氯丙嗪分离测定血清蛋白（γ)的肝功试验技术制造技术

本发明专利技术以新颖的氯丙嗪为试剂，涉及该试剂的制备方法，用该试剂简易、快速、微量分离测定血清蛋白（γ）含量，检测肝实质功能损害程度的ＣＰＺ法。其技术特征是：将盐酸氯丙嗪注射液加入蒸馏水中，向其中加入适量醋酸铵缓冲剂，使该试剂的ｐＨ为５．８～６．０，此液简称ＣＰＺ试剂；取定量血清，向其中加入ＣＰＺ试剂，置室温１０ｍｉｎ，用７２１型分光光度计，测得吸光度查标准曲线，即得单位数乘常数测得血清（γ）含量；用醋纤膜电泳及免疫单扩法证实肝实质损害物是以ＩｇＭ、ＩｇＧ为主的Ｉｇ的改变，即血清γ增高。此法在肝病的诊断、预防、治疗病毒肝炎，疗效观察，恶性瘤早期预测中应用。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

医学检验，氯丙嗪法/诊断应用，血清γ球蛋白/分析。本专利技术以新颖的氯丙嗪为试剂，涉及该试剂的制备方法、用该试剂简易、快速、微量分离测定血清蛋白(γ)含量，检测肝实质功能损害程度的试验技术(简称CPZ法)。二、现有技术状况肝病对人体健康危害最大，它一直缺临床理想的诊断指标。本世纪二十年代初，前人就研究用一种试剂与血清蛋白形成絮凝(浊度)的方法作肝功试验。1960年Reiphold综述报道已研试过的各种试剂达80余种(不含盐酸氯丙嗪)，有金属和多种有机化合物，胶体等，到六十年代常用的只有少数几种，如我国有麝香草酚、锌等。此类电解质部份沉淀球蛋白，迄今未找到分离白蛋白与球蛋白的理想方法。自蛋白电泳的建立，证实凡肝病血清γ球蛋白常有增高，监测血清γ的改变，对肝功测定具有极重要的意义，更新人们对肝功试验的认识。自1992.7国家卫生部淘汰ZnTT等352项检测法，肝功试验仅剩ALT、BIL两项，在该领域内是一项空白，至今对比研究尚未深入。据查新结果国内外未见对此项目的研究，在此之前未找到简易、快速、体外分离测定血清蛋白(γ)含量的试剂和方法。血清蛋白电泳就成唯一检测法，但电泳受条件及诸多因素影响，重复性差，测定结果(γ％)常有差异，设备贵，方法复杂(血清T.P、AIb、蛋白电泳三种联合检测法测得其含量)。以下两地化验单为当前肝功试验模式，其检出率≤50％，检测时间长(1～2天)，检测费高(40～80元/次)。华西医科大学附属第一医院检验科生化报告单项 目 缩写测定值 单位参考范围 丙氨酸氨基转移酶(ALT)18.00 IU/L5-40 川北医学院附属医院检验科生化检验申请单代码 检验项目05050 55元 肝功1(ALT+AST+AIP+TP+ALB+CLB+TBIL+DBIL+GGT+LDH)05051 45元 肝功2(ALT+AST+ALP+TP+ALB+GLB+TBIL+DBIL)05052 35元 肝功3(ALT+AST+ALP+TP+ALB+CLB)05061 30元 血清蛋白电泳上单用美国贝克曼Cx7型生化分析仪(100万/台)测肝功，其项目仅增加四种酶，此类酶测定在肝功试验中特异性差，较ALT临床意义小。a.酶(ALT)测定酶活性增高是细胞受损的速率，而不是受损程度的指征。特异性与稳定性差，测定结果常有差异。急性肝病酶可升高，慢性肝病(伴感染外)酶活性趋于正常或降低，基层(地区以下)仅作酶一项，病人受害。b.血浆蛋白测定①白蛋白与球蛋白(除γ外)由肝细胞合成(先天产生)，白蛋白半寿期20～26天，肝代偿力强，故肝病早期可无明显改变，只有当肝损害达到一定程度和病程后血清T.P、AIb、A/G的改变才有意义，而临床上最重要的问题是肝病的早期诊断。②白蛋白与球蛋白PI相近(a15.66，a25.06，β5.12)，迄今未找到分离白蛋白与球蛋白的理想方法。1971 Doumas提出溴甲酚氯法(BCG)，反应式pH4.2＜白蛋白与球蛋白PI(a1a2β)，距白蛋白PI较近(0.68)，慢反应有球蛋白(γ外)，测定结果常有差异。本项与国内外已有的同类技术全面综合对比情况肝病早期体征多缺乏特异性，临床症状表现不明显，常依靠肝功测定，血清γ增加与肝实质损伤的范围和程度相平行。综上所述，目前肝功测定项目检出率低，本项用于体外测定血清γ含量，同时具有敏感、特异、简易、快速、微量等特点的诊断指标。通过Maclagan标准曲线推算出一个单位的常数值，其推算值与当今公认的价值最大的蛋白电泳无显著差异，有较好的相关性(P＜0.001)。