一种林蛙油冻干粉改善肺纤维化的药理作用研究方法技术

本发明专利技术公开了一种林蛙油冻干粉改善肺纤维化的药理作用研究方法，包括建立肺纤维化模型并分组给药、研究林蛙油冻干粉对肺纤维化大鼠血清肿瘤坏死因子‑α、白细胞介素‑6、白细胞介素‑17浓度的影响、研究林蛙油冻干粉对肺纤维化大鼠肺组织羟脯胺酸、丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶含量的影响、林蛙油冻干粉对肺纤维化大鼠肺组织病理学改变和羟脯胺酸含量的影响和依据上述研究做出整体评估，该研究方法可从肺纤维化影响的多方面对林蛙油冻干粉进行研究，形成系统的评价方法，对林蛙油冻干工艺的发展和冻干制品的推广具有重大意义。

【技术实现步骤摘要】
一种林蛙油冻干粉改善肺纤维化的药理作用研究方法
本专利技术涉及保健食品
，特别涉及一种林蛙油冻干粉改善肺纤维化的药理作用研究方法。
技术介绍
林蛙，又称蛤什蟆，是我国著名的集药用、滋补和美容于一体的经济蛙种。林蛙油是雌林蛙怀卵成熟期的输卵管，它含有18种氨基酸、13种无机元素、9种维生素和多种复合多肽等生物活性因子，特别富含三种性激素，即雌二醇、睾酮、孕酮。其中雌二醇和睾酮分别是雌性激素和雄性激素中生理作用最强的激素，具有显著的滋阴强肾激发免疫功能和调节机理作用，此外，林蛙油中多种营养组分还在肺纤维化的改善方面具有良好的作用。直接从雌林蛙体内获得的林蛙油为干林蛙油，其属于油脂类物质不易被人体消化，同时也带有病毒或寄生虫卵以及浓烈的血腥味，不经过加工处理不能直接食用。现有林蛙油的加工处理方法一般是将林蛙油进行高温蒸煮(100℃)，达到除腥、除菌的目的。但是，长时间高温蒸煮使得林蛙油营养流失严重，其具有功效的活性物质被破坏，如不饱和脂肪酸、维生素E、维生素C以及雌二醇等，严重影响其功效。此外，高温蒸煮只能消除绝大部分腥味，制成的林蛙油成品仍然带有一丝腥味，同时高温蒸煮后的林蛙油也不够柔软，影响其口感。因此，越来越多的技术指向林蛙油冻干的研究，冻干工艺使林蛙油具有使用方便快捷的效果，但是针对冻干后的林蛙油是否会有功能上的影响，现有技术还研究较少，且缺少系统的研究方法对林蛙油冻干粉在肺纤维化修复方面的药理作用研究，阻碍了林蛙油制品的发展进程和广泛推广。因此，如何提供一种系统的林蛙油冻干粉在改善肺纤维化方面的药理作用研究方法是本领域技术人员亟待解决的问题。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种林蛙油冻干粉改善肺纤维化的药理作用研究方法，以实验室常用的鼠类为研究对象，对肺纤维化的多项指标进行研究，以达到可系统综合评价林蛙油修复肺纤维化作用的效果。为了达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种林蛙油冻干粉改善肺纤维化的药理作用研究方法，包括以下步骤：步骤一：建立肺纤维化模型并分组给药取雄性SD大鼠随机等数分为若干组，设置空白对照组、空白模型组、模型组、实验组和对照组并依据各组需求分别给药，给药频率为1次/d；步骤二：研究林蛙油冻干粉对肺纤维化大鼠血清肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6、白细胞介素-17浓度的影响给药28d后，麻醉开胸，采集心脏血液离心后取血清检测肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6、白细胞介素-17；步骤三：研究林蛙油冻干粉对肺纤维化大鼠肺组织羟脯胺酸、丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶含量的影响颈动脉放血处死全部大鼠，截取右肺组织匀浆离心后提取上清液，检测丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶的含量；步骤四：林蛙油冻干粉对肺纤维化大鼠肺组织病理学改变和羟脯胺酸含量的影响经主支气管向左肺内注入10％中性福尔马林液固定24h以上后石蜡包埋，切片，HE染色评定肺组织肺泡炎症程度，Masson染色评定肺组织纤维化程度，截取右肺组织匀浆离心后提取上清液，检测羟脯胺酸的含量；步骤五：依据步骤二到步骤四所测定数据结果综合评估。进一步的，所述空白对照组为生理盐水灌胃处理组，灌胃量为1mL/d。进一步的，所述空白模型组的处理手段为以3mL/kg的量腹腔注射10％水合氯醛麻醉，从颈正中部位切开，暴露气管后向气管内注入生理盐水。进一步的，所述模型组的处理手段为以3mL/kg的量腹腔注射10％水合氯醛麻醉，从颈正中部位切开，暴露气管后向气管内注入与空白模型组等量的溶解了博莱霉素A5生理盐水。进一步的，所述实验组的处理手段为以3mL/kg的量腹腔注射10％水合氯醛麻醉，从颈正中部位切开，暴露气管后向气管内注入与空白模型组等量的溶解了博莱霉素A5生理盐水，次日灌胃林蛙油冻干粉混悬液。进一步的，所述实验组包括三个及以上不同剂量的林蛙油冻干粉混悬液给药组。进一步的，所述对照组的处理手段为以3mL/kg的量腹腔注射10％水合氯醛麻醉，从颈正中部位切开，暴露气管后向气管内注入与空白模型组等量的溶解了博莱霉素A5生理盐水，次日灌胃泼尼松。进一步的，所述博莱霉素A5的注射量以大鼠体重计算为5mg/kg。经由上述技术方案，与现有技术相比，本专利技术提供了一种林蛙油冻干粉改善肺纤维化的药理作用研究方法，可从肺纤维化对肺机能影响的多方面对林蛙油冻干粉进行研究，形成系统的评价方法，对林蛙油冻干工艺的发展和推广具有重大意义。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。图1附图为本专利技术实施例1HE肺组织染色；图2附图为本专利技术实施例1Masson肺组织染色。具体实施方式下面将结合本专利技术的实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。实验材料1.受试药物2.试验动物3.主要药品及试剂4.主要仪器101A-1E型电热鼓风干燥箱上海实验仪器有限公司FA2004分析电子天平上海良平仪器仪表倒置显微镜日本Olympus公司VICTORX3酶标仪PerkinElmer公司TDL-4型低速台式离心机上海安享科学仪器厂108mL手动组织匀浆器天津玻璃仪器厂H2050R型台式高速冷冻离心机湖南湘仪实验室仪器开发有限公司(1)大鼠肺纤维化模型建立与分组给药取雄性SD大鼠80只，体重200～220g，随机分为8组。①空白对照组(生理盐水灌胃1mL/d)、②空白模型组(生理盐水灌胃1mL/d)、③模型组(博莱霉素5mg/kg)、④LWY-冻干粉低剂量干预组(0.05g/kg林蛙油冻干粉混悬液)、⑤LWY-冻干粉中剂量干预组(0.10g/kg林蛙油冻干粉混悬液)、⑥LWY-冻干粉高剂量干预组(0.20g/kg林蛙油冻干粉混悬液)、⑦LWY组(0.10g/kg林蛙油混悬液)、⑧泼尼松组(0.005g/kg)；其中②～⑧组大鼠通过腹腔注射10％水合氯醛(3mL/kg)麻醉大鼠后，从颈正中部位切开，暴露气管，其中③～⑧组向气管内一次性注入溶解了博莱霉素A5(5mg/kg)的生理盐水0.2mL，②组注入等量生理盐水，然后②～⑧组均将大鼠直立并旋转本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种林蛙油冻干粉改善肺纤维化的药理作用研究方法，其特征在于，包括以下步骤：/n步骤一：建立肺纤维化模型并分组给药/n取雄性SD大鼠随机等数分为若干组，设置空白对照组、空白模型组、模型组、实验组和对照组并依据各组需求分别给药，给药频率为1次/d；/n步骤二：研究林蛙油冻干粉对肺纤维化大鼠血清肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6、白细胞介素-17浓度的影响/n给药28d后，麻醉开胸，采集心脏血液离心后取血清检测肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6、白细胞介素-17；/n步骤三：研究林蛙油冻干粉对肺纤维化大鼠肺组织羟脯胺酸、丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶含量的影响/n颈动脉放血处死全部大鼠，截取右肺组织匀浆离心后提取上清液，检测丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶的含量；/n步骤四：林蛙油冻干粉对肺纤维化大鼠肺组织病理学改变和羟脯胺酸含量的影响/n经主支气管向左肺内注入10％中性福尔马林液固定24h以上后石蜡包埋，切片，HE染色评定肺组织肺泡炎症程度，Masson染色评定肺组织纤维化程度，截取右肺组织匀浆离心后提取上清液，检测羟脯胺酸的含量；/n步骤五：依据步骤二到步骤四所测定数据结果综合评估。/n...

