一种含有效应蛋白的蔬菜育苗基质及其制备方法技术

本发明专利技术涉及蔬菜培育技术领域，具体公开了一种含有效应蛋白的蔬菜育苗基质及其制备方法。所述蔬菜育苗基质含有由效应因子RxLR129113表达的效应蛋白。本发明专利技术通过对效应因子RxLR129113表达的效应蛋白进行深入研究，将其作为添加剂引入蔬菜育苗基质中，发现其在促进蔬菜幼苗生长方面具有积极且显著的作用。进而开发出一种含有该效应蛋白的蔬菜育苗基质，对现有蔬菜育苗基质肥力不足的问题提供解决方案，并利用林业废弃物、菌渣、畜禽粪便等原料，解决污染的同时，降低了生产成本，对资源进行了充分利用，具有良好的社会效益和经济效益。

【技术实现步骤摘要】
一种含有效应蛋白的蔬菜育苗基质及其制备方法
本专利技术涉及蔬菜培育
，具体地说，涉及一种蔬菜育苗基质。
技术介绍
基质育苗是无土栽培的一种，它是以栽培钵、栽培床等载体，装入不同的基质，并配置适当的供液装置进行栽培。基质作为植物生长的基础和媒介，具有配制材料来源广泛、高持水透气性和良好的保肥性能、防止土传病虫害、质地轻便于运输等优点。随着设施农业的迅速发展，基质育苗技术正在大面积的推广应用，这也极大地促进了固体栽培基质的研究、开发与应用。就目前来说，蔬菜育苗基质在生产和应用过程中还存在以下问题：一是基质来源单一，生产成本高，蔬菜育苗基质主要采用稻壳或秸秆发酵产物作为基料，作为农业生产的主要污染源的废弃物的畜禽粪便没有得到充分利用。二是肥力不足，尚需添加专用营养剂。
技术实现思路
为了解决现有技术中存在的问题，本专利技术的目的之一是提供一种含有效应蛋白的蔬菜育苗基质及其制备方法。本专利技术的目的之二是提供效应因子RxLR129113表达的效应蛋白在作为蔬菜育苗基质添加剂方面的新用途。需要说明的是，本专利技术中所述的效应因子RxLR129113已在公开号为CN110878315A(公开日为2020年03月13日)的中国专利申请文本被记载，本专利技术不再对其核苷酸序列及所表达的效应蛋白的氨基酸序列做赘述。本专利技术所提供的技术方案具体如下：第一方面，本专利技术提供一种含有效应蛋白的蔬菜育苗基质，所述效应蛋白由效应因子RxLR129113表达。所述效应蛋白的制备方法为：构建含有效应因子RxLR129113的基因工程菌，诱导效应因子RxLR129113表达为效应蛋白。进一步地，所述蔬菜育苗基质包括基质前料和表达所述效应蛋白的基因工程菌的菌液，或由基质前料和表达所述效应蛋白的基因工程菌的菌液组成。所述菌液与所述基质前料的相对用量为1.0～1.5mL/kg，所述菌液的菌体浓度为1.8*108～2.0*109菌体/mL。更进一步地，所述基质前料由如下重量份的组分制备：林业废弃物及菌渣发酵物30～35份、发酵鸡粪15～20份、稻壳发酵料25～30份、草炭15～20份，多元复合肥5～8份。第二方面，本专利技术提供一种含有效应蛋白的蔬菜育苗基质的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：(1)构建可表达效应因子RxLR129113的基因工程菌，筛选表达量较高的菌株进行扩大培养，培养至菌体浓度达到1.8*108～2.0*109菌体/mL，获得表达所述效应蛋白的基因工程菌的菌液；(2)以重量份计，将林业废弃物及菌渣发酵物30～35份、发酵鸡粪15～20份、稻壳发酵料25～30份、草炭15～20份和多元复合肥5～8份均匀混合得到基质前料；(3)将步骤(1)获得的菌液添加至步骤(2)获得的基质前料中，所述菌液相对于基质前料的添加量为1mL/kg。其中，本专利技术表达效应因子RxLR129113的基因工程菌的构建方法采用本领域常规构建重组基因工程菌的方法。所述基因工程菌为大肠杆菌(E.coliRosetta(DE3)菌株)。进一步地，构建可表达效应因子RxLR129113的基因工程菌后，将筛选到的表达量较高的菌株按1:100比例接种至含50mg/mLKan的LB液体培养基中37℃，180rpm振荡培养3～4h，使其OD600＝0.6～0.8；再将降温至16℃，加入终浓度为0.5mM的诱导剂IPTG，16℃条件下120rpm过夜诱导16～21h。优选地，所述菌液添加至所述基质前料的方式为：先将所述菌液稀释500～1000倍，随后边搅拌所述基质前料边将稀释后的菌液通过喷雾的方式喷入基质前料中。进一步地，所述林业废弃物及菌渣发酵物的制备方法为：将林业废弃物和菌渣按照1:1～1:2体积比混合均匀，调节混合物的水分含量至50％～60％，且碳氮比为25:1～30:1；添加好氧发酵菌，条式堆肥发酵，温度达到65℃前不翻动，达到65℃以上后保持4～5天，然后进行翻抛加氧排湿；每隔10天翻抛一次，翻抛4～5次；然后进行大堆陈化25～30天，陈化期间10天倒垛一次；发酵物呈褐色蓬松物即得所述林业废弃物及菌渣发酵物；作为优选，好氧发酵菌是VT发酵菌、EM发酵菌等发酵菌中的一种或多种，其用量为林业废弃物及菌渣总质量的0.05～0.1％。进一步地，所述发酵鸡粪的制备方法为：将新鲜鸡粪晾晒或者机械除水至含量50％～60％，添加好氧发酵菌剂，调节碳氮比为25:1～30:1，进行条式好氧发酵，温度达到65℃以上翻抛，期间每隔5～7天翻抛一次，发酵温度降低无臭味得到所述发酵鸡粪。进一步地，所述稻壳发酵料的制备方法为：将稻壳与新鲜牛粪按照1:1的体积比进行混匀，调节含水量至50％～60％，添加好氧发酵菌剂，调节碳氮比为25:1～30:1，进行条式好氧发酵，温度达65℃以上翻抛，期间每隔5～7天翻抛一次，翻抛3～5次进行大堆陈化。陈化期间每隔10天翻抛一次，温度降至室温物料无异味时得到稻壳发酵料。进一步地，所述多元复合肥采用氮、磷、钾元素之比为1:1:1的多元复合肥。可选地，以每100Kg多元复合肥为例，钾由氯化钾提供，用量为32.73kg；磷由磷酸一铵提供，用量为30kg，磷酸一铵中提供的氮的含量为3.6kg；氮由硫酸铵与前述磷酸一铵提供，其中，硫酸铵的用量为35.12kg；其余成分为填充用膨润土。第三方面，本专利技术提供了所述蔬菜育苗基质在促进蔬菜生长方面的应用，以及效应因子RxLR129113表达的效应蛋白在作为蔬菜育苗基质添加剂中的应用。所述蔬菜优选为茄科蔬菜，如辣椒、番茄等。本专利技术涉及到的原料或试剂均为普通市售产品，涉及到的操作如无特殊说明均为本领域常规操作。在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可以相互组合，得到具体实施方式。本专利技术的有益效果在于：本专利技术通过对效应因子RxLR129113表达的效应蛋白进行深入研究，将其作为添加剂引入蔬菜育苗基质中，欣喜地发现了其在促进蔬菜幼苗生长方面所具有的积极作用。进而开发出一种含有该效应蛋白的蔬菜育苗基质，对现有蔬菜育苗基质肥力不足的问题提供解决方案，并利用林业废弃物、菌渣、畜禽粪便等原料，解决污染的同时，降低了生产成本，对资源进行了充分利用，具有良好的社会效益和经济效益。附图说明图1为本专利技术实施例1中的pET28a载体图谱；图2为本专利技术实施例1中RxLR129113基因PCR扩增结果；其中，M：DNAMarker，1-4：RxLR129113基因的PCR扩增条带；图3为本专利技术实施例1中RxLR129113试表达的SDS-PAGE胶分析；其中，M：Proteinmarker；1-2：IPTG诱导RxLR129113蛋白表达；图4为本专利技术实施例1中添加效应蛋白的新型育苗基质促进番茄幼苗长势的对照图；其中，A：对照，未添加效应蛋白的蔬菜育苗基质，B：添加效应蛋白的育苗基质；图5为本专利技术实施例1中添加效应蛋白的新型育本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种含有效应蛋白的蔬菜育苗基质，其特征在于，所述效应蛋白由效应因子RxLR129113表达。/n

