用于监测对核苷逆转录酶抑制剂疗法的遵守的产品和方法技术

本发明专利技术提供了用于检测生物样品中与NRTI有关的代谢物的新化合物、试剂、系统和方法以及其在监测对暴露前预防或抗逆转录病毒治疗的遵守中的用途。此类试剂包括NRTI衍生物、类似物、NRTI衍生物缀合物以及针对它们的抗体，其可用于基于抗体的方法，例如侧向流免疫测定法和其他护理点装置。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于监测对核苷逆转录酶抑制剂疗法的遵守的产品和方法专利技术背景在美国有120万处于HIV感染的高风险的人，而在世界范围内有数千万人。在美国，明年估计有40,000人会感染HIV并且14,000人会死亡；全球超过200万人会受到感染并且120万人会死亡(1-4)。美国每年在HIV护理上花费约250亿美元，这将随着HIV治疗的改善增加寿命预期而急剧增加(5)。用替诺福韦(tenofovir)(GileadSciences，Inc.，FosterCity，CA)和恩曲他滨(emtricitabine)(GileadSciences，Inc.，FosterCity，CA)的组合进行的暴露前预防(PrEP)有效地预防HIV感染。2010年，一项临床试验显示，与服用安慰剂的人相比，服用PrEP的2499名“男男性接触者”(MSM)的HIV获得降低44％。每天服用PrEP的患者减少99％(6，7)。PrEP在血液中的半衰期为17小时，并且完全有效性需要每天给药(8)。仅自我报告的遵守(adherence)和药房补充数据未与实际的PrEP遵守充分相关(9)。在年轻有色男男性接触者(yMSMc)中，尽管有高的自我报告的遵守，但在开始PrEP后第24周时血浆可检测到的替诺福韦水平率下降至20％(10)。在女性试验中也发现了类似的结果，例如Fem-PrEP试验(11，12)。用于监测PrEP遵守的测试(例如血浆、干血斑或毛发分析)可需要患者可能无法接受的侵入性收集程序，在报告上具有延迟，这阻止了及时干预的实施，并且提供了不能反映最近的PrEP使用的遵守信息。因此，极需要一种用于监测PrEP遵守的护理点(POC)测试，该测试提供非侵入性、无痛、定量、负担得起且快速的结果，该结果可以在临床访视期间获得以提供同时的咨询并且改善遵守。专利技术概述本专利技术部分基于用于在临床环境或其他POC中快速测试对PreP疗法或抗逆转录病毒治疗(ART)的遵守的新产品和方法的开发。另外，所公开的产品和方法可用于确定病毒载量升高是否是由于不遵守或耐受性引起的，和/或确定药物是否含有实际的替诺福韦(例如，不是假药)，和/或用于测试乙肝治疗遵守。该方法涉及使用新的替诺福韦衍生物作为免疫原，针对替诺福韦开发的新抗体的使用。这些抗体可用于免疫诊断测定法(包括侧向流免疫诊断测定法)中，以检测患者样品(包括尿液样品)中替诺福韦的存在。因此，一方面，本专利技术提供了特异性结合替诺福韦或替诺福韦衍生物的替诺福韦部分的抗体。在一些实施方案中，抗体具有免疫球蛋白重链和免疫球蛋白轻链。在一些实施方案中，抗体是单链抗体、仅重链抗体、Fv片段、Fab片段、F(ab)2片段等。在一些实施方案中，轻链具有CDR1区，其包含选自SEQIDNO：17、19、21和30的氨基酸序列；CDR2区，其包含选自SEQIDNO：25、27、29和31的氨基酸序列；和/或CDR3区，其包含选自SEQIDNO：33、35、37和32的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含以SEQIDNO：11、13、15或41所示的可变轻链氨基酸序列。在一些实施方案中，重链包含CDR1区，其包含选自SEQIDNO：18、20、22和23的氨基酸序列；CDR2区，其包含选自SEQIDNO：26、28、30和31的氨基酸序列；和/或CDR3区，其包含选自SEQIDNO：34、36、38和39的氨基酸序列。在一些实施方案中，抗体包含以SEQIDNO：12、14、16或42所示的可变重链氨基酸序列。还公开了包含本文公开的任何一种或多种抗体的抗体制剂。在一些实施方案中，制剂是单克隆抗体制剂。还提供了编码本文公开的任何抗体的重链或轻链的分离的核酸分子。在一些实施方案中，核酸选自克隆载体、表达载体、异源重组载体和病毒整合载体。另外，公开了用本文提供的任何核酸转化的细胞。在一些实施方案中，细胞是哺乳动物细胞。