一种抗SARS-CoV-2的单克隆抗体1F2制造技术

本发明专利技术涉及一种抗SARS‑CoV‑2的单克隆抗体1F2，该抗体的六个CDR区为：(1)重链CDR1(VHCDR1)包含如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；(2)重链CDR2(VHCDR2)包含如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列；(3)重链CDR3(VHCDR3)包含如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列；(4)轻链CDR1(VLCDR1)包含如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列；(5)轻链CDR2(VLCDR2)包含如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列；(6)轻链CDR3(VLCDR3)包含如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列。

【技术实现步骤摘要】
一种抗SARS-CoV-2的单克隆抗体1F2
本专利技术属于生物医药
，具体的，涉及一种抗SARS-CoV-2的单克隆抗体1F2。
技术介绍
含有高浓度的抗SARS-CoV-2抗体的康复期血浆已在治疗中显示出积极的效果，说明抗SARS-CoV-2特异性抗体能有效阻断病毒与细胞的结合。另外，在SARS、MERS等烈性传染病爆发期间研发了一系列的具有中和活性的单克隆抗体，已被证明在疾病的预防和治疗中具有安全性和有效性。这些都提示在应对SARS-CoV-2病毒时，可考虑制备抗SARS-CoV-2单克隆抗体，尤其是全人源单克隆抗体，该种抗体不仅能通过阻断SARS-CoV-2与受体细胞的结合从而避免病毒的侵入，达到保护的作用，而且相对人源化或人鼠嵌合抗体具有副作用更小的优点，将为COVID-19的特异性预防和治疗提供新的手段。
技术实现思路
本专利技术首先涉及针对SARS-CoV-2病毒的单克隆抗体1F2，其特征在于，该抗体的六个CDR区为：(1)重链CDR1(VHCDR1)包含如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列：GFTVSSNYMN；(2)重链CDR2(VHCDR2)包含如SEQIDNO.2所示的氨基酸序列：VIYSGGSTFYADSVKG；(3)重链CDR3(VHCDR3)包含如SEQIDNO.3所示的氨基酸序列：DLDILGGMDV；(4)轻链CDR1(VLCDR1)包含如SEQIDNO.4所示的氨基酸序列：RASQSVSSSYLA；(5)轻链CDR2(VLCDR2)包含如SEQIDNO.5所示的氨基酸序列：GASSRAT；(6)轻链CDR3(VLCDR3)包含如SEQIDNO.6所示的氨基酸序列：QQYGSSPPT。进一步的，所述的单克隆抗体1F2的重链可变区全长包含如SEQIDNO.7所示的氨基酸序列：EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTVSSNYMNWVRQAPGKGLEWVSVIYSGGSTFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDLDILGGMDVWGQGTTVTVSS；所述的单克隆抗体1F2的轻链可变区全长包含如SEQIDNO.8所示的氨基酸序列：EIVMTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSSPPTFGQGTKVEIK。进一步的，所述的单克隆抗体1F2为人IgG型抗体。进一步的，所述的单克隆抗体1F2结合的抗原为SARS-CoV-2病毒的刺突蛋白S1，具体的，所述的单克隆抗体1F2结合的抗原结构区域为SARS-CoV-2病毒的刺突蛋白S1中的RBD结构域。最优选的，所述的单克隆抗体1F2的轻链可变区和重链可变区分别是SEQIDNO.8和SEQIDNO.7所示的氨基酸序列。本专利技术还涉及编码所述单克隆抗体1F2的核酸片段。本专利技术还涉及一种抗体，所述的抗体的轻链为：(1)SEQIDNO.8所示的氨基酸序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸后，形成的具有同等功能的序列；或(2)与SEQIDNO.8所示的氨基酸序列具有95％以上同源性的氨基酸序列；所述的抗体的重链为：(1)SEQIDNO.7所示的氨基酸序列经替换、缺失或添加一个或几个氨基酸后，形成的具有同等功能的序列；或(2)与SEQIDNO.7所示的氨基酸序列具有95％以上同源性的氨基酸序列。本专利技术还包括所述的单克隆抗体1F2在制备检测SARS-CoV-2病毒的试剂中的应用。本专利技术还包括所述的单克隆抗体1F2在制备抑制SARS-CoV-2病毒的试剂中的应用。本专利技术还包括单克隆抗体1F2在制备药物中的应用，所述的药物为预防和/或治疗因SARS-CoV-2病毒感染导致的疾病的药物。本专利技术的有益效果：由于目前针对SARS-CoV-2病毒引起的疾病仍无上市的疫苗和特异药物，虽然康复期血浆治疗已被证明是一种有希望的治疗方法，但是由于大规模制备受限，且该方法主要针对重症和危重症患者，而单克隆抗体则具有纯度高，靶向性强、副作用小、可大量制备等优点。本专利技术所涉及的1F2抗体的实验结果表明，该单克隆抗体1F2中和活性和阻断活性均较高。因此，本专利技术获得的人源单克隆抗体1F2为COVID-19的特异性预防和治疗提供了新的候选药物。附图说明图1、单克隆抗体1F2的SDS-PAGE电泳检测结果：泳道1为非还原SDS-PAGE电泳，泳道2为还原SDS-PAGE电泳。图2、单克隆抗体1F2的SEC-HPLC检测结果。图3、单克隆抗体1F2结合活性检测结果。A为针对SARS-CoV-2刺突蛋白S1的结合活性；B为针对SARS-CoV-2刺突蛋白S1的RBD结构域的结合活性。图4、单克隆抗体1F2的活病毒中和实验检测结果。图5、单克隆抗体1F2的亲和力检测结果。具体实施方式若未特别说明，以下实施例中所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段，所有试剂耗材均为市售商品。实施例1、单克隆抗体1F2表达载体构建、的表达与纯化将含1F2抗体重链和轻链可变区的编码基因片段分别整合进含人IgG1抗体重轻链恒定区序列的pcDNA3.4表达载体中，得到分别表达目标抗体重链和轻链的重组表达载体。细胞的转染、抗体表达和纯化1、转染：采用Gibco公司转染试剂盒并按照说明书进行转染操作，步骤简述为：将两种重组表达载体总DNA与转染试剂混合以形成DNAExpiFectamineTM293复合物；随后加入含40mL、2.94x106个/mL的Expi293细胞培养物中；最后置于37℃，125rpm，8％CO2培养。2、纯化：培养5天后，4000rpm，25℃离心10分钟收集上清，随后用MabSelectSure亲和层析柱进行纯化。纯化步骤简述为：用pH7.0的0.1MTris缓冲液平衡；上样后，用pH7.0的0.1MTris缓冲液淋洗；随后用pH8.0的1.0MTris缓冲液进行洗脱。收集洗脱液进一步于PBS缓冲液中透析。取纯化后的抗体进行SDS-PAGE和HPLC-SEC检测分析。3、结果分析：SDS-PAGE结果见图1，显示在非还原条件下，人源SARS-CoV-2抗体呈现分子量约为150kDa的条带；在还原条件下呈现分子量约为50kDa和25kDa的两条带，分别对应抗体的重链和轻链。SEC-HPLC结果见图2，显示纯化后的单克隆抗体纯度达到99％以上。纯化后的单克隆抗体经肽图分析后得到的氨基酸序列与预期的氨基酸序列一致。具体的，轻链可变区和重链可变区的序列分别与SEQIDNO.8、SEQIDNO.7相同。实施例2、抗体的功能分析...

