-s-三嗪)或Triadene10(60％Triadene3和6％巯氧吡啶钠的混合物)。(巯氧吡啶钠是Olin公司的注册商标。)专利号和专利权人是5242832，Sakata的美国专利报道了一种含有咪唑和咪唑衍生物作为血红蛋白稳定剂的溶解剂。专利号和专利人是WO95/24651，kim等人的PCT专利报道了一种用于全血红蛋白测定的溶解剂，含有十二烷基二甲胺氧化物作为溶解剂，咪唑及其衍生物作为血红蛋白稳定剂。该溶解剂不使用氰化物，在血红蛋白测定中用于溶解红细胞。但这种试剂不能在任何其它种血细胞分析，如白细胞计数或白细胞分类中使用。尽管已有多种稀释剂，但是仍需要一种多用途的稀释剂，可在不同的温度环境中用种类尽可能少的稀释剂的多用途稀释剂。多用途稀释剂可避免在一个临床实验室中贮存多种不同稀释剂造成的成本高、不便和有可能发生的混乱，以适应一台专门的血液学分析仪或流式细胞分析仪及在每一台这类仪器上完成的专门的分析工作的需要。鉴于上述情况，本专利技术的目的之一是提供一种改进的稀释剂和使用这种改进的稀释剂测定血样中红细胞参数(包括血红蛋白浓度)及血小板方法。本专利技术更进一步的目的是提供一种改进的稀释剂和利用这种改进的稀释剂进行血样中白细胞计数和白细胞的亚型分类的方法。因此，本专利技术提供了一种多用途血稀释剂，该稀释剂用于分析血样中红细胞、白细胞、血小板和血红蛋白浓度，不含有六羟基-1，3，5三(2-羟乙基)-s-三嗪。该稀释剂的第一种化合物选自乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸衍生物和这两类化合物的组合；该稀释剂的第二种化合物选自咪唑，咪唑衍生物及这两类化合物的组合；该稀释剂还含有一种碱金属氯化物；并且期第三种化合物选自碱金属硫酸盐和碱金属有机酸盐，其中有机酸盐包括酒石酸盐、甲酸盐、乳酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐和丙酮酸盐以及这些盐的组合物。其中第一和第二种化合物的量足以在55°F-105°F温度范围内可重复血红蛋白和细胞体积的测定，这里所述的稀释剂是一种电解液，能导电、等渗，因此能稳定血细胞体积，并且PH值呈中性。本专利技术进一步提供了一种分析含有血细胞的血样的方法，该方法包括a)将含有血细胞的血样与一种多用途血稀释剂混合，所述稀释剂含有i)第一种化合物，选自乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸衍生物和这两种化合物的组合；ii)第二种化合物，选自咪唑，咪唑衍生物这种化合物的组合；iii)一种碱金属氯化物；iv)第三种化合物，选自碱金属硫酸盐和碱金属有机酸盐，其中有机酸盐包括酒石酸盐、甲酸盐、乳酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐和丙酮酸盐以及这些盐的组合；此处所述的稀释本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种不含有六羟基－１，３，５三（２－羟乙基）－ｓ－三嗪、用于分析血样中分析红细胞、白细胞、血小板和血红蛋白浓度的多用途血液稀释剂，所述稀释剂包括： ａ）第一种化合物，选自乙二胺四乙酸、乙二胺四乙酸衍生物和这两类化合物的组合； ｂ）第二种化合物，选自咪唑，咪唑衍生物及这两类化合物的组合； ｃ）一种碱金属氯化物； ｄ）第三种化合物，选自碱金属硫酸盐和碱金属有机酸盐，其中有机酸盐包括酒石酸盐、甲酸盐、乳酸盐、乙酸盐、柠檬酸盐和丙酮酸盐以及这些盐的组合，其中第一种化合物和第二种化合物的量足以在５５°Ｆ－１０５°Ｆ温度范围内可重复血红蛋白和细胞体积的测定，这里所述的稀释剂是一种电解液，该电解液能导电、等渗，因此能稳定血细胞体积，并且ＰＨ值呈中性。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：莫塔I黑耶斯哥，卡罗乐乔扬，
申请(专利权)人：库尔特国际公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]