哺乳动物细胞的一些非限制性实例包括兔、仓鼠、小鼠、大鼠、鸡、山羊、猴、绵羊、猪、马、牛或人细胞。在另一方面，本专利技术提供了用于生成特异性结合替诺福韦或替诺福韦衍生物或其他核苷逆转录酶抑制剂(“NRTI”)或NRTI衍生物的抗体的免疫原和免疫原性制剂。在一些实施方案中，免疫原可用于产生特异性结合替诺福韦或替诺福韦衍生物的抗体。在一些实施方案中，免疫原选自：或其药学可接受盐。在一些实施方案中，免疫原选自具有根据式(I)的结构的化合物；或其药学可接受盐，其中：A1、A2或A3之一是A1、A2和A3中的两个是氢或NH2；Y是键、NR3、O或S；L是C1-C12-亚烃基、C3-C7-环亚烃基、C3-C7-杂环烯、亚芳基或杂亚芳基，它们各自可以是被一个或多个选自以下的取代基任选取代：＝O、-OH、-SH、-NO2、-CN、-C1-C4-烷基、-C1-C4-卤代烷基、C3-C7-环烷基、C3-C7-杂环基、芳基、杂芳基、-OR5、-NR6R7或-C(O)X1；R1、R2、R3和R4各自独立是氢、C1-C6-烷基、C1-C6-卤代烷基、C3-C7-环烷基、C3-C7-杂环基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基，其中C1-C6-烷基、C1-C6-卤代烷基、C3-C7-环烷基、C3-C7-杂环基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基各自可以用一个或多个选自以下的取代基任选取代：卤素、＝O、-OH、-SH、-NO2、-CN、-C1-C4-烷基、-C1-C4-卤代烷基、C3-C7-环烷基、C3-C7-杂环基、芳基、杂芳基、-OR5、-NR6R7、或-C(O)X2；R5、R8、和R11各自独立是C1-C6-烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、C0-C4-烷基-P(O)(OH)2、或-C(O)X4；R6、R7、R9、R10、R12、和R13各自独立是氢、C1-C6-烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、或-C(O)X5；或R6和R7、R9和R10、以及R12和R13与同它们附接的原子一起独立形成3至7元环，其可以被一个或多个选自以下的取代基任选取代：卤素、＝O、-OH、-SH、-NO2、-CN、-C1-C4-烷基、-C1-C4-卤代烷基、C3-C7-环烷基、C3-C7-杂环基、芳基、杂芳基、-OR11、-NR12R13、或-C(O)X6；并且X1、X2、X3、X4、X5、和X6各自独立是氢、C1-C6-烷基、C1-C6-卤代烷基、C2-C6-烯基、C2-C6-炔基、芳基、芳烷基、或杂芳基；其中每个任选的取代基独立可以进一步被一个或多个选自以下的取代基取代：＝O、-OH、-SH、-NO2、-CN、-C1-C4-烷基、-C1-C4-卤代烷基、C3-C7-环烷基、C3-C7-杂环基、芳基、杂芳基、-OR8、-NR9R10、和-C(O)X3。在一些实施方案中，本专利技术提供了免疫原性组合物，其包含：通过接头与(b)载体蛋白缀合的(a)任何上述化合物。在免疫原性组合物的某些实施方案中，接头共价结合所述载体蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.特异性结合替诺福韦的抗体，其包含：/n免疫球蛋白重链和免疫球蛋白轻链，其中所述轻链的可变区包含：/n(i)CDR1区，其包含选自SEQ ID NO:17、19、21和23的氨基酸序列；/n(ii)CDR2区，其包含选自SEQ ID NO:25、27、29和31的氨基酸序列；和/或/n(iii)CDR3区，其包含选自SEQ ID NO:33、35、37和39的氨基酸序列。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171013 US 62/572,1261.特异性结合替诺福韦的抗体，其包含：
免疫球蛋白重链和免疫球蛋白轻链，其中所述轻链的可变区包含：
(i)CDR1区，其包含选自SEQIDNO:17、19、21和23的氨基酸序列；
(ii)CDR2区，其包含选自SEQIDNO:25、27、29和31的氨基酸序列；和/或
(iii)CDR3区，其包含选自SEQIDNO:33、35、37和39的氨基酸序列。


