一种基于催化发夹组装-动态光散射技术的端粒酶活性检测方法技术

本发明专利技术公开了一种基于催化发夹组装‑动态光散射技术的端粒酶活性检测方法，包括如下步骤：提取待测样品中的端粒酶，催化发夹组装产物获得和动态光散射检测得到信号，实现对端粒酶活性的高灵敏检测。本发明专利技术提供的端粒酶活性检测方法操作简单，成本低，所需样品少且特异性好，利用该方法能够检测多种癌症患者尿液中的端粒酶活性，尤其在膀胱癌的无创诊断方面具有潜在的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种基于催化发夹组装-动态光散射技术的端粒酶活性检测方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种基于催化发夹组装-动态光散射技术的端粒酶活性检测方法。
技术介绍
端粒是真核生物染色体末端的一种特殊结构，能够防止染色体DNA的降解、末端融合、非正常重组等。在正常体细胞中，端粒长度随着细胞的周期分裂递减，最终导致细胞无法继续分裂，使细胞寿命受到限制，防止细胞过度分裂。端粒酶是一种核糖核蛋白酶，能以自身RNA为模板，在染色体末端延伸TTAGGG重复序列以维持端粒长度。研究表明，端粒酶活性在大多数正常体细胞中被抑制，但在85-90％的肿瘤细胞中被高度激活，如乳腺癌、肝癌、肺癌、胃癌等。因此，端粒酶被认为是癌症早期诊断的潜在生物标志物，端粒酶活性的有效检测对生物医学研究具有重要的意义。目前，基于聚合酶链反应(PCR)的端粒重复序列扩增法(TRAP)是检测端粒酶活性的常用方法。然而，该方法存在操作复杂，费用昂贵以及易受诸多因素的干扰而产生假阳性结果等问题。近年来，人们又开发了一些无需PCR反应的端粒酶活性检测方法，例如等温核酸扩增法，比色本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于催化发夹组装-动态光散射技术的端粒酶活性检测方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1、端粒酶提取：利用CHAPS法提取待测样品中的端粒酶，得到待测端粒酶提取物；/nS2、催化发夹组装产物获得：将待测端粒酶提取物与端粒酶引物在延伸反应缓冲液中进行延伸反应，得到延伸产物，然后在延伸产物中加入金纳米粒子探针，在温度为25-40℃进行催化发夹组装反应，得到催化发夹组装产物；/nS3、动态光散射检测：催化发夹组装产物通过动态光散射检测得到信号。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于催化发夹组装-动态光散射技术的端粒酶活性检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、端粒酶提取：利用CHAPS法提取待测样品中的端粒酶，得到待测端粒酶提取物；
S2、催化发夹组装产物获得：将待测端粒酶提取物与端粒酶引物在延伸反应缓冲液中进行延伸反应，得到延伸产物，然后在延伸产物中加入金纳米粒子探针，在温度为25-40℃进行催化发夹组装反应，得到催化发夹组装产物；
S3、动态光散射检测：催化发夹组装产物通过动态光散射检测得到信号。


2.根据权利要求1所述的端粒酶活性检测方法，其特征在于，所述步骤S2中的端粒酶引物序列为：5`-AATCCGTCGAGCAGAGTT-3`；所述延伸产物序列为：5`-AATCCGTCGAGCAGAGTTAGGGTTAGGG-3`。


3.根据权利要求1所述的端粒酶活性检测方法，其特征在于，所述步骤S2中的金纳米粒子探针包括发夹探针H1修饰的金纳米粒子AuNPs-H1探针和发夹探针H2修饰的金纳米粒子AuNPs-H2探针。


4.根据权利要求3所述的端粒酶活性检测方法，其特征在于，所述发夹探针H1的序列为5`-SH-(CH2)6-CCCTAACCCTAACTCTGCCTAGGGTACTGCAGAGTTAGGG-3`；所述发夹探针H2的序列为5`-SH-(CH2)6-CTCTGCAGTACCCTAGGCAGAGTTAGGGTACTG-3`。


5.根据权利要求1所述的端粒酶活性检测方法，其特征在于，所述步骤S2中的金纳米粒子探针的制备方法包括以下步骤：
A、分别在发夹...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹李，
申请(专利权)人：广东药科大学，
类型：发明
国别省市：广东;44