具有诊断治疗价值的BRCAA1蛋白与一个乳腺癌抗原表位肽制造技术

本发明专利技术是利用基因差异筛选技术，从乳腺癌患者组织标本中筛选出一个乳腺癌相关抗原基因ｂｒｃａａｌ基因（ｂｒｃａａｌ，Ｎｏ．ＡＦ２０８０４５，１ｑ４２．１－ｑ４３）此基因的相应蛋白ＢＲＣＡＡＩ蛋白被表达，它的功能与Ｒｂ结合蛋白密切相关，具有调节细胞生长分化的功能；运用计算机软件预测技术结合临床试验从乳腺癌相关抗原基因ｂｒｃａａｌ对应的蛋白中识别出一个新的乳腺癌抗原表位，定位于乳腺癌细胞浆，它的氨基酸序列位于第６１０－６１９位点，它的肽序列为ＳＳＫＫＱＫＲＳＨＫ，它的血清抗体滴度在乳腺癌患者的血清中显著高于健康人群；此抗原与乳腺癌患者的血液转移与淋巴结转移密切相关，适用于临床乳腺癌患者的早期血清学诊断与预后的判断，此序列也可用作治疗靶点。（*该技术在2024年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及具有临床诊断治疗价值的BRCAA1蛋白与一个新的乳腺癌抗原表位的识别。乳腺癌是一种常见的妇科肿瘤，可分为遗传性乳腺癌与散发性乳腺癌两种。遗传性乳腺癌只占15％左右，散发性乳腺癌占85％左右。寻找乳腺癌的抗原表位与制备相应抗体是发展特异性免疫诊断与免疫治疗的一个中心目标。乳腺癌相关抗原能够起始主动的、特异的抗体反应与细胞免疫反应。因此，这些特异性的乳腺癌抗体能够被用作探针，识别乳腺癌相关抗原与基因，有利于乳腺癌的诊断、治疗与预防。我们利用基因筛选技术从乳腺癌患者的组织中筛选出一个新的乳腺癌相关抗原基因，即brcaa1基因(breast cancer associated antigen 1 gene，AF208045，1q42.1-q43.全长93.857kb，包含18个外显子与17个内含子)。此基因已被证实在乳腺癌、肺癌、结肠癌、宫颈癌等中呈上调表达，在正常组织中呈下调表达。我们利用RTS技术大量表达了有活性的BRCAA1蛋白。研究表明，BRCAA1蛋白，是Rb binding protein家族中的一个成员，具有调节Rb蛋白的功能，具有调节细胞生长、分化的功能。我们用GCG分析软件(Genetics ComputerGroup，USA)分析了BRCAA1蛋白的hydrophilicity，surface probability，flexibility，antigen index，secondary structure and glycosyl.根据预测结果，定位于乳腺癌细胞浆，它的氨基酸序列位于第610-619位点之间，存在一个新的抗原表位，它的肽序列为SSKKQKRSHK。我们用此抗原表位肽从患者血清中筛选出了阳性血清。我们也制备了相应抗体，用ELISA方法检测了此抗原表位肽相应抗体在乳腺癌患者的血清与健康者血清之间的滴度水平，结果表明乳腺癌患者的血清滴度水平显著高于健康患者，具有统计学差异(p＜0.01)。免疫沉淀试验与竞争性抑制试验表明SSKKQKRSHK是最短的有效抗原表位肽。免疫组织化学染色表明此抗原表位定位于乳腺癌细胞浆。60例样本筛查表明，此抗原表位肽的表达与雌激素受体、孕激素受体的表达状态密切相关，与乳腺癌患者的转移预后高度密切相关。因此，此抗原表位肽及其相应抗体对乳腺癌患者具有初步筛查、辅助诊断、预测患者预后的功能。研究表明，BRCAA1蛋白可能是Rb binding protein家族中的一个成员，具有调节Bb蛋白的功能。Bb蛋白是一个重要的抗癌基因蛋白，具有调控细胞周期与细胞生长分化的功能。