用于提取金黄色葡萄球菌总蛋白的方法及试剂盒技术

本发明专利技术涉及金黄色葡萄球菌检测，具体涉及一种用于提取金黄色葡萄球菌总蛋白的方法及试剂盒。所述方法包括：培养金黄色葡萄球菌并收集菌体，用反应缓冲液重悬菌体，然后加入由酿酒酵母菌表达的溶葡球菌酶，于37℃温育30‑60min，得到酶解产物；用PBS溶液稀释所述酶解产物，即得金黄色葡萄球菌总蛋白提取物。该方法具有简便快捷、蛋白提取效率高的优点，解决了金黄色葡萄球菌全蛋白难提取的问题。

【技术实现步骤摘要】
用于提取金黄色葡萄球菌总蛋白的方法及试剂盒
本专利技术涉及金黄色葡萄球菌检测，具体涉及一种用于提取金黄色葡萄球菌总蛋白的方法及试剂盒。
技术介绍
金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，S.aureus)也称“金葡菌”，隶属于葡萄球菌属，是革兰氏阳性菌代表，为一种常见的食源性致病微生物；金黄色葡萄球菌对高温有一定的耐受能力，在80℃以上的高温环境下30min才可以将其彻底杀死，另外金黄色葡萄球菌可以存活于高盐环境，最高可以耐受15％浓度的NaCl溶液；金黄色葡萄球菌的细胞壁耐受性非常高，常规物理机械方法和去垢剂等方法破碎其细胞壁释放胞内核酸、蛋白都较为困难，这些都影响了现代分子生物学检测方法在金黄色葡萄球菌低浓度快速检测中的应用。溶葡球菌酶(Lysostaphin)，又称为溶葡素，可裂解金黄色葡萄球菌。目前通常采用大肠杆菌或毕赤酵母菌表达溶葡球菌酶，但制备的溶葡球菌酶活性较低，无法单独用于金黄色葡萄球菌的破壁，需要与溶菌酶联用或者借助物理的菌体破壁方法才能裂解金黄色葡萄球菌，导致操作步骤十分繁琐，耗费时间长。当本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种金黄色葡萄球菌总蛋白提取方法，包括：培养金黄色葡萄球菌并收集菌体，其特征在于：用反应缓冲液重悬菌体，然后加入由酿酒酵母菌表达的溶葡球菌酶，于37℃温育30-60min，得到酶解产物；用PBS溶液稀释所述酶解产物，即得金黄色葡萄球菌总蛋白提取物。/n

【技术特征摘要】
1.一种金黄色葡萄球菌总蛋白提取方法，包括：培养金黄色葡萄球菌并收集菌体，其特征在于：用反应缓冲液重悬菌体，然后加入由酿酒酵母菌表达的溶葡球菌酶，于37℃温育30-60min，得到酶解产物；用PBS溶液稀释所述酶解产物，即得金黄色葡萄球菌总蛋白提取物。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述溶葡球菌酶的制备方法包括如下步骤：在溶葡球菌酶的氨基酸序列的N端添加可溶序列，C端添加酶蛋白稳定性序列，得到重组溶葡球菌酶的氨基酸序列；合成所述重组溶葡球菌酶的编码基因并构建表达载体，然后转化酿酒酵母菌，得到重组酿酒酵母菌；培养重组酿酒酵母菌，诱导蛋白表达并进行蛋白纯化。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述溶葡球菌酶的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示，所述可溶序列如SEQIDNO:3所示，所述酶蛋白稳定性序列如SEQIDNO:4所示；优选地，所述重组溶葡球菌酶的编码基因的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述反应缓冲液包含如下组分：15-30mMpH7.0-8.0Tris-Cl，0.5％-1.2％g/mlNaCl，5-15mMEDTA，2-8mMMnCl2，0.05％-0.12％g/mlSDS。


5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述反应缓冲液的配方为：20mMpH7.4Tris-Cl，0.9％g/mlNaCl，10mMEDTA，5mMMnCl2，0.1％g/mlSDS。


6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述PBS溶液的配方为：137mMNaCl，2.7mMKCl，8mMNaH2PO4，2mMK2HPO4，pH7.4。


7.根据权利要求1-6任一所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：聂子梅，黄非，宋乐元，田润，
申请(专利权)人：成都正能生物技术有限责任公司，
类型：发明
国别省市：四川;51