一种新的多肽--人钠钾泵14.30和编码这种多肽的多核苷酸制造技术

本发明专利技术公开了一种新的多肽－人钠钾泵１４．３０，编码此多肽的多核苷酸和经ＤＮＡ重组技术产生这种多肽的方法。本发明专利技术还公开了此多肽用于治疗多种疾病的方法，如恶性肿瘤，血液病，ＨＩＶ感染和免疫性疾病和各类炎症等。本发明专利技术还公开了抗此多肽的拮抗剂及其治疗作用。本发明专利技术还公开了编码这种新的人钠钾泵１４．３０的多核苷酸的用途。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术描述了一种新的多肽——人钠钾泵14.30，以及编码此多肽的多核苷酸序列。本专利技术还涉及此多核苷酸和多肽的制备方法和应用。在细胞中维持离子浓度的稳定对细胞的动态平衡和功能都是至关重要的。在真核细胞中高浓度的钾离子和低浓度的钠离子浓度差是由钠-钾-ATP酶维持的。钠-钾-ATP酶又称概-钾泵，其作用是在消耗代谢能的情况下逆浓度差将细胞内的钠离子移出膜外，同时把细胞外的钾离子移入膜内，从而保持了膜内高钾膜外高钠的不均衡离子分布。钠钾泵是镶嵌在膜的脂质双分子层的一种特殊蛋白质，它除了具有对钠离子，钾离子的转运功能外，还具有ATP酶的活性，可以分解ATP使之释放能量，并能利用此能量进行钠离子和钾离子的主动转运。钠钾泵的活性可以被激素，第二信使，蛋白激酶Al和蛋白激酶C所调控。钠钾泵由两个亚基构成。对于钠离子和钾离子的转运来说，这两个亚基都是不可缺少的。α亚基包含阳离子和ATP结合位点，常被称为催化亚基。β亚基与泵的结构稳定有关。并且影响对钾离子的敏感程度。J.B.C，Volume 272，Number19，Issue of May 9，1997 12366-12372细胞膜上的钠钾泵活动的意义是1、由钠钾泵活动造成的细胞内高钾离子，是许多代谢反应进行的必须条件，是神经和肌肉等组织具有兴奋性的基础；2、如果细胞允许大量细胞外钠离子进入膜内，必然会导致过多水分子进入膜内，将引起细胞肿胀而破坏细胞的结构；3、能够建立起一种势能储备。通过基因芯片的分析发现，在膀胱粘膜、PMA+的Ecv304细胞株、LPS+的Ecv304细胞株胸腺、正常成纤维细胞1024NC、Fibroblast，生长因子刺激，1024NT、疤痕成fc生长因子刺激，1013HT、疤痕成fc未用生长因子刺激，1013HC、膀胱癌建株细胞EJ、膀胱癌旁、膀胱癌、肝癌、肝癌细胞株、胎皮、脾脏、前列腺癌、空肠腺癌、贲门癌中，本专利技术的多肽的表达谱与人钠钾泵的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为人钠钾泵14.30。通过基因芯片的分析发现，在胎脑、原液培养的L02细胞株、0.5％FBS培养液37.C饥饿的L02细胞株、胎肾、直肠癌，胎肝、成人肝、肝癌、胎肺、胎脾、胎心、成人心、成人睾丸、胎胃、成人胃中，本专利技术的多肽的表达谱与人钠钾泵的表达谱非常近似，因此二者功能也可能类似。本专利技术被命名为人钠钾泵14.30。由于如上所述人钠钾泵14.30蛋白在调节细胞分裂和胚胎发育等机体重要功能中起重要作用，而且相信这些调节过程中涉及大量的蛋白，因而本领域中一直需要鉴定更多参与这些过程的人钠钾泵14.30蛋白，特别是鉴定这种蛋白的氨基酸序列。新人钠钾泵14.30蛋白编码基因的分离也为研究确定该蛋白在健康和疾病状态下的作用提供了基础。这种蛋白可能构成开发疾1病诊断和/或治疗药的基础，因此分离其编码DNA是非常重要的。本专利技术的一个目的是提供分离的新的多肽——人钠钾泵14.30以及其片段、类似物和衍生物。本专利技术的另一个目的是提供编码该多肽的多核苷酸。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人钠钾泵14.30的多核苷酸的重组载体。本专利技术的另一个目的是提供含有编码人钠钾泵14.30的多核苷酸的基因工程化宿主细胞。本专利技术的另一个目的是提供生产人钠钾泵14.30的方法。本专利技术的另一个目的是提供针对本专利技术的多肽——人钠钾泵14.30的抗体。本专利技术的另一个目的是提供了针对本专利技术多肽——人钠钾泵14.30的模拟化合物、拮抗剂、激动剂、抑制剂。本专利技术的另一个目的是提供诊断治疗与人钠钾泵14.30异常相关的疾病的方法。