2.特异性结合替诺福韦的抗体，其包含：
免疫球蛋白重链和免疫球蛋白轻链，其中所述重链的可变区包含：
(i)CDR1区，其包含选自SEQIDNO:18、20、22和24的氨基酸序列；
(ii)CDR2区，其包含选自SEQIDNO:26、28、30和32的氨基酸序列；和/或
(iii)CDR3区，其包含选自SEQIDNO:34、36、38和40的氨基酸序列。


3.权利要求1或权利要求2的抗体，其中所述抗体包含如SEQIDNO:12、14、16或42所示的可变重链氨基酸序列。


4.权利要求1-3中任一项的抗体，其中所述抗体包含如SEQIDNO:11、13、15或41所示的可变轻链氨基酸序列。


5.抗体制剂，其包含权利要求1-4中任一项的抗体。


6.权利要求5的抗体制剂，其中所述制剂是单克隆抗体制剂。


7.分离的核酸分子，其编码权利要求1-4中任一项的重链或轻链。


8.权利要求7的分离的核酸，其中所述核酸选自克隆载体、表达载体、异源重组载体和病毒整合载体。


9.用权利要求7-8中任一项的核酸转化的细胞。


10.权利要求9的细胞，其中所述细胞是哺乳动物细胞。


11.权利要求10的细胞，其中所述细胞是选自兔、仓鼠、小鼠、大鼠、鸡、山羊、猴、绵羊、猪、马、牛和人的细胞。


12.检测受试者的生物流体样品中的替诺福韦的方法，其包括使权利要求1-4中任一项的抗体与来自所述受试者的生物流体样品接触。


13.权利要求12的方法，其中对所述受试者开NRTI或施用NRTI。


14.权利要求12的方法，其中所述生物流体样品是尿液。


15.用于进行测定法以检测患者的流体样品中的代谢物的方法，其中对所述患者开NRTI或施用NRTI，包括：
(a)将流体样品施加到样品垫；
(b)使所述样品沿着所述样品垫侧向流到缀合标记物垫；其中所述缀合标记物垫包含与可检测标记物缀合的第一试剂，并且其中所述缀合标记物垫的一部分和所述样品垫的一部分形成第一界面；
(c)使所述样品沿着所述缀合标记物垫侧向流到膜；其中所述膜的一部分和所述缀合标记物垫的一部分形成第二界面；其中所述膜包含至少一种第二试剂，所述第二试剂结合到所述膜以形成测试线；
(d)将所述第一试剂与所述第二试剂结合以在所述测试线处形成第二试剂-第一试剂复合物，并使所述可检测标记物在所述测试线处形成可检测信号，
(e)在存在可检测信号的情况下将所述患者诊断为不遵守治疗或预防方案；或在缺乏可检测信号的情况下诊断为遵守治疗或预防方案。


16.用于进行测定法以检测患者的流体样品中的代谢物的装置，其中对所述患者开NRTI或施用NRTI，包含：
(a)用于接触所述流体样品的样品垫；
(b)缀合标记物垫，所述缀合标记物垫具有与可检测标记物缀合的第一试剂，该缀合标记物垫的一部分和所述样品垫的一部分形成第一界面；
(c)包含膜的测定法，所述膜的一部分和所述缀合标记物垫的一部分形成第二界面；和
(d)与膜结合以形成测试线的至少一种第二试剂，所述第一界面允许流体从所述样品垫流到所述缀合标记物垫并且接触所述可检测标记物，所述第二界面允许流体从所述缀合标记物垫流到所述膜，并接触所述至少一种膜结合的第二试剂以形成第二试剂-第一试剂复合物，并且引起所述可检测标记物在所述测试线处形成可检测信号，
其中可检测信号的存在指示所述患者不遵守治疗或预防方案，并且其中可检测信号的缺乏指示所述患者遵守治疗或预防方案。


