ＨＣＶ检测制造技术

提供一种ＨＣＶ抗原／抗体／抗原检测。该检测使用得自ＨＣＶ多蛋白区域的分离的第一抗原，和含有得自与该第一抗原相同的多蛋白区域的表位的ＨＣＶ多表位融合抗原。该第一抗原和该多表位融合抗原都与受ＨＣＶ感染的样品中存在的抗体结合。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术总的涉及病毒诊断。具体而言，本专利技术涉及使用了衍生自丙型肝炎病毒多蛋白区域的第一分离抗原和包含得自HCV多蛋白的多个表位的多表位融合抗原的抗原/抗体/抗原夹心检测，用于准确诊断丙型肝炎病毒感染，其中，所述多个表位包括一种或多种得自与所述第一抗原相同的多蛋白区域的表位。
技术介绍
丙肝病毒(HCV)是胃肠外非甲型非乙型肝炎(NANBH)的主要原因，它主要通过输血和性接触传播。该病毒存在于0.4-2.0％的供血者中。在约50％感染者中产生慢性肝炎，其中约20％被感染的个人产生肝硬化，有时导致肝细胞癌。因此，研究和控制该疾病在医学上是重要的。Houghten等首先鉴定并确定HCV是NANBH的原因。HCV的病毒基因组序列是已知的，以及获得该序列的方法。参见，如国际出版物No.WO89/04669；WO90/11089；和WO90/14436。HCV具有9.5kb的正义单链RNA基因组，其是黄病毒科的成员。基于系统发育分析，已鉴定出至少6个不同但相关的HCV基因型(Simmonds等，J.Gen.Virol.(1993)742391-2399)。该病毒编码一个具有3000多个氨基酸残基的多蛋白(Choo等，Science(1989)244359-362；Choo等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1991)882451-2455；Han等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1991)881711-1715)。多蛋白在翻译同时或之后加工成结构和非结构(NS)蛋白。具体说，如附图说明图1所示，HCV基因组编码几种蛋白质。HCV多蛋白的切割产物的顺序和命名如下NH2-C-E1-E2-p7-NS2-NS3-NS4a-NS4b-NS5a-NS5b-COOH。宿主蛋白酶催化多蛋白的最初切割，释放三种结构蛋白N-末端核衣壳蛋白(称为“核心”)和两种包膜糖蛋白“AE1”(也称为E)和“AE2”(也称为E2/NS1)，和含有病毒酶的非结构(NS)蛋白。NS区称为NS2、NS3、NS4和NS5。NS2是具有蛋白水解活性的膜内在蛋白，它与NS3组合，切开NS2-NS3 sissle键，从而产生NS3 N-末端并释放大的多蛋白，该多蛋白包含丝氨酸蛋白酶和RNA解旋酶活性。NS3蛋白酶加工剩余的多蛋白。在这些反应中，NS3释放NS3辅因子(NS4a)、两种蛋白质(NS4b和NS5a)，和依赖RNA的RNA聚合酶(NS5b)。多蛋白熟化的完成由NS3-NS4连接处的自催化裂解引发，由NS3丝氨酸蛋白酶催化。已描述了许多用作HCV的免疫和诊断试剂，衍生自HCV多蛋白的一般和特异性多肽。参见如Houghton等，欧洲出版物No.318,216和388,232；Choo等，Science(1989)244359-362；Kuo等，Science(1989)244362-364；Houghton等，Hepatology(1991)14381-388；Chien等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1992)8910011-10015；Chien等，J.Gastroent.Hepatol.(1993)8S33-39；Chien等，国际出版物No.WO 93/00365；Chien，D.Y.，国际出版物No.WO94/01778。这些出版物通常对HCV、HCV多肽免疫试剂的生产和使用提供了广泛的背景。筛选和鉴定HCV载体和HCV污染的血液或血液制品的灵敏和专一的方法将对医学提供重要的进步。在约10％输血的病人中发生输血后肝炎(PTH)，而HCV在这些病例中占多达90％。病人护理和预防及HCV通过血液或血制品，或通过密切的个人接触传播需要可靠的诊断和预后工具。因此，开发了几种测定方法用于HCV感染的血清诊断。参见如Choo等，Science(1989)244359-362；Kuo等，Science(1989)244362-364；Choo等，Br.Med.Bull.