组合式奈瑟球菌组合物制造技术

本发明专利技术提供了从包括奈瑟球菌的基因组序列获得免疫原性蛋白质的方法，包括脑膜炎奈瑟球菌Ｂ的氨基酸序列和对应的核苷酸序列、以及基因组序列。这些获得的蛋白质可用作疫苗、免疫原性组合物和／或诊断用抗原。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术专利申请是国际申请号为PCT/IB 00/00828、国际申请日为2000年5月19日、进入中国国家阶段的申请号为00810600.2、名称为“组合式奈瑟球菌组合物”的专利技术专利申请的分案申请。在本文中提及的所有文件都全部通过引用纳入本文。专利
本专利技术涉及组合物，这些组合物含有来自奈瑟球菌，尤其是脑膜炎奈瑟球菌(Nmeningitidis)和淋病奈瑟球菌(N.gonorrhoeae)的生物分子的组合。
技术介绍
脑膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitidis)和淋病奈瑟球菌(N.gonorrhoeae)是不能动的、对人有致病性的革兰氏阴性双球菌。 根据该菌的荚膜多糖，已经鉴定出12种脑膜炎奈瑟球菌的血清型。A型是亚撒哈拉-非洲地区流行病中最常见的病原体。B型和C型血清型菌是导致美国以及大多数发达国家内大多数病例的原因。W135和Y型血清型菌是导致美国和发达国家的其余病例的原因。 目前使用的脑膜炎球菌疫苗是由血清型A、C、Y和W135组成的四价多糖疫苗。然而，脑膜炎球菌B(menB)仍是一个问题。不能采用多糖方法，因为menB荚膜多糖是一种α(2-8)-相连的N-乙酰神经氨酸的聚合物，它也存在于哺乳动物组织中。一种menB疫苗方法是采用外膜蛋白(OMP)的混合物。为了克服抗原性变异，已经构建了含有高达9种不同膜孔蛋白的多价疫苗(例如，Poolman JT(1992)“脑膜炎球菌疫苗的发展”Infect.Agents Dis.413-28)。用于外膜疫苗的其它蛋白是opa和opc蛋白，但是这些方法均不能克服抗原性变异(例如Ala′Aldeen和Borriello(1996)″脑膜炎球菌运铁蛋白结合蛋白1和2均是外露的，并能产生杀伤同源和异源菌株的杀菌性抗体″Vaccine 14(1)49-53)。 考虑到在非流行期间的脑膜炎球菌疾病是由多个菌株或变异菌株所造成的倾向(Russel等人(1998)11届国际致病奈瑟球菌大会摘要，第281页)，以及在一群落中优势菌株经常发生暂时变动，看来通用的脑膜炎球菌B疫苗将需要一种以上的抗原种类。 专利技术描述 奈瑟球菌蛋白和核苷酸序列公开于下列文件中 ●WO 99/24578 ●WO 99/36544 ●WO 99/57280 ●WO 97/28273 ●WO 96/29412 ●WO 95/03413 ●Tettelin等人(2000)科学(Science)2871809-1815 为了方便起见，在这些文件中所公开的序列在本申请中根据下表进行引用。 本专利技术提供了含有来自奈瑟球菌细菌的第一生物分子以及来自奈瑟球菌细菌的第二生物分子的组合物。术语“生物分子”包括蛋白质和核酸。 该组合物还可含有进一步的生物分子，较佳地也来自奈瑟球菌。换言之，该组合物可含有2种或多种(如3、4、5、6、7、8等)生物分子，其中至少2种来自奈瑟球菌细菌(如3、4、5、6、7、8等)。这样的组合物包括那些含有下列物质的组合物(i)两种或多种不同的奈瑟球菌蛋白，(ii)两种或多种不同的奈瑟球菌核酸，或(iii)一种或多种奈瑟球菌蛋白以及一种或多种奈瑟球菌核酸的混合物。 在一优选例中，第一和第二生物分子来自不同的奈瑟球菌物种(例如一种来自脑膜炎奈瑟球菌，一种来自淋病奈瑟球菌)，但是它们也可来自同一物种。组合物中的生物分子可以来自同一物种的不同的血清型或菌株。 第一生物分子宜选自由SEQ ID 1-8376构成的组。更佳地，选自由SEQ ID1-4002和/或SEQ ID 4057-8376构成的组。优选地，它是纯化的或分离的生物分子。 第二生物分子宜选自由SEQ ID 1-8376构成的组。更佳地，选自由SEQ ID1-4002和/或SEQ ID 4057-8376构成的组。优选地，它是纯化的或分离的生物分子。 第一和第二生物分子中的一者或两者可以是在本文中没有具体公开的，以及在本专利申请提交之前还没有被鉴定、发现、为公众所知或纯化的奈瑟球菌生物分子。 