17.权利要求15的方法或权利要求16的装置，其中调控所述可检测信号以提供可检测信号的存在指示所述患者遵守治疗或预防方案。


18.权利要求15的方法或权利要求16的装置，其是侧向流测定法。


19.权利要求15的方法或权利要求16的装置，其是侧向流免疫测定法。


20.权利要求15的方法或权利要求16的装置，其中所述第一试剂是权利要求70-93中任一项的化合物或其缀合衍生物。


21.权利要求15的方法或权利要求16的装置，其中所述第一试剂是权利要求88的化合物的缀合衍生物。


22.权利要求15的方法或权利要求16的装置，其中所述第一试剂是权利要求92的化合物的缀合衍生物。


23.权利要求15的方法或权利要求16的装置，其中所述第一试剂是权利要求90的化合物的缀合衍生物。


24.权利要求15的方法或权利要求16的装置，其中所述第一试剂是权利要求93的化合物的缀合衍生物。


25.权利要求15的方法或权利要求16的装置，其中所述第一试剂是权利要求89的化合物的缀合衍生物。


26.权利要求15的方法或权利要求16的装置，其中所述第一试剂是权利要求91的化合物的缀合衍生物。


27.权利要求15-26中任一项的方法或装置，其中所述缀合衍生物是缀合有HRP的衍生物。


28.权利要求15的方法或权利要求16的装置，其中所述第二试剂是权利要求1-4或99-103中任一项的抗体。


29.权利要求28的方法或装置，其中所述抗体与可检测标记物缀合。


30.权利要求15的方法或权利要求16的装置，其中所述第一试剂是权利要求1-4或99-103中任一项的抗体。


31.权利要求30的方法或装置，其中所述抗体与可检测标记物缀合。


32.权利要求15的方法或权利要求16的装置，其中所述第二试剂是权利要求70-93中任一项的化合物，或其缀合衍生物。


33.权利要求15的方法或权利要求16的装置，其中所述第二试剂是权利要求88的化合物的缀合衍生物。


34.权利要求15的方法或权利要求16的装置，其中第二试剂是权利要求92的化合物的缀合衍生物。


35.权利要求15的方法或权利要求16的装置，其中所述第二试剂是权利要求90的化合物的缀合衍生物。


36.权利要求15的方法或权利要求16的装置，其中所述第二试剂是权利要求93的化合物的缀合衍生物。


37.权利要求15的方法或权利要求16的装置，其中所述第二试剂是权利要求89的化合物的缀合衍生物。


38.权利要求15的方法或权利要求16的装置，其中所述第二试剂是权利要求91的化合物的缀合衍生物。


39.权利要求32-38中任一项的方法或装置，其中所述缀合衍生物是缀合有HRP的衍生物。


40.权利要求15的方法或权利要求16的装置，其进一步包含在所述膜下游的吸收垫。


41.权利要求15的方法或权利要求16的装置，其中所述膜是硝酸纤维素。


42.权利要求16的装置，其在壳体中提供。


43.权利要求42的装置，其中所述壳体进一步包含用于读取所述可检测信号的开口。


44.权利要求15的方法或权利要求16的装置，其中所述抗体是多克隆抗体。


45.权利要求15的方法或权利要求16的装置，其中所述抗体是单克隆抗体。


46.权利要求15的方法或权利要求16的装置，其中所述抗体是权利要求1-4中任一项的抗体。


47.权利要求15的方法或权利要求16的装置，其中所述代谢物是TFV。


48.权利要求15的方法或权利要求16的装置，其中所述膜进一步包含第三试剂，所述第三试剂与所述测试线下游或上游的膜结合以形成对照线。


49.权利要求48的方法或装置，其中所述第三试剂结合所述第一试剂以在所述对照线处引起可检测信号，其中在所述对照线处所述可检测信号的存在指示所述侧向流测定法的适当性能。


50.权利要求48-49中任一项的方法或装置，其中所述第三试剂是抗HRP抗体。


51.权利要求48至50中任一项的方法或装置，其中所述第三试剂是抗兔IgG抗体。


52.权利要求48至50中任一项的方法或装置，其中所述第三试剂是抗小鼠IgG抗体。


53.权利要求15的方法或权利要求16的装置...

【专利技术属性】
技术研发人员：G道格特里治，K卡多斯，
申请(专利权)人：尤休尔股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US