诊断宫颈癌的方法技术

一种确定受检人是否被人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）的一种致癌病毒株感染的方法，其特征在于，所述方法包括：　　　　将得自所述受检者的样品与一种结合在固体支持物上的ＰＤＺ结构域多肽接触；并　　　　通过使用一种ＨＰＶ　　Ｅ６结合伴侣检测与所述ＰＤＺ结构域多肽结合的任何致癌ＨＰＶ　　Ｅ６蛋白的存在，　　　　其中，致癌ＨＰＶ　　Ｅ６蛋白的存在表明受检者被ＨＰＶ的一种致癌病毒株感染。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及诸如在某些人乳头状瘤病毒(HPV)感染中所观察到的来源于致病生物的生物学标记的检测以及运用这样的诊断法以鉴别受到感染并可能导致癌变或其他机能紊乱的样本。所述专利技术也公开了作为一种肿瘤诊断手段用于在临床样本中检测致癌的HPV E6蛋白的组合物、方法和试剂盒。
技术介绍
宫颈癌是妇女中第二位最常见的肿瘤，宫颈癌与目前99.7％的高危险性人乳头状瘤病毒感染有关。现在，每年在美国妇女中诊断出12,000个侵入性宫颈癌新病例，这导致每年5,000人死亡。而且，全球范围内每年约有400,000例的宫颈癌并有近200,000个死亡病例。人乳头状瘤病毒(HPV)是全球性传播疾病的最常见的原因之一。大体上，50-75％的性活跃的男性和女性在其生命的某一时点会招致生殖器HPV感染。仅在美国估计每年有5百50万人感染HPV，目前至少有2千万的感染者。100多个不同的HPV纯病毒株按照其与子宫颈癌或与良性子宫颈损伤或子宫颈发育异常的关系大致分成了高危险性和低危险性亚类。大量证据指出HPV是宫颈癌的病原物质。1980年的多项研究报道了在子宫颈发育异常、肿瘤以及源自宫颈癌的细胞系中存在HPV变种。进一步的研究表明致癌的HPV 18基因组的E6-E7区域在宫颈癌细胞中被选择性保留，这说明HPV感染可能是引发癌变的原因，而且维持细胞永生化或癌变状态需要E6-E7区域的持续表达。第二年，Sedman等人证实了在培养物中，来自HPV 16的E6-E7基因足以引起人角质化细胞的永生化。Barbosa等人证实，虽然来自高危险性HPV的E6-E7基因能够转化细胞系，来自诸如HPV 6和HPV 11的低危险性或非致癌变种的E6-E7区域不能转化人角质化细胞。最近，Pillai等人对623例处于肿瘤发展不同阶段的子宫颈组织样本通过原位杂交检测了HPV 16和18的感染并通过免疫细胞化学检测了E6蛋白的表达，发现了组织学异常与HPV感染之间的显著相关性。现行的治疗策略专注于实际的子宫颈发育异常而不是更深层次的HPV感染。医生每年对子宫颈发育异常的妇女进行筛查，并采用包括冷冻手术、激光切除和切除手术在内的表面切除技术进行治疗。随着疾病的发展，治疗手段变得更具侵略性，这包括了部分或完全子宫切除、放射治疗或化学治疗。对致癌的HPV感染的早期准确诊断以及针对引发癌变的HPV感染的治疗，通过疾病进程的早期干预以防止宫颈癌的发展，存在重大的需求。目前已有描述的人乳头状瘤病毒与局限于皮肤上皮层、或口腔、咽喉、呼吸道以及最重要的与肛门和生殖器黏膜损害相关。包括HPV6和11在内的特殊的人乳头状瘤病毒类型经常引起良性的黏膜损伤，而其他诸如HPV 16和18的病毒类型以及许多其他病毒株主要在高度损害和肿瘤中被发现。感染黏膜表面的个别类型的人乳头状瘤病毒(HPV)被认为可能是引发子宫颈、肛门、阴茎、咽喉和口腔癌变、偶然引发甲周瘤以及良性的肛门与生殖器疣的因素。采用对特殊HPV类型进行鉴定的方法来鉴别具有恶化风险的癌变前损伤的患者。虽然在一些受人乳头状瘤病毒感染的病例中存在可见的肛门和生殖器损伤，大部分受到HPV生殖道感染的个体不具有临床明显病征，但是可以采用子宫颈涂片中存在的细胞形态特征分析来检测HPV感染。巴氏试验(Papanicolaou test)是一种有效的筛查手段，但是由于存在假阳性和假阴性测试结果，这些试验遗漏了高比例的HPV感染人群。此外，由于对检测结果的解读需要训练有素的病理学家，这样的试验不适于全球范围的检测。