一种防控梨叶片异常脱落的方法技术

本发明专利技术公开了一种防控梨叶片异常脱落的方法，即对梨树喷施外源赤霉素溶液就可有效防控梨叶片异常脱落。本发明专利技术研究发现，发生异常落叶树的叶柄离区中，有生理活性的GA

【技术实现步骤摘要】
一种防控梨叶片异常脱落的方法
本专利技术涉及一种防控梨异常落叶的方法，更具体的说涉及一种通过赤霉素处理延缓衰老，防止梨异常落叶发生的方法。
技术介绍
梨是我国第三大果树，产量和栽培面积约占世界的70％，在国民经济中有重要的作用。但近些年，梨异常落叶问题较为严重，一直影响梨的产量和品质，使果农每年遭受着很大损失。梨异常落叶是指梨正常生长期内出现的叶片大量脱落现象，也称早期落叶。异常落叶会严重影响树体营养累积，造成第二年梨果产量和品质下降。在我国各产梨区均有不同程度的发生大量异常落叶现象，尤其以长江以南砂梨产区发生范围较广、危害较重。梨树花芽为混合芽，分化属夏秋分化型，花芽在8月已完成分化，具备开花能力。梨早期异常大量落叶后，若遇到水分、温度适宜，树体则打破休眠，部分花芽和叶芽萌发，出现二次开花和抽梢现象，导致树势减弱，严重影响梨的产量和品质。植物激素在调节植物叶片脱落过程中起着重要作用，是脱落的重要信号之一。赤霉素是一类化合物的总称，目前已鉴定出100多种，其中GA12是赤霉素合成过程中重要的中间体，GA1，GA3，GA4等具有较强生物活性，在果树上的应用广泛，可诱导无核果实，打破休眠，延缓果实脱落等。另外，赤霉素在植物体中，可能作为活性氧的清除剂，可以促进抗氧化酶如CAT、SOD、POD等活性的提高，使组织细胞有较强的活性氧清除能力，减少活性氧在体内的积累，增强自身的防御能力，减轻对细胞的损害，以推迟植物细胞程序性死亡过程，延缓叶片脱落。然而，赤霉素在梨落叶方面的研究较晚，目前还缺乏简单有效的防止梨异常落叶的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是为防控梨异常落叶的发生，提供了一种运用赤霉素处理简便防控梨异常落叶的方法，从而提高果实的产量和品质。本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：赤霉素在防控梨叶片异常脱落中的应用。上述的应用，其在于对梨树枝条外源喷施赤霉素溶液。作为一种优选技术方案，所述赤霉素溶液的浓度为0.5～1.0mg/L；最优选为1.0mg/L。一种防控梨叶片异常脱落的方法，对梨树枝条外源喷施赤霉素溶液。作为一种优选技术方案，所述赤霉素溶液的浓度为0.5～1.0mg/L；最优选为1.0mg/L。一种筛选防控梨叶片异常脱落的方法，该方法包括以下步骤：(1)测定梨叶柄离区中的赤霉素含量：取梨叶柄离区，液氮速冻，放置于-80℃超低温冰箱保存，用于测定叶柄离区中的赤霉素含量；(2)外源喷施赤霉素与其他植物生长调节剂，观察赤霉素与其他植物生长调节剂对梨落叶情况的影响；(3)外源喷施不同浓度赤霉素处理，测定叶柄离区的生理变化，确定最佳赤霉素处理浓度。作为一种优选技术方案，步骤(1)中测定叶柄离区中的赤霉素含量的过程为：选材：在梨正常生长期间，将采样地点的正常生长区与落叶严重区随机挑选3株果树，每株果树选取3支带有叶片的果枝整枝采下放于采集样品袋中，为了消除生理影响，选择生长相似的枝条带回实验室进行仔细彻底的清洗。取样：使用洁净的刀片从枝条样本中手工解剖叶柄离区组织，其中包含离区细胞及邻近的细胞，置于液氮中，保存于-80℃冰箱。测定：50mg的叶柄离区样品在液氮中研磨成粉末后，同时加入0.5mL提取液(甲醇/水，80/20，v/v)并在4℃下避光提取12h。离心(10,000g，20min，4℃)后，收集上清液，将所得到的粗提液经过HiCapt-C18/SAX固相萃取柱串联的装置，以除去色素和酯类杂质。HiCapt-C18/SAX串联的固相萃取小柱需先预处理，清洗(8mL水，8mL甲醇)与活化(8mL甲醇/水，80/20，v/v)。上样后，取下上端的HiCapt-C18固相萃取柱(1mL，50mg)，采用2mL甲醇/水(80/20，v/v)对SAX萃取小柱(3mL，200mg)进行清洗，再用3mL乙腈/甲酸(ACN/FA)(99/1，v/v)对SAX萃取小柱上保留的目标酸性植物激素进行解吸。解吸液在40℃下恒定氮气流吹干，并用100μL水(H2O)重新溶解。在所得到的100μL溶液中加入10μL甲酸(FA)，使得酸性植物激素呈分子状态。然后用乙醚进行萃取(2×1mL)。将2次萃取的有机相进行合并后在室温下氮气吹干，并重新溶解于100μL乙腈(ACN)中。在所得到的乙腈(ACN)溶液中加入10μL×20μmol/mL三乙胺(TEA)和10μL×20μmol/mL3-溴代丙烯酰基三甲基溴化铵(BTA)，在室温下涡旋35min后氮气吹干，然后用200μL的H2O/ACN(90/10，v/v)重新溶解，以供随后的UPLC-MS/MS分析。优选的，步骤(2)中所述赤霉素与其他植物生长调节剂的处理浓度为：赤霉素(GA3)0.5mg/L，1.0mg/L；乙烯利(ETH)0.04％，0.08％；脱落酸(ABA)0.3mg/L，1.0mg/L；生长素(IAA)0.3mg/L，0.6mg/L，以清水为对照。优选的，步骤(2)中取材为取长势一致、同一品种(例如‘丰水’)的梨树，喷施时选择晴天上午，将植物生长调节剂在叶片正面与反面以及与叶柄连接处喷洒均匀。优选的，步骤(2)处理方法为各浓度的试剂重复三株果树，每6～8天(优选为7天左右)喷施一次。处理前统计每个枝条的叶片数，以便之后进行叶片保留率的统计，每隔6～8天(优选7天左右)统计一次叶片数。叶片保留率的计算方法为：叶片保留率＝目前叶片数/最初叶片总数。优选的，步骤(2)中0.5mg/L和1.0mg/L赤霉素处理均可提高叶片保留率，而1.0mg/L赤霉素处理效果更好。优选的，步骤(3)中所述的喷施的赤霉素浓度为0.5mg/L和1.0mg/L。优选的，步骤(3)处理方法为选取生长势一致的健壮枝条，枝条长度约40cm，放置于含清水的烧杯中，每4h进行赤霉素(0.5mg/L，1.0mg/L)处理，喷施清水为对照，共28h。同样将叶片正反面及与叶柄连接部位喷施均匀。处理完成6h后采集枝条叶柄离区置于-80℃保存，用于测定叶柄离区的生理变化，包括活性氧相关物质含量及抗氧化酶活的测定。优选的，步骤(3)的测定的叶柄离区的生理指标为过氧化氢(H2O2)和超氧阴离子(OFR)含量以及过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。过氧化氢(H2O2)含量的测定方法为分光光度法，测定原理是H2O2与硫酸钛生成黄色的过氧化钛复合物，在415nm有特征吸收。超氧阴离子(OFR)含量的测定方法为分光光度法，测定原理是超氧阴离子与盐酸羟胺反应生成NO2－，NO2－在对氨基苯磺酸和α－萘胺的作用下，生成红色的偶氮化合物，在530nm处有特征吸收峰，根据ΔA值可以计算样品中·O2－含量，反应式为NH2OH+2O2－+H+→NO2－+H2O2+H2O。过氧化氢酶(CAT)活性的测定方法为分光光度法，测定原理是H2O2在240nm下有特征吸收峰，CAT能够分解H2O2，使反应溶液240nm下的吸光度随反应时间而下降，根据吸光度的变化率可计算出CAT活本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.赤霉素在防控梨叶片异常脱落中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.赤霉素在防控梨叶片异常脱落中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，对梨树枝条外源喷施赤霉素溶液。


