抑制肺腺癌的靶标CRTAC1及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种CRTAC1作为靶点在制备诊断和治疗肺腺癌的药物中的应用，可作为肺腺癌细胞生长增殖和侵袭迁移的靶点。本发明专利技术具有如下作用：过表达CRTAC1抑制肺腺癌细胞增殖；过表达CRTAC1抑制裸鼠皮下成瘤能力；过表达CRTAC1抑制肺腺癌细胞迁移和侵袭；过表达CRTAC1抑制裸鼠肺转移灶的形成。

【技术实现步骤摘要】
抑制肺腺癌的靶标CRTAC1及其应用
本专利技术属于生物
，具体涉及肺腺癌细胞生长增殖和转移研究的新靶点及其应用，检测CRTAC1的mRNA或者蛋白表达水平，进一步可以作为肺腺癌进行诊断和预后标志物，以及期望其成为新的肺腺癌治疗新靶点。
技术介绍
肺癌是发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一，据《TheLancet》最新公布的CONCORD-3(全球癌症生存分析第三轮)的调研结果显示：大多数国家肺癌患者五年生存率在10-19％之间，中国为19.4-20.2％。据我国癌症中心最新统计数据显示：肺癌位居全国发病首位，每年发病约78.1万，占各类型癌症的比重达到20.55％。在中国及全球范围内，肺癌都是发病率及死亡率最高的癌症。根据肺癌组织病理类型及特征可分为：小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC)，其中约80％-85％的肺癌是非小细胞肺癌(NSCLC)，NSCLC在组织学上可进一步分为四类：(1)肺腺癌；(2)鳞状细胞癌；(3)大细胞癌；(4)其他。肺腺癌又是相对常见的类型。相对于小细胞肺癌恶性程度高，易侵犯、易转移，病程短、进展快，生存期短的特点，非小细胞肺癌生长分裂缓慢，扩散转移晚，恶性程度相对低，病程较长，五年生存率高。虽然近年来肿瘤免疫与分子靶向治疗研究在肺癌研究中有一定突破性的进展，也有大量肺癌的研究成果用于指导临床治疗，但是由于靶点耐受、脱靶效应、表观遗传耐受、肿瘤微环境的变化等因素的影响，目前缺少有效的诊断与治疗方法，而据文献报道高达69％的晚期非小细胞肺癌患者可能具有潜在的、可行的分子靶点，所以，鉴定出一种天然分子能特异性的抑制肺癌发生发展对于该疾病的临床治疗将具有重大意义，而目前对于广大科研者来说，对肺癌新机制新靶点的研究仍然任重而道远。CRTAC1基因，定位于人体第10号染色体，该基因可编码糖基化的细胞外基质蛋白即软骨酸性蛋白1，由软骨细胞分泌，该基因的表达具有组织特异性：在关节深区软骨的区域间基质中表达。已有研究表明：(1)该蛋白质可作为一种新的人类标记物，可用来从培养物中的成骨细胞和间充质干细胞中区分人软骨细胞。(2)该蛋白可能参与细胞与细胞或细胞与基质间的相互作用。据NCBI数据库资料显示，该基因编码的同种型1和同种型2在脑中表达，在肺和软骨细胞中均可检测到同种型1。目前对CRTAC1基因的研究主要集中在基因组学分析，而在基础医学方面，仅在白内障治疗和神经纤维瘤病1型(NF1)发病机制方面有少数有报道。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供调控肺腺癌进展的靶点CRTAC1及其应用，即，提供CRTAC1作为肺腺癌细胞生长增殖和侵袭迁移的靶点及其应用。为了解决上述技术问题，本专利技术提供CRTAC1作为靶点(特异性标志物)在制备诊断和治疗肺腺癌的药物中的应用。作为本专利技术应用的改进：作为肺腺癌细胞生长增殖和侵袭迁移的靶点。作为本专利技术应用的进一步改进：检测CRTAC1的mRNA或者CRTAC1的蛋白表达水平。作为本专利技术应用的进一步改进：用于扩增CRTAC1基因片段的引物(即，特异性扩增CRTAC1mRNA的引物)为：Forward5'-GGTGTCGCCCTGGCTGACTT-3'Reverse5'-GAGAACTTGGGTGAGGCGATGTC-3'。作为本专利技术应用的进一步改进：包括与CRTAC1蛋白特异性结合的抗体。说明：图1C，1E，3A，3D，5A，5D，7D中均使用与CRTAC1蛋白特异性结合的抗体。作为本专利技术应用的进一步改进：CRTAC1基因表达的增强剂用于制备治疗肺腺癌的药物。作为本专利技术应用的进一步改进：药物包含CRTAC1基因表达的增强剂和药物学可接受的载体。