从芷江野生甜茶中分离三叶苷和根皮苷的方法技术

本发明专利技术提供了一种从芷江野生甜茶中分离三叶苷和根皮苷的方法，包括以下步骤：(1)粉碎、提取；(2)絮凝、离心、超滤；(3)大孔树脂吸附；(4)除杂；(5)梯度洗脱：大孔吸附树脂柱先后用低浓度醇和高浓度乙洗脱，分别收集低浓度醇洗脱液和高浓度醇洗脱液，所述低浓度醇中含有少量羧酸；(6)三叶苷的分离和精制；(7)根皮苷的分离和精制。按照本发明专利技术方法可同时获得两种高含量的芷江野生甜茶天然活性成分，实现了资源综合利用，工艺连贯，可操作性强，设备要求低，生产成本低，适宜于工业化生产；所得三叶苷精品和根皮苷精品纯度和收率都得到了保证和改善。

【技术实现步骤摘要】
从芷江野生甜茶中分离三叶苷和根皮苷的方法
本专利技术涉及芷江野生甜茶天然活性成分的方法，具体涉及从芷江野生甜茶中分离三叶苷和根皮苷的方法。
技术介绍
芷江野生甜茶，学名“多穗石柯茶叶”(LithocarpuspolystachyusRehd)，壳斗科隶属植物，常绿乔木，以野生状态生长在的密林中，集药、糖、茶三种功能于一体。芷江野生甜茶的根、叶及果实可入药，有清热解毒、湿热痢疾、止血活血、利尿、调节内分泌、降血压、降血脂、降血糖、疏通软化心脑血管、抗肿瘤等作用。芷江野生甜茶无糖自甜，滋味鲜醇。因为芷江野生甜茶中含有三叶苷、根皮苷和3-羟基根皮苷，在食品、药物、化妆品、食品添加剂等方面得到广泛应用。其中三叶苷是甜味来源的主角，它的甜度是蔗糖的300倍，但是热量却只有蔗糖的三百分之一，且无毒无副作用，正是各国寻求的天然甜味剂的理想资源。芷江野生甜茶还具有绿茶的功效，茶汤中浸出物含量高、耐冲泡，含有丰富的茶多酚、钙、铁、锰、硒、18种氨基酸和人体所必需但无法生成的各种维生素。三叶苷和根皮苷都属于二氢查尔酮类物质，是芷江野生甜茶中的主要化学成分，具有一些生理活性，现有技术对其的提取多有研究。CN201510187280.6公开了一种分离制备多穗石柯根皮苷单体的方法，是以多穗石柯为原料，经乙醇超声辅助提取、微滤膜过滤、超滤膜过滤、ADS-7树脂吸附、乙醇洗脱、减压浓缩、冷冻干燥等步骤得到根皮苷单体。该方法步骤繁杂、设备投入高、树脂昂贵，所得到的根皮苷产品收率偏低。CN201610610596.6公开了一种提取多穗石柯根皮苷的方法，是以多穗石柯新鲜叶片为原料，经真空冷冻干燥、粉碎、乙醇和碳酸二甲酯混合溶剂超声提取、过滤、AB-8大孔树脂吸附、解吸、干燥等步骤，得到根皮苷。该方法以新鲜叶片为原料，对生产季节有很大的制约，无法常年生产；新鲜原料需要真空冷冻干燥处理，对生产量同样有制约；工艺中用到了大量易燃易爆的有机溶剂，不适合工业化生产。CN201810780192.0公开了从多穗石柯叶片中提取根皮苷的方法，是以多穗石柯叶片为原料，经研磨、乙醇回流提取、冷冻干燥、温水溶解、聚酰胺柱吸附、除杂、解吸、大孔树脂柱吸附、解吸、冷冻干燥等步骤，得到根皮苷干粉。该方法工艺冗繁复杂，需反复柱层析，得到的根皮苷产品收率和含量都偏低。CN201510358050.1公开了多穗柯甜茶中提取三叶苷的工艺，是以干燥的多穗柯甜茶叶为原料，经过醇提，过滤，浓缩，萃取，最后利用高速逆流色谱法得到三叶苷。虽然该专利得到了高纯度的三叶苷，但是使用了昂贵的高速逆流色谱，而且三叶苷的收率并不能令人满意，该专利方法并不适用于工业化的大规模生产三叶苷，而且该专利不涉及芷江野生甜茶中另一种活性成分，即根皮苷的提取。此外，上述公开的方法中，都还有一个共同的技术缺陷——只能得到芷江野生甜茶(多穗石柯)中的一种天然活性成分，没有对原料中的其他天然活性成分分离纯化、加以利用，都造成了自然资源的浪费。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是，克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种可将芷江野生甜茶资源综合利用、同时获得两种芷江野生甜茶天然活性成分，产品收率高、含量高，工艺连贯，可操作性强，设备要求低，生产成本低，适宜于工业化生产的从芷江野生甜茶中分离三叶苷和根皮苷的方法。