具体地，本专利技术提供了一种组合物，它含有一种或多种下列的第一和第二生物分子的配对(以SEQ ID列出) 因此，本专利技术包括了SEQ ID 1-8376的35074500种可能的配对形式(1&2，1&3，1&4，1&5，......1&8375，1&8376，2&3，2&4，2&5，......2&8375，2&8376，3&4...1000&1001，1000&1002，...1000&8376，...8374&8375，8374&8376，8375&8376)。尽管出于空间原因，并没有全部在此列出。 有关如何产生和使用构成SEQ ID 1-4056的分子的细节，可以在相关的国际申请中找到。这些细节没有必要在此重复。类似的原则适用于SEQ ID 4057-8376 在本专利技术组合物中的SEQ ID 1-8376，可以用具有与SEQ ID 1-8376同源(即具有序列相同性)的序列的分子加以补充或替换。根据具体的序列，相同性的程度宜大于50％(例如65％、80％、90％或更高)，并且包括突变体和等位基因变体。蛋白质之间的序列相同性宜用Smith-Watemen同源性搜索算法来确定，如在MPSRCH程序(Oxford Molecular)中采用仿射缺口搜寻，其中参数“缺口开口罚分(gap open penalty)”为12，“缺口延伸罚分(gap extension penalty)”为1。 在本专利技术组合物中的SEQ ID 1-8376，可以用包含SEQ ID 1-8376片段的分子加以补充或替换。这些片段应包含诸分子中至少n个连续的单体，并且根据具体的序列，(i)对于蛋白质分子，n宜为7或更高(例如，8、10、12、14、16、18、20或更高)，从而使片段宜包含该序列的表位，或者(ii)对于核酸分子，n为10或更高(如本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组合物，它含有分离的第一蛋白质和分离的第二蛋白质，其中：　　　　－－所述第一蛋白质含有一氨基酸序列，该氨基酸序列与ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：３５１６、３５１８和／或３５２０具有７０％或更高的序列相同性，或该氨基酸序列是ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：３５１６、３５１８和／或３５２０的长８个或更多个氨基酸的抗原性片段；和　　　　－－所述第二蛋白质含有一氨基酸序列，该氨基酸序列与选自下组的氨基酸序列具有７０％或更高的序列相同性：ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：４００４、４００６、４００７、４００９、４０１１、４０１３、４０１５－４０３３、４０３５、４０３７、４０３９、４０４１、４０４３、６２１７－８３４７、８３４９－８３７６、和ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：２－４００２序列中的偶数编号序列，和／或该氨基酸序列是以下氨基酸序列的长８个或更多个氨基酸的抗原性片段：ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：４００４、４００６、４００７、４００９、４０１１、４０１３、４０１５－４０３３、４０３５、４０３７、４０３９、４０４１、４０４３、６２１７－８３４７、８３４９－８３７６、和ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：２－４００２序列中的偶数编号序列；其中，所述第二蛋白质不含有与ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：８９４、８９６、８９８、２１８２、２１８４和／或２１８６具有７０％或更高的序列相同性的氨基酸序列和／或ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：８９４、８９６、８９８、２１８２、２１８４和／或２１８６的长８个或更多个氨基酸的抗原性片段。...

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：MM朱利亚尼，M皮扎，R拉普奥利，
申请(专利权)人：启龙股份公司，
类型：发明
国别省市：IT[意大利]