本项对324例病人与蛋白电泳测定血清γ比较分析，结果表明CPZ法的敏感性、准确度，特异性均高(＞95％)，故对肝病的诊断具有很高的实用价值。肝穿病人常不易接受，痛苦又不安全。同国内外检测法相比较，CPZ法将传统式的用无机沉淀蛋白质的阳离子为有机的阴离子，盐酸氯丙嗪是理想的γ球蛋白沉淀剂，其pH5.8～6.0与球蛋白PI相近，氯丙嗪是较好配位剂的有机显色剂，其选择性和灵敏度高，干扰因素少(CPZ法对Hb CE0.02329＜Eu0.3＜0.5)。加入适量的醋酸铵作缓冲剂使体系的pH稳定，确保测定的可靠性，故是当今检测肝病最理想简易的方法。本专利技术的目的在于提供一类新的具有检测价值的氯丙嗪试剂。本专利技术的另一目的是提供一种由氯丙嗪组合的本专利技术试剂的方法。本专利技术进一步的目的是提供一种简易、快速、敏感、特异测定血清蛋白(γ)含量的试剂和方法，检测肝实质损害程度及临床理想的诊断指标。作肝病的诊断，转归，疗效的观察，健康群体肝病的筛查和早期诊断，恶性瘤早期预测。本专利技术的另一目的是提供上述试剂分离血清蛋白(γ)在预防、治疗病毒性肝炎的用途。专利技术人由盐酸氯丙嗪注射液(chlorpromazini HCl)组成一种新的试剂，该试剂具有多种有价值的生化特性，这些特性是现有化合物所不具备的。本专利技术新的氯丙嗪试剂用下述通式(1)表示其中CPZ表示氯丙嗪。本专利技术试剂由盐酸氯丙嗪注射液组成，该方法包括以下步骤a.将盐酸氯丙嗪注射液(chlorpromazimi HCl)加入蒸馏水中，所述蒸馏水必须新鲜或冷却煮沸过；b.上液，向其中加入醋酸铵(NH4Ac)缓冲剂，除此缓冲剂不得加入任何电解质；c.CPZ试剂pH5.8～6.0；d.置棕色瓶内保存。本专利技术新的测定血清蛋白(γ)含量的CPZ法，该方法包括以下步骤a.定量血清，向其中加入CPZ试剂，置室温10min；b.测吸光度，用721型分光光度计，波长650nm，测得各管吸光度查标准曲线即得单位数；c.计算方法，单位数×常数(1.5108765g/L)＝γg/L。本专利技术新的分离血清蛋白(γ)的CPZ法，该方法包括以下步骤a.制备CPZ法沉淀物；b.定量血清，向其中加入CPZ试剂，置室温10min；c.离心，弃去上清液，用CPZ试剂充分洗涤，解聚；d.作醋纤膜电泳和免疫单扩法分析；e.以0.85％NaCl为解聚剂。三、本技术方案的效果专利技术人发现本专利技术试剂分离血清(γ)球蛋白，对肝病具有预防、治疗作用，并增进肝脏解毒和免疫功能的肝保护剂。本专利技术试剂测定血清蛋白(γ)含量，在临床检验中显示出优异的对早期肝病的诊断作用，疗效观察，转归，恶性瘤早期预测的作用，它比目前美国生化仪测定肝功，蛋白电泳，肝穿作病理观察效果好。本专利技术试剂，简易、快速(10min)、敏感、特异检测肝功，特别具有健康群体肝病的普查和筛选作用。本专利技术用醋纤膜电泳及免疫单扩法证实肝实质损害是以IgM(急慢性)、IgG(慢性)为主的Ig的增高，这说明免疫反应是致肝脏病变的重要因素(继发性良性无性细胞系Ig血症)，是B淋巴细胞受抗原刺激后增殖分化为浆细胞的分泌产物。血清中相对恒定的各种Ig含量的异常，即血清蛋白(γ)增高，血清蛋白电泳时，Ig抗体活性主要在γ球蛋白部位。病原(病毒、有害物)→刺激肝脏_Ig细胞异常增殖→Ig增高(后天产生，不受肝代偿力的影响)→肝病变。因产生Ig的无性细胞系的浆细胞发生增殖，故在病人血清中检出异常增高的1-2种或以上的异常Ig(此Ig的结构是均一性的，抗体活性极低)，称M蛋白(M成份)。IgM是最大的Ig(巨球蛋白，分子量19万，沉降系数19s)，血清M成本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种氯丙嗪分离测定血清蛋白（γ）的肝功试验技术，其特征是：将盐酸氯丙嗪注射液加入蒸馏水中，再向其中加入适量醋酸铵缓冲剂，使该试剂的ｐＨ为５．８～６．０，此液简称ＣＰＺ试剂；以ＣＰＺ试剂分离血清γ球蛋白；以ＣＰＺ试剂测定血清蛋白（γ）含量的肝功试验技术，检测肝实质功能损害程度的ＣＰＺ法。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：郝士瑛，罗先海，
申请(专利权)人：西南石油学院，
类型：发明
国别省市：51[中国|四川]