3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述赤霉素溶液的浓度为0.5～1.0mg/L；优选为1.0mg/L。


4.一种防控梨叶片异常脱落的方法，其特征在于，对梨树枝条外源喷施赤霉素溶液。


5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述赤霉素溶液的浓度为0.5～1.0mg/L；优选为1.0mg/L。


6.一种筛选防控梨叶片异常脱落的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)测定梨叶柄离区中的赤霉素含量：取梨叶柄离区，液氮速冻，放置于-80℃超低温冰箱保存，用于测定叶柄离区中的赤霉素含量；
(2)外源喷施赤霉素与其他植物生长调节剂，观察赤霉素与其他植物生长调节剂对梨落叶情况的影响；
(3)外源喷施不同浓度赤霉素处理，测定叶柄离区的生理变化，确定最佳赤霉素处理浓度。


7.根据权利要求1所述的筛选防控梨叶片异常脱落的方法，其特征在于，步骤(1)中测定叶柄离区中的赤霉素含量的过程为：
选材：在采样地点的正常生长区与早期落叶严重区随机挑选3株果树，每株果树选取3支带有叶片的果枝整枝采下放于采集样品袋中，为了消除生理影响，选择生长相似的枝条带回实验室进行仔细彻底的清洗；
取样：使用洁净的刀片从枝条样本中手工解剖叶柄离区组织，其中包含离区细胞及邻近的细胞，置于液氮中，保存于-80℃冰箱；
测定：50mg的叶柄离区样品在液氮中研磨成粉末后，同时加入0.5mL体积比为80:20的甲醇/水提取液并在4℃下避光提取12h，10,000g，20min，4℃离心后，收集上清液，将所得到的粗提液经过HiCapt-C18/SAX固相萃取柱串联的装置，以除去色素和酯类杂质，HiCapt-C18/SAX串联的固相萃取小柱需先预处理，清洗与活化；上样后，...

【专利技术属性】
技术研发人员：王鹏，郝紫微，张绍铃，吴巨友，谢智华，齐开杰，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32