【技术保护点】
1.一种抗SARS-CoV-2病毒的单克隆抗体1F2，其特征在于，该抗体的六个CDR区为：/n(1)重链CDR1(VHCDR1)包含如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列：GFTVSSNYMN；/n(2)重链CDR2(VHCDR2)包含如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列：VIYSGGSTFYADSVKG；/n(3)重链CDR3(VHCDR3)包含如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列：DLDILGGMDV；/n(4)轻链CDR1(VLCDR1)包含如SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列：RASQSVSSSYLA；/n(5)轻链CDR2(VLCDR2)包含如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列：GASSRAT；/n(6)轻链CDR3(VLCDR3)包含如SEQ ID NO.6所示的氨基酸序列：QQYGSSPPT。/n

【技术特征摘要】
1.一种抗SARS-CoV-2病毒的单克隆抗体1F2，其特征在于，该抗体的六个CDR区为：
(1)重链CDR1(VHCDR1)包含如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列：GFTVSSNYMN；
(2)重链CDR2(VHCDR2)包含如SEQIDNO.2所示的氨基酸序列：VIYSGGSTFYADSVKG；
(3)重链CDR3(VHCDR3)包含如SEQIDNO.3所示的氨基酸序列：DLDILGGMDV；
(4)轻链CDR1(VLCDR1)包含如SEQIDNO.4所示的氨基酸序列：RASQSVSSSYLA；
(5)轻链CDR2(VLCDR2)包含如SEQIDNO.5所示的氨基酸序列：GASSRAT；
(6)轻链CDR3(VLCDR3)包含如SEQIDNO.6所示的氨基酸序列：QQYGSSPPT。


2.根据权利要求1所述的抗体，其特征在于，
所述的单克隆抗体1F2的重链可变区全长包含如SEQIDNO.7所示的氨基酸序列：
所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨晓明，潘勇兵，王炯，詹珊珊，吴小丽，宋刚，桂芳，邓小杰，张囡，敬兆飞，杨溢民，陈莹，杜剑晖，刘建邦，张智，李新国，段凯，
申请(专利权)人：武汉生物制品研究所有限责任公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42