因此，BRCAA1蛋白可能也具有调节细胞生长与分化的功能。因此，此蛋白具有潜在的治疗价值。结合一些诊断技术，如PCR技术，ELISA技术，基因芯片与蛋白芯片技术，利用此蛋白及所筛选出的抗原表位肽，可开发出系列诊断试剂盒，或作为诊断芯片的靶基因或靶蛋白，具有临床应用前景。权利要求1.一个具有诊断和治疗乳腺癌作用的BRCAA1蛋白和抗原表位肽，其特征是一个新的乳腺癌相关抗原蛋白BRCAA1，即brcaal基因，被表示为AF208045，1q42.1-q43.全长93.857kb，包含18个外显子与17个内含子；一个抗原表位肽，它的肽序列为SSKKQKRSHK，定位于乳腺癌细胞浆，它的氨基酸序列被识别为NO.610--619sitesin BRCAA1 protein.2.如权利要求1的一个具有诊断和治疗乳腺癌作用的BRCAA1蛋白和抗原表位肽，其特征是所述的一个新的乳腺癌相关抗原蛋白BRCAA1是Rb结合蛋白家族的成员之一，具有调节细胞生长分化的功能.3.如权利要求1的一个具有诊断和治疗乳腺癌作用的BRCAA1蛋白和抗原表位肽，其特征是一个乳腺癌抗原表位肽SSKKQKRSHK，被识别为NO.610--619sites in BRCAA1 protein，对乳腺癌患者具有早期血清学诊断，初步筛查，辅助诊断治疗，预测患者预后的功能.4.如权利要求1和权利要求2、3的一个具有诊断和治疗乳腺癌作用的BRCAA1蛋白和抗原表位肽，其特征是所述的BRCAA1蛋白和抗原表位SSKKQKRSHK肽与其相对应的基因片段可作为ELiSA、免疫-PCR技术、基因芯片与蛋白芯片上的靶基因或靶蛋白.全文摘要本专利技术是利用基因差异筛选技术，从乳腺癌患者组织标本中筛选出一个乳腺癌相关抗原基因brcaal基因(brcaal，No.AF208045，1q42.1－q43)此基因的相应蛋白BRCAAI蛋白被表达，它的功能与Rb结合蛋白密切相关，具有调节细胞生长分化的功能；运用计算机软件预测技术结合临床试验从乳腺癌相关抗原基因brcaal对应的蛋白中识别出一个新的乳腺癌抗原表位，定位于乳腺癌细胞浆，它的氨基酸序列位于第610－619位点，它的肽序列为SSKKQKRSHK，它的血清抗体滴度在乳腺癌患者的血清中显著高于健康人群；此抗原与乳腺癌患者的血液转移与淋巴结转移密切相关，适用于临床乳腺癌患者的早期血清学诊断与预后的判断，此序列也可用作治疗靶点。文档编号G01N33/96GK1657940SQ200410025128公开日2005年8月24日 申请日期2004年6月11日 优先权日2004年6月11日专利技术者崔大祥, 高天文, 金桂秋, 伍爱群 申请人:崔大祥, 高天文, 金桂秋本文档来自技高网...

【技术保护点】
一个具有诊断和治疗乳腺癌作用的ＢＲＣＡＡ１蛋白和抗原表位肽，其特征是：一个新的乳腺癌相关抗原蛋白ＢＲＣＡＡ１，即ｂｒｃａａｌ基因，被表示为：ＡＦ２０８０４５，１ｑ４２．１－ｑ４３．全长９３．８５７ｋｂ，包含１８个外显子与１７个内含子；一个抗原表位肽，它的肽序列为ＳＳＫＫＱＫＲＳＨＫ，定位于乳腺癌细胞浆，它的氨基酸序列被识别为ＮＯ．６１０－－６１９ｓｉｔｅｓｉｎＢＲＣＡＡ１ｐｒｏｔｅｉｎ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：崔大祥，高天文，金桂秋，伍爱群，
申请(专利权)人：崔大祥，高天文，金桂秋，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]