一种吉祥草提取物的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药技术领域，公开了吉祥草提取物在制备激活自然杀伤性T细胞的药物中的应用。吉祥草洗净后经水煎后过滤，滤渣用氯仿甲醇提取，减压蒸馏后得到的吉祥草提取物。该提取物能够激活自然杀伤性T细胞，使其分泌IL‑2、IL‑4、IFN‑γ，具有治疗癌症、感染和自身免疫性疾病的应用前景。本发明专利技术有利于环境保护，有利于吉祥草的全面开发。

【技术实现步骤摘要】
一种吉祥草提取物的应用
本专利技术属于生物医药
，具体涉及吉祥草提取物在制备激活自然杀伤性T细胞药物中的应用。
技术介绍
自然杀伤性T细胞（NKT细胞）是一种T淋巴细胞，在固有免疫和获得性免疫间发挥着重要的桥梁作用。NKT细胞被激活后迅速释放出大量细胞因子，包括1型辅助性T细胞因子(Thelper1，Th1)和Th2型细胞因子。Th1型细胞因子，如白细胞介素(Interleukin，IL)-2和干扰素-γ(Interferon-γ，IFN-γ)，促进机体的细胞免疫应答，增强细胞毒作用，进而发挥抗感染抗肿瘤的作用。Th2型细胞因子，如IL-4和IL-10，刺激B细胞增殖分化产生抗体，促进机体的体液免疫应答；诱导树突状细胞的成熟，影响自然杀伤细胞、巨噬细胞、传统T细胞以及B淋巴细胞的功能，进而调节机体的固有免疫和适应性免疫应答。因此靶向激活NKT细胞成为免疫治疗的热点。吉祥草为百合科植物吉祥草属的全草。主要分布在我国华东、中南、西南各省区，在云南、贵州、湖南、广西、四川等苗族人口主要聚居区，对吉祥草的使用都较广泛，是我国西南苗族地区常用的传统草药之一。味甘，性凉，具有清肺止咳、凉血止血、解毒利咽等功效，民间常用于治疗支气管炎、肺炎、肺结核、阴虚哮喘、吐血、咯血、黄疸、治跌打损伤、扭挫伤、遗精、急惊风、日翳、疳积、肝癌、胆结石、风湿关节炎疼痛、水肿等病症。吉祥草在中医临床中应用广泛，近年来对吉祥草化学和药理的深入研究，对认识吉祥草及其成分多方面的药理作用及临床传统应用提供了理论依据。现代科学研究证明，吉祥草中含有甾体类、黄酮类、木脂素类、萜类、有机酸、挥发油等多种化学成分。其药理作用主要表现在抗溶血、止咳、化痰及抗炎作用、杀灭钉螺作用、cAMP磷酸二酯酶抑制作用、降血糖作用、镇痛等作用。我们在处理吉祥草的过程中，突发奇想，对吉祥草进行提取，并对吉祥草提取物进行活性测试；意外地发现吉祥草提取物具有良好的免疫活性，具有制备激活自然杀伤性T细胞药物的前景。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供吉祥草提取物在制备激活自然杀伤性T细胞药物中的应用。本专利技术的目的是这样实现的：吉祥草提取物在制备激活自然杀伤性T细胞药物中的应用。吉祥草提取物能够激活自然杀伤性T细胞，使其分泌IL-2。吉祥草提取物能够激活自然杀伤性T细胞，使其分泌IL-4。吉祥草提取物能够激活自然杀伤性T细胞，使其分泌IFN-γ。吉祥草提取物通过以下方式得到：（1）水煎：在吉祥草中加入吉祥草质量体积（g/mL）5倍的蒸馏水，常温浸泡半小时后，煮沸半小时，过滤，得到滤渣；（2）提取：将滤渣放在鼓风干燥箱中，50℃鼓风干燥过夜，取出冷却后，将吉祥草置入烧杯，加入质量体积（g/mL）1~3倍的氯仿甲醇溶剂浸泡12小时，过滤，沉淀继续用氯仿甲醇溶剂提取5次，减压浓缩后，得到吉祥草提取物。步骤（2）中氯仿甲醇溶剂的体积比为1：1。吉祥草提取物作为活性成分或者是药用载体。本专利技术优点：本专利技术提供的吉祥草提取物能够有效激活自然杀伤性T细胞，具有治疗癌症、感染和自身免疫性疾病的应用前景本专利技术有助于吉祥草的全面开发。附图说明图1为吉祥草提取物刺激小鼠脾淋巴细胞分泌IL-4；图2为吉祥草提取物刺激NKT细胞小鼠杂交瘤2H4细胞分泌IL-2；图3为吉祥草提取物刺激小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-γ。具体实施方式下面对本专利技术作进一步的说明，但不以任何方式对本专利技术加以限制，基于本专利技术所作的任何变换，均属于本专利技术的保护范围。