一种DNA可逆保护和分离的方法技术

本发明专利技术提供了一种对DNA进行可逆保护和分离的方法，首先将目标DNA分子的5’端进行磷酸化；然后将5’端腺苷化修饰；终止反应后获得的样品中加入对腺苷化修饰DNA敏感的核酸外切酶消化模板；最后将获得的腺苷化修饰DNA，即分离所得目标DNA，进行测序鉴定等技术分析，所得序列的5’端即为腺苷化修饰位点。本发明专利技术提供的方法，填补了现有技术无法精确定位基因组DNA上断裂位点的空白，能够实现对不同长度和不同来源的DNA样品进行断裂位点的定量和定位分析，使用简便，易于操作，而且对样品无特殊要求，准确率高、检测背景影响低、分辨率高。

【技术实现步骤摘要】
一种DNA可逆保护和分离的方法
本专利技术属于分子生物学与生物医药领域，具体涉及一种用于对DNA大分子进行可逆保护和分离的方法。
技术介绍
DNA分子存储着生物体赖以生存和繁衍的遗传信息，因此维护DNA的完整性对细胞至关重要。然而，多种外界环境和生物体内部的因素都会导致DNA分子的损伤或改变，如紫外线、辐射、致癌性化学物质、细胞自身代谢过程中产生的氧化压力等。这些损伤破坏了基因组的完整性，并威胁着基因组的稳定。现在普遍认为DNA损伤是癌症和许多其他与衰老相关疾病的主要原因，因此对人类健康来说这是一个非常重要的问题。在诸多DNA损伤类型中，链断裂（Strandbreak）是公认的对细胞危害最大的一种损伤，因为链断裂可以阻断DNA复制、转录等过程，同时还可能导致重组事件发生。因此，DNA链断裂是生命科学领域的一个研究热点。其中，研究基因组DNA上链断裂发生的位置和规律是理解该类损伤的基础。目前，在全基因组范围内定位DNA断裂位点的技术主要有两种：Baranello课题组开发的DSB-Seq、SSB-Seq技术和PhilippKapr本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种DNA可逆保护和分离的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n（1）将DNA分子通过酶处理，获得含5’磷酸化DNA的样品；/n（2）将含5’磷酸化DNA的样品解旋获得单链DNA；/n（3）将单链DNA进行5’腺苷化标记，获得含5’腺苷化DNA的样品；/n（4）使用腺苷化敏感的5’→3’核酸外切酶对步骤（3）获得的样品进行消化，去除未被5’腺苷化修饰的单链DNA，纯化后获得腺苷化修饰的目标DNA分子；/n（5）对腺苷化修饰的目标DNA分子进行去腺苷化处理，即可获得目标DNA分子。/n

【技术特征摘要】
1.一种DNA可逆保护和分离的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将DNA分子通过酶处理，获得含5’磷酸化DNA的样品；
（2）将含5’磷酸化DNA的样品解旋获得单链DNA；
（3）将单链DNA进行5’腺苷化标记，获得含5’腺苷化DNA的样品；
（4）使用腺苷化敏感的5’→3’核酸外切酶对步骤（3）获得的样品进行消化，去除未被5’腺苷化修饰的单链DNA，纯化后获得腺苷化修饰的目标DNA分子；
（5）对腺苷化修饰的目标DNA分子进行去腺苷化处理，即可获得目标DNA分子。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述DNA分子为双链或单链；所述DNA分子为单链时，省略步骤（2）。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述酶为能够将含有5’羟基的DNA转化为5’磷酸化DNA的酶；所述酶选自T4多聚核苷酸激酶或参与DNA损伤位点的切除修复酶；
步骤（4）中，所述腺苷化敏感的5’→3’核酸外切酶选自T5核酸外切酶或RecJ核酸外切酶中的一种或组合。


4....

【专利技术属性】
技术研发人员：曹博，张清华，刘莉莉，季红，
申请(专利权)人：曲阜师范大学，
类型：发明
国别省市：山东;37