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案如下：一种从芷江野生甜茶中分离三叶苷和根皮苷的方法，包括以下步骤：(1)粉碎、提取：将干燥的芷江野生甜茶叶片原料粉碎，热水提取，过滤，得提取液；(2)絮凝、离心、超滤：将提取液冷却至室温，加入絮凝剂，离心，离心液用超滤膜过滤；(3)大孔树脂吸附：将超滤膜滤液通过大孔吸附树脂柱；(4)除杂：先用弱碱溶液冲洗树脂柱，水洗至上柱流出液pH值中性或基本无色；再用稀酸溶液冲洗树脂柱，水洗至上柱流出液pH值中性或基本无色；(5)梯度洗脱：大孔吸附树脂柱先后用低浓度醇和高浓度醇洗脱，分别收集低浓度醇洗脱液和高浓度醇洗脱液，所述低浓度醇中含有少量羧酸；(6)三叶苷的分离和精制：取低浓度醇洗脱液，浓缩至无醇，真空干燥，得三叶苷粗品，将三叶苷粗品用醇溶剂热溶解，趁热过滤除去不溶物，滤液在搅拌下滴加温水，自然降温至室温，降温冷却，搅拌析晶，抽滤，晶体再用冰水淋洗，真空干燥，得三叶苷精品。(7)根皮苷的分离和精制：取高浓度醇洗脱液，加入活性炭，加热搅拌，过滤，浓缩，将浓缩液降温冷却，搅拌析晶，抽滤，晶体再用冰水淋洗，真空干燥，得根皮苷精品。优选地，步骤(1)中，所述原料粉碎的粒径为2～5mm，所述热水提取得温度为85～100℃。热水提取优选为两次以上提取，热水总的体积用量为原料重量的18～25倍(L/kg)，总的提取时间为3～8小时。每次提取所用热水的用量和提取时间依次减少，减少的幅度为20％～50％。比如若为两次提取，所用热水的用量依次为原料重量的10～15倍、8～10倍(L/kg)，提取的时间依次为2～3小时、1～2小时。热水提取的目的是将芷江野生甜茶原料中易溶于水的三叶苷、根皮苷等水溶性成分浸出。多次提取能够更充分地将目标提取物浸出。优选地，步骤(2)中，所述的絮凝剂为聚合氯化铝(PAC)和/或聚丙烯酰胺(PAM)，絮凝剂的用量均为原料重量的0.5％～2％。加入絮凝剂的目的，是将提取液中的多酚、鞣质、蛋白质等杂质絮凝并沉降。优选地，步骤(2)中，所述的离心没有特别的限定，能够除去絮凝沉淀的离心方式皆可。优选为卧螺离心。卧螺离心的目的是除去絮状沉淀，从而除去多酚、鞣质、蛋白质等杂质。优选地，步骤(2)中，所述超滤膜的截留分子量为1000～2000Da，超滤的压力为0.2～0.4Mpa。超滤的目的，是除去离心液中残留的絮凝剂以及无法絮凝的少量大分子杂质。优选地，步骤(3)中，所述大孔吸附树脂的型号为LX-38、LX-32、LX-162、LX-157、LX-158、D101C、LX-T28、LX-T81、LSA-10、LX-12、LX-100B，大孔吸附树脂的用量为原料重量的0.5～2倍(L/kg)，大孔吸附树脂柱的高径比为2～6:1，超滤膜滤液通过大孔吸附树脂柱的流速为0.5～2.0BV/h。优选地，步骤(4)中，所述弱碱溶液为碳酸钠、碳酸钾、碳酸氢钠、碳酸氢钾中至少一种的水溶液，弱碱溶液的质量百分比浓度为0.5％～2％，弱碱溶液的用量为2～3BV，弱碱溶液通过树脂柱的流速为1～2BV/h。优选地，步骤(4)中，所述稀酸溶液为盐酸、硫酸、水溶液，稀酸溶液的质量百分比浓度为0.1％～1％，稀酸溶液的用量为2～3BV，稀酸溶液通过树脂柱的流速为1～2BV/h。使用弱碱溶液和稀酸溶液冲洗树脂柱的目的，是除去吸附在树脂上的色素及其它杂质。优选地，步骤(5)中，所述低浓度醇和高浓醇的醇为甲醇，乙醇，正丙醇，异丙醇中的至少一种，优选为乙醇。所述低浓度醇中还溶有少量的羧酸，其体积百分浓度为0.3～0.5％；所述羧酸选自醋酸，苹果酸，柠檬酸，苯甲酸；优选为醋酸。...

