一种基于BPP法的甘蔗组织变性蛋白提取方法技术

本发明专利技术公开了一种基于BPP法的甘蔗组织变性蛋白提取方法，属于变性蛋白提取技术领域，所述步骤包括，准备实验器具和鲜组织样本，把组织样本在液氮的环境下研磨，使用BPP提取液对研磨后的组织样本进行混合离心处理得到混合液，对混合液进行洗涤，提取蛋白。本发明专利技术具有广谱性，使用超声后漩涡震荡时单次时间短，可以有效的避免蛋白结构的断裂和引入新的结构，有效地解决了双向电泳蛋白质样品制备中的盐离子问题，可广泛应用于各种植物，应用前景广阔。

【技术实现步骤摘要】
一种基于BPP法的甘蔗组织变性蛋白提取方法
本专利技术涉及变性蛋白提取
，尤其涉及一种基于BPP法的甘蔗组织变性蛋白提取方法。
技术介绍
蛋白质组学研究中，目前最有效的方法是通过双向电泳技术(2-DE)分离蛋白质，然后对分离蛋白进行质谱鉴定。由于各种用于双向电泳的蛋白质提取方法，往往因为植物种类和组织部位的不同而差别很大，因此，提取高质量的蛋白质，成为双向电泳以及后期质谱鉴定工作中最具挑战性的工作之一。植物组织，特别是甘蔗组织通常含有大量顽拗性物质，如多糖、醌类和多酚等，会影响双向电泳分离蛋白的效果，进而干扰后期的质谱鉴定工作。TCA法是一种经典而有效适用于双向电泳的蛋白质样品制备方法，其最大的优越性在于能够快速有效的抑制各种蛋白酶的活性。但该法主要应用在动物及某些模式植物中；另外，该法的明显缺陷是经过TCA沉淀下来的蛋白质很难溶解，并且没有办法去除样品中的盐离子。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种基于BPP法的甘蔗组织变性蛋白提取方法，解决
技术介绍
中提到的技术问题。一种基于BPP法的甘蔗组织本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于BPP法的甘蔗组织变性蛋白提取方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：/n步骤1：准备实验器具和鲜组织样本；/n步骤2：把组织样本在液氮的环境下研磨；/n步骤3：使用BPP提取液对研磨后的组织样本进行混合离心处理得到混合液；/n步骤4：对混合液进行洗涤，提取蛋白。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于BPP法的甘蔗组织变性蛋白提取方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：
步骤1：准备实验器具和鲜组织样本；
步骤2：把组织样本在液氮的环境下研磨；
步骤3：使用BPP提取液对研磨后的组织样本进行混合离心处理得到混合液；
步骤4：对混合液进行洗涤，提取蛋白。


2.根据权利要求1所述的一种基于BPP法的甘蔗组织变性蛋白提取方法，其特征在于：所述步骤1的具体过程为：
步骤1.1：液氮准备，从液氮罐中倒取液氮到保温杯，准备研钵及研棒，倒入覆盖表面的无水酒精，灼烧后备用；
步骤1.2：准备新鲜组织样本或从低温冰箱中取出组织样品，暂存于冰盒，立即连同盛有样品的容器一起称重，并记录重量。


3.根据权利要求1所述的一种基于BPP法的甘蔗组织变性蛋白提取方法的制备方法，其特征在于：所述步骤2的具体过程为：
步骤2.1：研磨开始前，研钵及研棒提前用液氮预冷；准备一个离心管，标记样品名，放入盛有液氮的保温杯预冷；
步骤2.2：取称量好的组织样本，放入预冷的研钵中，并快速搅动磨成干粉状，在研磨过程中一边研磨一边补充液氮保持样品低温；
步骤2.3：研磨完成后，加入刚没过组织样本的液氮，将不锈钢药勺在液氮中预冷，并将溅在研钵内的粉末用药勺集中到研钵底部，将组织粉末收集到上述预冷的对应离心管中，重新投入液氮中备用；
步骤2.4：将空的锡纸和离心管称重，精确到0.1g，并样品粉末加入到锡纸戒离心管称重，计算组织样品质量。


4.根据权利要求3所述的一种基于BPP法的甘蔗组织变性蛋白提取方法的制备方法，其特征在于：所述步骤3的具体过程为：
步骤3.1：根据组织样品质量，计算BPP提取液用量，BPP提取液的用量为每克的组织样品使用7mlBPP提取液；
步骤3.2：研磨后分组织粉末按照3mlBPPbuffer/1g组织样本的计算方式加入BPP提取缓冲液，倒入溶液中，上下颠倒混匀，放入冰箱4℃水化1h备用；
步骤3.3：临用前，加入二硫苏糖醇，浓度为5mM；第一次抽提，临用前加入苯甲基磺酰氟，浓度为1mM，混匀后，加入组织粉末中，充分混匀，超声后漩涡震荡5min；

【专利技术属性】
技术研发人员：陈忠良，黄东亮，秦翠鲜，汪淼，廖芬，周丽，李傲梅，
申请(专利权)人：广西壮族自治区农业科学院，
类型：发明
国别省市：广西;45