包括血清学化验、ELISA夹心检测和细胞培养在内的常规病毒检测方法没有商用现货并/或不适于诊断和跟踪HPV感染。最近，可以采用几种以PCR(聚合酶链式反应)为基础的HPV感染的检测方法。虽然所述检测方法有助于区分致癌性感染和非致癌性感染，这些检测的实行是相当昂贵的，而且需要执行PCR操作的训练有素的技术人员和/或光度计检测。此外，PCR具有天然的假阳性率，可能要借助于进一步的检测和不必要的操作。由于已经表明，HPV的致癌性是建立在蛋白基础上的，HPV DNA或RNA的早期检测可能导致身体免疫系统可以天然解决的不必要的医学步骤。采用传统方法检测人样本(例如肿瘤样本)中致癌HPV存在许多困难。例如，用抗体检测E6蛋白是困难的，因为人细胞中生成的E6含多种结构改变(如二硫键和磷酸基团)，使得在细菌系统中生产的野生型E6蛋白或化学合成的E6肽不能识别人细胞中的E6蛋白。而且，由于致癌E6蛋白没有共有的将其与非致癌E6蛋白相区别的抗原表位，单一的抗体不能用于所有致癌E6HPV毒株的检测。疾病的检测和诊断是治疗疾病的先决条件。疾病的许多标记和特征已被鉴定并可用于疾病的诊断。受侵袭的细胞状态的改变先于许多疾病并且是许多疾病的特征。改变可以包括受感染细胞中病原体基因或蛋白的表达、受侵袭细胞中基因或蛋白表达谱的改变、以及细胞形态的改变。通过准确评估这些改变可以帮助检测、诊断和监测疾病。便宜、快速、早期准确的病原体检测可以为治疗和预防结果介于身体不适到死亡之间的疾病提供可能。以下是感兴趣的重要出版物Munger(2002)Front.Biosci.7641-9；Glaunsinger(2000)Oncogene 195270-80；Gardiol(1999)Oncogene 185487-96；Pim(1999)Oncogene187403-8；Meschede(1998)J.Clin.Microbiol.36475-80；Kiyono(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.9411612-6；以及Lee(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.946670-5。此外，下列是感兴趣的专利和专利申请Bleul，6,322,794；Cole，6,344,314；Schoolnik，5,415,995；Bleul，5753233；Cole，5,876,723；Cole，5,648,459；Orth，6,391,539；Orth，5,665,535；Schoolnik，4,777,239。专利技术概述这里提供了用于检测在多种细胞类型中(例如子宫颈、肛门、阴茎和咽喉细胞中)可能导致致癌细胞转化或生物学异常的病原体蛋白的方法和组合物。这些方法和组合物可以用于检测包括但不限于导致诸如宫颈癌、阴茎癌、肛门癌和咽喉癌在内的病原体。更具体地说，描述了用于检测临床样本中致癌的HPV E6的方法、组合物和检测试剂盒。所述专利技术的一个优点是，与抗体不同，许多PDZ结构域蛋白结合大部分或所有来自人乳状瘤病毒的HPV E6，由此可用于诊断宫颈癌和其它癌症。 附图说明图1是说明PDZ蛋白能特异性识别来自人乳状瘤病毒的致癌E6蛋白的柱状图。采用ELISA检测方法证实PDZ蛋白(TIP-1)能特异性识别来自致癌病毒株(HPV 18)的全长E6蛋白，但与非致癌病毒株(HPV 11)没有表现出任何反应性。系列1和系列2代表独立实验。E6 ab表示检测采用抗HPV18 E6抗体而不是PDZ蛋白。图2是说明PDZ与HPV 18 E6 PLs结合的温度依赖性的线形图。本图采用改进的ELISA检测方法测定TIP-1的PDZ结构域或MAGI-1(结构域2)与对应于来自HPV1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：P·S·鲁，J·旋韦策，C·S·迪亚斯萨米恩托，M·P·贝尔马斯，
申请(专利权)人：生命树股份有限公司，
类型：发明
国别省市：