【技术保护点】
1.一种从芷江野生甜茶中分离三叶苷和根皮苷的方法，包括以下步骤：/n(1)粉碎、提取：将干燥的芷江野生甜茶叶片原料粉碎，热水提取，过滤，得提取液；/n(2)絮凝、离心、超滤：将提取液冷却至室温，加入絮凝剂，离心，离心液用超滤膜过滤；/n(3)大孔树脂吸附：将超滤膜滤液通过大孔吸附树脂柱；/n(4)除杂：先用弱碱溶液冲洗树脂柱，水洗至上柱流出液pH值中性或基本无色；再用稀酸溶液冲洗树脂柱，水洗至上柱流出液pH值中性或基本无色；/n(5)梯度洗脱：大孔吸附树脂柱先后用低浓度醇和高浓度醇洗脱，分别收集低浓度醇洗脱液和高浓度醇洗脱液，所述低浓度醇中含有少量羧酸；/n(6)三叶苷的分离和精制：取低浓度醇洗脱液，浓缩至无醇，真空干燥，得三叶苷粗品，将三叶苷粗品用醇溶剂热溶解，趁热过滤除去不溶物，滤液在搅拌下滴加温水，自然降温至室温，降温冷却，搅拌析晶，抽滤，晶体再用冰水淋洗，真空干燥，得三叶苷精品；/n(7)根皮苷的分离和精制：取高浓度醇洗脱液，加入活性炭，加热搅拌，过滤，浓缩，将浓缩液降温冷却，搅拌析晶，抽滤，晶体再用冰水淋洗，真空干燥，得根皮苷精品。/n

【技术特征摘要】
1.一种从芷江野生甜茶中分离三叶苷和根皮苷的方法，包括以下步骤：
(1)粉碎、提取：将干燥的芷江野生甜茶叶片原料粉碎，热水提取，过滤，得提取液；
(2)絮凝、离心、超滤：将提取液冷却至室温，加入絮凝剂，离心，离心液用超滤膜过滤；
(3)大孔树脂吸附：将超滤膜滤液通过大孔吸附树脂柱；
(4)除杂：先用弱碱溶液冲洗树脂柱，水洗至上柱流出液pH值中性或基本无色；再用稀酸溶液冲洗树脂柱，水洗至上柱流出液pH值中性或基本无色；
(5)梯度洗脱：大孔吸附树脂柱先后用低浓度醇和高浓度醇洗脱，分别收集低浓度醇洗脱液和高浓度醇洗脱液，所述低浓度醇中含有少量羧酸；
(6)三叶苷的分离和精制：取低浓度醇洗脱液，浓缩至无醇，真空干燥，得三叶苷粗品，将三叶苷粗品用醇溶剂热溶解，趁热过滤除去不溶物，滤液在搅拌下滴加温水，自然降温至室温，降温冷却，搅拌析晶，抽滤，晶体再用冰水淋洗，真空干燥，得三叶苷精品；
(7)根皮苷的分离和精制：取高浓度醇洗脱液，加入活性炭，加热搅拌，过滤，浓缩，将浓缩液降温冷却，搅拌析晶，抽滤，晶体再用冰水淋洗，真空干燥，得根皮苷精品。


2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述原料粉碎的粒径为2～5mm，所述热水提取的温度为85～100℃。


3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的絮凝剂为聚合氯化铝(PAC)和/或聚丙烯酰胺(PAM)，絮凝剂的用量均为原料重量的0.5％～2％。


4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，所述超滤膜的截留分子量为1000～2000Da，超滤的压力为0.2～0.4Mpa。


5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述大孔吸附树脂的用量为原料重量的0.5～2倍(L/kg)，大孔吸附树脂柱的高径比为2～6:1，超滤膜滤液通过大孔吸附树脂柱的流速为0.5～2.0BV/h。


6.如权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：李伟，黄华学，
申请(专利权)人：湖南华诚生物资源股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43