【技术特征摘要】
1.一种林蛙油冻干粉改善肺纤维化的药理作用研究方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一：建立肺纤维化模型并分组给药
取雄性SD大鼠随机等数分为若干组，设置空白对照组、空白模型组、模型组、实验组和对照组并依据各组需求分别给药，给药频率为1次/d；
步骤二：研究林蛙油冻干粉对肺纤维化大鼠血清肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6、白细胞介素-17浓度的影响
给药28d后，麻醉开胸，采集心脏血液离心后取血清检测肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6、白细胞介素-17；
步骤三：研究林蛙油冻干粉对肺纤维化大鼠肺组织羟脯胺酸、丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶含量的影响
颈动脉放血处死全部大鼠，截取右肺组织匀浆离心后提取上清液，检测丙二醛、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶的含量；
步骤四：林蛙油冻干粉对肺纤维化大鼠肺组织病理学改变和羟脯胺酸含量的影响
经主支气管向左肺内注入10％中性福尔马林液固定24h以上后石蜡包埋，切片，HE染色评定肺组织肺泡炎症程度，Masson染色评定肺组织纤维化程度，截取右肺组织匀浆离心后提取上清液，检测羟脯胺酸的含量；
步骤五：依据步骤二到步骤四所测定数据结果综合评估。


2.根据权利要求1所述的一种林蛙油冻干粉改善肺纤维化的药理作用研究方法，其特征在于，所述空白对照组为生理盐水灌胃处理组，灌胃量为1mL/d。


3.根据权利要求1所述的一种林蛙油冻干粉改善肺纤维化的...

【专利技术属性】
技术研发人员：张凤春，
申请(专利权)人：黑龙江省四宝生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23