【技术特征摘要】
1.一种含有效应蛋白的蔬菜育苗基质，其特征在于，所述效应蛋白由效应因子RxLR129113表达。


2.根据权利要求1所述的蔬菜育苗基质，其特征在于，所述效应蛋白的制备方法为：构建含有效应因子RxLR129113的基因工程菌，诱导效应因子RxLR129113表达为效应蛋白。


3.根据权利要求2所述的蔬菜育苗基质，其特征在于，所述蔬菜育苗基质包括基质前料和表达所述效应蛋白的基因工程菌的菌液，
或所述蔬菜育苗基质由基质前料和表达所述效应蛋白的基因工程菌的菌液组成。


4.根据权利要求3所述的蔬菜育苗基质，其特征在于，所述菌液与所述基质前料的相对用量为1.0～1.5mL/kg，所述菌液的菌体浓度为1.8*108～2.0*109菌体/mL。


5.根据权利要求4所述的蔬菜育苗基质，其特征在于，所述基质前料由如下重量份的组分制备：林业废弃物及菌渣发酵物30～35份、发酵鸡粪15～20份、稻壳发酵料25～30份、草炭15～20份，多元复合肥5～8份。


6.一种含有效应蛋白的蔬菜育苗基质的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：
(1)构建可表达效应因子RxLR129113的基因工程菌，筛选表达量较高的菌株进行扩大培养，培养至菌体浓度达到1.8*108～2.0*109菌体/mL，获得表达所述效应蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱春原，李京，高克祥，李壮，张修国，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：山东;37