(1990)46423-441；Ebeling等，Lancet(1990)335982-983；van der Poel等，Lancet(1990)335558-560；van der Poel等，Lancet(1991)337317-319；Chien，D.Y.，国际出版物No.WO94/01778；Valenzuella等，国际出版物No.WO97/44469；和Kashiwakuma等，美国专利No.5,871,904。一些基于血清的测定方法面临的显著问题是，在病毒感染和检测之间有明显的间隔，通常超过80天。这种测定间隔对输血受体可能产生很大的危险。为了克服该问题，开发了直接检测病毒RNA的基于核酸的测试(NAT)，和检测病毒抗原而不是抗体反应的HCV核心抗原试验。参见如Kashiwakuma等，美国专利No.5,871,904；Beld等，Transfusion(2000)，40575-579。然而，仍然需要灵敏、准确的诊断和预后工具，以提供充分的病人护理并防止HCV通过血液和血制品，或密切的个人接触传播。专利技术概要本专利技术部分基于以下发现使用衍生自HCV多蛋白的第一抗原与包含得自与该第一抗原相同的HCV多蛋白区域的表位的多表位融合抗原的组合能提供敏感且可靠的检测HCV的方法。本文所述的检测可检测由六种已知的HCV基因型中的任何一种引起的HCV感染。在本专利技术的一个代表性实施例中，所述第一抗原包括NS3/4a构象表位，第二抗原是一种多表位融合抗原，包含一种或多种得自NS3/4a区域的表位。多表位融合蛋白的使用能在一单位面积底物上提供大量的表位，并改善选择性，从而能减少掩蔽问题，提高敏感性，并检测抗体。而且，本文所述的检测可快速进行，并可使用较大的样品体积，而没有背景影响。因此，在一个实施方式中，本专利技术涉及检测生物样品中的丙型肝炎病毒(HCV)的方法。该方法包括(a)提供免疫检测固相支持物，该支持物含有结合于其上的HCV抗原，其中，所述HCV抗原由一种或多种得自HCV多蛋白的第一区域的分离抗原组成；(b)在使HCV抗体(当存在于该生物样品中时)与所述一种或多种HCV抗原结合的条件下，使生物样品与该固相支持物混合；(c)在形成复合物的条件下，将可检测的标记HCV多表位融合抗原(MEFA)加到步骤(b)的固相支持物中，其中，该标记的MEFA含有至少一个得自与所述一个或多个分离的抗原相同的HCV多蛋白区域的表位，所述MEFA与结合的HCV抗体结合；(d)检测该HCV抗体与得自所述HCV多蛋白的第一区域的一种或多种抗原以及所述MEFA之间形成的复合物，如果有的话，作为生物样品中HCV感染的指标。在另一实施方式中，本专利技术涉及一种检测生物样品中的HCV感染的方法，该方法包括(a)供免疫检测固相支持物，该支持物包含结合于其上的HCV抗原，其中，该HCV抗原由一种或多种多表位融合抗原(MEFA)组成；(b)在使HCV抗体(当存在于该生物样品中时)与所述一种或多种MEFA结合的条件下，使生物样品与该固相支持物混合；(c)在形成复合物的条件下，将存在于一种或多种MEFA中的得自HCV多蛋白的区域的可检测的标记的分离HCV抗原加到步骤(b)的固相支持本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种检测生物样品中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染的方法，其特征在于，所述方法包括：（ａ）提供免疫检测固相支持物，该支持物含有结合于其上的ＨＣＶ抗原，其中，所述ＨＣＶ抗原由一种或多种得自ＨＣＶ多蛋白的第一区域的分离抗原组成；（ｂ）在使ＨＣＶ抗体存在于该生物样品中时与所述一种或多种ＨＣＶ抗原结合的条件下，使生物样品与该固相支持物混合；　（ｃ）在形成复合物的条件下，将可检测的标记ＨＣＶ多表位融合抗原（ＭＥＦＡ）加到步骤（ｂ）的固相支持物中，其中，该标记的ＭＥＦＡ含有至少一个得自与所述一个或多个分离的抗原相同的ＨＣＶ多蛋白区域的表位，其中，所述ＭＥＦＡ与结合的ＨＣＶ抗体结合；（ｄ）检测该ＨＣＶ抗体与得自所述ＨＣＶ多蛋白的第一区域的所述一种或多种抗原以及所述ＭＥＦＡ之间形成的复合物，如果有的话，作为生物样品中ＨＣＶ感染的指标。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：P阿坎吉尔，D齐恩，
申请(专利权)人：诺华疫苗和诊断公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]