吉祥草提取物在制备激活自然杀伤性T细胞药物中的应用。吉祥草提取物能够激活自然杀伤性T细胞，使其分泌IL-2。吉祥草提取物能够激活自然杀伤性T细胞，使其分泌IL-4。吉祥草提取物能够激活自然杀伤性T细胞，使其分泌IFN-γ。吉祥草提取物通过以下方式得到：（1）水煎：在吉祥草中加入吉祥草质量体积（g/mL）5倍的蒸馏水，常温浸泡半小时后，煮沸半小时，过滤，得到滤渣；（2）提取：将滤渣放在鼓风干燥箱中，50℃鼓风干燥过夜，取出冷却后，将吉祥草置入烧杯，加入质量体积（g/mL）1~3倍的氯仿甲醇溶剂浸泡12小时，过滤，沉淀继续用氯仿甲醇溶剂提取5次，减压浓缩后，得到吉祥草提取物。步骤（2）中氯仿甲醇溶剂的体积比为1：1。吉祥草提取物作为活性成分或者是药用载体。实施例1在吉祥草中加入吉祥草质量体积（g/mL）5倍的蒸馏水，常温浸泡半小时后，煮沸半小时，过滤，得到滤渣；将滤渣放在鼓风干燥箱中，50℃鼓风干燥过夜，取出冷却后，将吉祥草置入烧杯，加入质量体积（g/mL）1倍的氯仿甲醇溶剂浸泡12小时，过滤，沉淀继续用氯仿甲醇溶剂提取5次，减压浓缩后，得到吉祥草提取物。实施例2在吉祥草中加入吉祥草质量体积（g/mL）5倍的蒸馏水，常温浸泡半小时后，煮沸半小时，过滤，得到滤渣；将滤渣放在鼓风干燥箱中，50℃鼓风干燥过夜，取出冷却后，将吉祥草置入烧杯，加入质量体积（g/mL）2倍的氯仿甲醇溶剂浸泡12小时，过滤，沉淀继续用氯仿甲醇溶剂提取5次，减压浓缩后，得到吉祥草提取物。实施例3在吉祥草中加入吉祥草质量体积（g/mL）5倍的蒸馏水，常温浸泡半小时后，煮沸半小时，过滤，得到滤渣；将滤渣放在鼓风干燥箱中，50℃鼓风干燥过夜，取出冷却后，将吉祥草置入烧杯，加入质量体积（g/mL）3倍的氯仿甲醇溶剂浸泡12小时，过滤，沉淀继续用氯仿甲醇溶剂提取5次，减压浓缩后，得到吉祥草提取物。实施例4小鼠NKT杂交瘤细胞活性实验以实施例1制备得到的吉祥草提取物进行试验，具体试验方法和过程如下：将吉祥草提取物溶于DMSO中，配制成100mg/ml的储存溶液备用，实验时用培养基梯度稀释成400μg/ml，200μg/ml，100μg/ml的溶液。取对数期的A20-CD1d细胞接种于96孔平板上，接种密度为3X104/孔，接种体积为100μl，然后分别加100μl的含药培养基，以含等量DMSO的培养基作为阴性对照，以100ng/ml的α-Galcer作为阳性对照。于37℃培养箱中共孵育24h，然后弃去培养基，加入150μl的2H4细胞，密度为3X104/孔，继续培养24h后收集上清液，用酶联免疫吸附法（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay,ELISA）检测IL-2细胞因子的分泌。实验结果：图2为吉祥草提取物刺激NKT细胞小鼠杂交瘤2H4细胞分泌IL-2。在低浓度时即显示出较强的激活作用，高浓度时可能因为毒性所以反而分泌的IL-2减少。从图中可以看出，本专利技术提供的吉祥草提取物对NKT细胞有激活作用。实施例5脾淋巴细胞应答活性测试以实施例1制备得到的吉祥草提取物进行试验，具体试验方法和过程如下：...

【技术保护点】
1.一种吉祥草提取物的应用，其特征在于所述的吉祥草提取物在制备激活自然杀伤性T细胞药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.一种吉祥草提取物的应用，其特征在于所述的吉祥草提取物在制备激活自然杀伤性T细胞药物中的应用。


2.根据权利要求1所述的吉祥草提取物的应用，其特征在于所述的吉祥草提取物能够激活自然杀伤性T细胞，使其分泌IL-2。


3.根据权利要求1所述的吉祥草提取物的应用，其特征在于所述的吉祥草提取物能够激活自然杀伤性T细胞，使其分泌IL-4。


4.根据权利要求1所述的吉祥草提取物的应用，其特征在于所述的吉祥草提取物能够激活自然杀伤性T细胞，使其分泌IFN-γ。


5.根据权利要求1所述的吉祥草提取物的应用，其特征在于所述的吉祥草提取物通过...

【专利技术属性】
技术研发人员：倪广惠，李宏哲，李莉，何越峰，赵胤，殷珊，刘姣，吴艳丹，
申请(专利权)人：云南中医药大学，
类型：发明
国别省市：云南;53