本专利技术涉及一种分离的多肽，该多肽是人源的，它包含具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽、或其保守性变体、生物活性片段或衍生物。较佳地，该多肽是具有SEQ ID NO2氨基酸序列的多肽。本专利技术还涉及一种分离的多核苷酸，它包含选自下组的一种核苷酸序列或其变体(a)编码具有SEQ ID No.2氨基酸序列的多肽的多核苷酸；(b)与多核苷酸(a)互补的多核苷酸；(c)与(a)或(b)的多核苷酸序列具有至少70％相同性的多核苷酸。更佳地，该多核苷酸的序列是选自下组的一种(a)具有SEQ ID NO1中17-409位的序列；和(b)具有SEQ ID NO1中1-1114位的序列。本专利技术另外涉及一种含有本专利技术多核苷酸的载体，特别是表达载体；一种用该载体遗传工程化的宿主细胞，包括转化、转导或转染的宿主细胞；一种包括培养所述宿主细胞和回收表达产物的制备本专利技术多肽的方法。本专利技术还涉及一种能与本专利技术多肽特异性结合的抗体。本专利技术还涉及一种筛选的模拟、激活、拮抗或抑制人钠钾泵14.30蛋白活性的化合物的方法，其包括利用本专利技术的多肽。本专利技术还涉及用该方法获得的化合物。本专利技术还涉及一种体外检测与人钠钾泵14.30蛋白异常表达相关的疾病或疾病易感性的方法，包括检测生物样品中所述多肽或其编码多核苷酸序列中的突变，或者检测生物样品中本专利技术多肽的量或生物活性。本专利技术也涉及一种药物组合物，它含有本专利技术多肽或其模拟物、激活剂、拮抗剂或抑制剂以及药学上可接受的载体。本专利技术还涉及本专利技术的多肽和/或多核苷酸在制备用于治疗癌症、发育性疾病或免疫性疾病或其它由于人钠钾泵14.30表达异常所引起疾病的药物的用途。本专利技术的其它方面由于本文的技术的公开，对本领域的技术人员而言是显而易见的。本说明书和权利要求书中使用的下列术语除非特别说明具有如下的含义“核酸序列”是指寡核苷酸、核苷酸或多核苷酸及其片段或部分，也可以指基因组或合成的DNA或RNA，它们可以是单链或双链的，代表有义链或反义链。类似地，术语“氨基酸序列”是指寡肽、肽、多肽或蛋白质序列及其片段或部分。当本专利技术中的“氨基酸序列”涉及一种天然存在的蛋白质分子的氨基酸序列时，这种“多肽”或“蛋白质”不意味着将氨基酸序列限制为与所述蛋白质分子相关的完整的天然氨基酸。蛋白质或多核苷酸“变体”是指一种具有一个或多个氨基酸或核苷酸改变的氨基酸序列或编码它的多核苷酸序列。所述改变可包括氨基酸序列或核苷酸序列中氨基酸或核苷酸的缺失、插入或替换。变体可具有“保守性”改变，其中替换的氨基酸具有与原氨基酸相类似的结构或化学性质，如用亮氨酸替换异亮氨酸。变体也可具有非保守性改变，如用色氨酸替换甘氨酸。“缺失”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中一个或多个氨基酸或核苷酸的缺失。“插入”或“添加”是指在氨基酸序列或核苷酸序列中的改变导致与天然存在的分子相比，一个或多个氨基酸或核苷酸的增加。“替换”是指由不同的氨基酸或核苷酸替换一个或多个氨基酸或核苷酸。“生物活性”是指具有天然分子的结构、调控或生物化学功能的蛋白质。类似地，术语“免疫学活性”是指天然的、重组的或合成蛋白质及其片段在合适的动物或细胞中诱导特定免疫反应以及与特异性抗体结合的能力。“激动剂”是指当与人钠钾泵14.30结合时，一种可引起该蛋白质改变从而调节该蛋白质活性的分子。激动剂可以包括蛋白质、核酸、碳水化合物或任何其它可结合人钠钾泵14.30的分子。“拮抗剂”或“抑制物”是指当与人钠钾泵14.30结合时，一种可封闭或调节人钠钾泵14.30的生物学活性或免疫学活性的分子。拮抗剂和抑制物可以包括蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的多肽－人钠钾泵１４．３０，其特征在于它包含有：ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２所示的氨基酸序列的多肽、或其多肽的活性片段、类似物或衍生物。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：毛裕民，谢毅，
申请(专利权)人：上海博德基因开发有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]