作为本专利技术应用的进一步改进：所述增强剂为CRTAC1基因过表达质粒，具体为：制备过表达CRTAC1的药物，用于治疗肺腺癌。作为本专利技术应用的进一步改进，至少为以下任一：过表达CRTAC1抑制肺腺癌细胞增殖；过表达CRTAC1抑制裸鼠皮下成瘤能力；过表达CRTAC1抑制肺腺癌细胞迁移和侵袭；过表达CRTAC1抑制裸鼠肺转移灶的形成。本专利技术首次公开CRTAC1在肺腺癌中的作用，可以在体内外促进肺腺癌细胞的增殖和转移。同时，TCGA和临床标本的一致表明CRTAC1在肺腺癌和肺鳞癌表达增高，但其表达上调仅在肺腺癌中与病人的生存期成正相关，进一步功能实验结果也发现CRTAC1仅在肺腺癌中发挥其生物学功能。由此可见CRTAC1可以作为肺腺癌特异性预后及治疗靶标。本专利技术所采取的技术方案如下：通过生物信息学分析TCGA数据库(CancerGenomeAtlas)中的肺腺癌数据，筛查到CRTAC1在肺腺癌中的表达上调，进一步采用Real-timePCR和免疫组织化学染色(IHC)技术检测CRTAC1在人肺腺癌组织与癌旁组织中的表达情况。体外软琼脂集落形成实验(softagarassay)检测CRTAC1对肺腺癌细胞生长增殖能力的影响,同时体外Transwell实验证明CRTAC1可在体外抑制肺腺癌细胞迁移和浸润。进一步过表达CRTAC1可在体外显著抑制肺腺癌细胞增殖以及迁移和侵袭能力，在体内显著抑制癌细胞肺转移。本专利技术有益效果如下：本专利技术以肺腺癌H1299、A549和HCC827细胞为模型，过表达CRTAC1可在体内外抑制肺腺癌细胞生长增殖和侵袭迁移。可见，可以通过增加外源性CRTAC1水平来治疗肺腺癌。利用实时荧光定量PCR技术，生物信息学分析TCGA数据库等方法检测临床大部分肺腺癌组织中CRTAC1表达均呈显著下调趋势。可见，通过检测CRTAC1的表达，可以辅助诊断肺腺癌。综上所述，本专利技术公开了一个肺腺癌细胞生长增殖和侵袭迁移相关的靶点CRTAC1及其应用。具体而言，本专利技术在细胞水平并结合动物模型及临床组织标本，发现CRTAC1可能具有抑制肺腺癌细胞增殖和转移的作用。本专利技术首次发现CRTAC1作为肺腺癌细胞生长增殖和侵袭迁移的靶点，可在临床肺癌防治方面发挥重要作用。附图说明下面结合附图对本专利技术的具体实施方式作进一步详细说明。图1为CRTAC1在人正常肺上皮细胞及肺正常组织中呈显著高表达；图1中，A为生物信息学分析TCGA数据库中CRTAC1在肺腺癌组织对比正常肺组织的实时荧光定量PCR结果；B为用36对临床肺腺癌标本做real-timePCR分析，对比正常肺组织中CRTAC1的表达水平；C-D为利用免疫组化技术在临床肺腺癌组织及正常组织中检测CRTAC1的蛋白表达水平；E为对比人正常肺上皮细胞与肺腺癌细胞系中CRTAC1蛋白表达情况；Normal代表人肺腺癌癌旁组织，Tumor代表人肺腺癌组织。图2为肺腺癌患者DFS无病生存期分析。图3为过表达CRTAC1在体外显著抑制肺腺癌细胞增殖能力；图3中，A为已在H1299细胞中成功构建过表达CRTAC1稳转细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.CRTAC1作为靶点在制备诊断和治疗肺腺癌的药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.CRTAC1作为靶点在制备诊断和治疗肺腺癌的药物中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征是：作为肺腺癌细胞生长增殖和侵袭迁移的靶点。


3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征是：检测CRTAC1的mRNA或者CRTAC1的蛋白表达水平。


4.根据权利要求3所述的应用，其特征是：用于扩增CRTAC1基因片段的引物为：
Forward5'-GGTGTCGCCCTGGCTGACTT-3'
Reverse5'-GAGAACTTGGGTGAGGCGATGTC-3'。


5.根据权利要求3所述的应用，其特征是：包括与CRTAC...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄海山，常园园，李海英，金红蕾，
申请(专利权)人：温州医科大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33