EST-SSR标记鉴定换锦花和中国石蒜杂交种方法和引物技术

本申请公开了一种利用EST‑SSR标记鉴定换锦花和中国石蒜杂交种的方法，本申请还公开了基于换锦花转录组序列的EST‑SSR核心引物组以及EST‑SSR标记在换锦花和中国石蒜杂交种鉴定中的应用。利用EST‑SSR核心引物建立快速鉴定换锦花和中国石蒜杂交种F1的真实性的EST‑SSR技术体系，为石蒜属种间杂交提供验证方法，缩短石蒜属杂交品种选育的周期。

【技术实现步骤摘要】
EST-SSR标记鉴定换锦花和中国石蒜杂交种方法和引物
本申请涉及EST-SSR标记鉴定换锦花和中国石蒜杂交种方法和引物。
技术介绍
石蒜属植物花色丰富，花型优美，杂交育种一直石蒜属植的遗传育种的重要手段。一般情况下，石蒜属杂交种F1代从种子播种到开花需要5～6年的时间，生长周期长，因而在生长的早期不能正确检测石蒜属植物的杂交种F1真实性。目前由于石蒜属植物生长周期长使田间性状调查等形态学鉴定方法影响杂交鉴定和后续育种工作效率。而对亲本与杂种的RAPD标记、ISSR标记和AFLP标记等方面的研究仅仅对现在的杂交种进行可能的亲本的确定。而对于杂交种真实性的早期鉴定未见报道。随着现代生物科技的迅速发展，基于转录组测序所开发的EST-SSR标记具有在基因组中分布广泛、多态性高、共显性、检测程序简单等优点，被广泛应用于番茄、茄子、花生、马铃薯、美洲黑杨、西瓜、大豆等杂交种真实性和纯度鉴定及指纹图谱标记等，因而对比田间性状调查鉴定而言，SSR种间杂种鉴定技术具有能够克服田间鉴定所需周期长、成本高、不便捷的优点，极具可靠性，为后续工作提供技术支撑和决策依据本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用EST-SSR标记鉴定换锦花和中国石蒜杂交种的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)提取待测样品基因组的DNA；/n(2)以步骤(1)提取的DNA为模板，基于换锦花转录组序列的EST-SSR核心引物组进行PCR扩增，得到不同长度的扩展产物；所述EST-SSR核心引物组包括下述3对引物中的至少2对，每对引物由上游引物和下游引物组成，每对引物的核苷酸序列分别为SEQ ID NO.1、SEQID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6，其中编号为奇数的核苷酸序列为上游引物，编号为偶数的核苷酸序列为下游引物；/n(3)对...

【技术特征摘要】
1.一种利用EST-SSR标记鉴定换锦花和中国石蒜杂交种的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)提取待测样品基因组的DNA；
(2)以步骤(1)提取的DNA为模板，基于换锦花转录组序列的EST-SSR核心引物组进行PCR扩增，得到不同长度的扩展产物；所述EST-SSR核心引物组包括下述3对引物中的至少2对，每对引物由上游引物和下游引物组成，每对引物的核苷酸序列分别为SEQIDNO.1、SEQIDNO.2、SEQIDNO.3、SEQIDNO.4、SEQIDNO.5和SEQIDNO.6，其中编号为奇数的核苷酸序列为上游引物，编号为偶数的核苷酸序列为下游引物；
(3)对步骤(2)所得不同长度的扩增产物进行测序分型。


2.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述的EST-SSR核心引物组包括权利要求1所述的3对引物。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的基于换锦花转录组序列的EST-SSR核心引物组由以下方法筛选得到：基于换锦花转录组的序列，筛选EST序列，搜索EST序列中的SSR位点，针对SSR位点设计、合成目标引物，对所合成的目标引物进行PCR扩增、再对扩增产物通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析，筛选得到权利要求1所述的换锦花EST-SSR分子标记的...

【专利技术属性】
技术研发人员：高燕会，石艳，童再康，
申请(专利权)人：浙江农林大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33