一种提高CircRNA检测准确率的方法技术

本发明专利技术属于基因工程领域，具体涉及一种提高CircRNA检测准确率的方法。本发明专利技术提供的提高CircRNA检测准确率的方法，是通过从CD90posi细胞提取总的CircRNA过程中，加入特定试剂，减少RNA的降解，在检测时，加入与CircRNA亲和的荧光试剂，并经测序验证完成。本发明专利技术提供的方法对CircRNA检测的准确率高达97.2％，且过程简单，有利于实现，为人类更好检测RNA提供了一种新技术。

【技术实现步骤摘要】
一种提高CircRNA检测准确率的方法
本专利技术属于基因工程领域，具体涉及一种提高CircRNA检测准确率的方法。
技术介绍
circRNAs(CircularRNAs，环形RNA分子)是一类不具有5'末端帽子和3'末端poly(A)尾巴，并以共价键形成环形结构的非编码RNA分子。circRNA是由非经典剪接方式进行反向剪接而形成。检测RNA并对检测数据信息进行提取，是目前研究基因功能的一种强大工具，能用来直接从源头上让致病基因“沉默”，以治疗肝癌、肺癌等各种恶性疾病。而CircRNA在CD90posi肝癌细胞中的存在较显著的差异表达，可用于表征CD90在肿瘤组织中的表达水平，进而评估肝癌的严重程度，而如何准确检测CircRNA是最重要的一环。现有技术中，由于目标检验物的浓度及周边环境的影响，现有的RNA检测方法检测时间长，且需要借助多种仪器测定，对操作人员的专业技术要求较高，进而存在检测时间长，成本高等缺点。基于此，中国专利申请CN111208078A公开了一种RNA检测方法，该方法中选择了一种移动移液枪，并本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高CircRNA检测准确率的方法，其特征在于，包括如下步骤：/nS1、用Trizol试剂提取CircRNA，得总CircRNA；/nS2、向步骤S1制得的总CircRNA中加入防RNA降解剂及亲和荧光探针，静置反应25～30min，筛选出含荧光探针的CircRNA；/nS3、将筛选出的含荧光探针的CircRNA经测序、比对，验证筛选结果。/n

【技术特征摘要】
1.一种提高CircRNA检测准确率的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、用Trizol试剂提取CircRNA，得总CircRNA；
S2、向步骤S1制得的总CircRNA中加入防RNA降解剂及亲和荧光探针，静置反应25～30min，筛选出含荧光探针的CircRNA；
S3、将筛选出的含荧光探针的CircRNA经测序、比对，验证筛选结果。


2.如权利要求1所述提高CircRNA检测准确率的方法，其特征在于，步骤S1所述Trizol试剂提取CircRNA具体操作过程为：
(1)培养细胞：收获CD90posi细胞，培养至1～5×107，用胰酶处理3～5min，移入1.5mL离心管中，加入1mLTrizol试剂，混匀，室温静置5～10min；
(2)加入0.2mL氯仿，振荡10～20s，静置2min，然后于4℃下离心，取上清；
(3)向步骤(2)所得上清液中加入0.5mL异丙醇，将管中液体轻轻混匀，室温静置8～12min，然后于4℃下离心，弃上清，得沉淀；
(4)向步骤(3)所得沉淀中加入1mL，体积分数为75％的乙醇溶液，轻轻洗涤沉淀2～4次；分别于4℃下离心，弃上清，收集沉淀；
(5)向步骤(4)所得沉...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘建平，
申请(专利权)人：中山大学孙逸仙纪念医院，
类型：发明
国别省市：广东;44