【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有异源抗原的活的减毒黄病毒专利技术背景乙型肝炎病毒(HBV)是乙型肝炎的致病物，乙型肝炎是一种能够演变为慢性的肝疾病。慢性乙型肝炎的并发症包括肝硬化和肝细胞癌或肝癌。估计有2.4亿人(主要在亚洲和非洲)慢性感染HBV，每年有超过686000人由于与慢性HBV感染相关的并发症而死亡。HBV是肝DNA病毒科(hepadnaviridae)(具有部分双链基因组DNA的逆转录病毒家族)的成员。它最常见于从受感染的母亲的围产期传播，或通过无保护的性活动或静脉用药水平传播。HBV感染肝细胞后，HBV核衣壳被转运至细胞核。在那里，遗传物质被修复并作为微型染色体(cccDNA)保留在细胞的细胞核中，在细胞核中它起着储库的作用。大多数患者有效控制急性感染而没有出现任何明显的临床症状。但是，5-10％的受感染成年人(和>90％的受感染新生儿)无法清除所述病毒并发展慢性乙型肝炎。在清除所述病毒的那些人中，检测到Th1谱(IFN-γ的产生)的强烈和多特异性CD4和CD8T细胞应答，对HBV核衣壳蛋白[也称为HBV核心抗原(HBcAg或HBc)]特异性...
【技术保护点】
1.包含黄病毒序列的多核苷酸，其特征在于编码所述黄病毒的核苷酸序列前面是编码以下的序列：/n-黄病毒衣壳蛋白的部分，其包含黄病毒衣壳蛋白的N末端部分或由黄病毒衣壳蛋白的N末端部分组成，/n-免疫原性蛋白质，或其包含免疫原性肽的部分，以及/n-2A切割肽。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171005 GB 1716254.61.包含黄病毒序列的多核苷酸，其特征在于编码所述黄病毒的核苷酸序列前面是编码以下的序列：
-黄病毒衣壳蛋白的部分，其包含黄病毒衣壳蛋白的N末端部分或由黄病毒衣壳蛋白的N末端部分组成，
-免疫原性蛋白质，或其包含免疫原性肽的部分，以及
-2A切割肽。
2.根据权利要求1所述的多核苷酸，其中所述黄病毒衣壳蛋白的部分包含黄病毒衣壳蛋白的21个N末端氨基酸或由黄病毒衣壳蛋白的21个N末端氨基酸组成。
3.根据权利要求1或2所述的多核苷酸，其中编码衣壳基因的N末端部分的核苷酸序列与全长病毒序列中的相应序列相比具有一个或多个同义密码子。
4.根据权利要求1、2或3所述的多核苷酸，其中所述黄病毒是黄热病病毒。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的多核苷酸，其中黄热病病毒衣壳的末端部分由序列MSGRKAQGKTLGVNMVRRGVR(SEQIDNO：2)组成。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的多核苷酸，其中所述2A切割肽包含序列DXEXNPGP[SEQIDNO：46]。
7.根据权利要求1-5中任一项所述的多核苷酸，其中所述2A切割肽包含序列LxxxGDVExPGP[SEQIDNO：17]。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的多核苷酸，其中所述2A切割肽包含序列LLTCGDVEENPGP[SEQIDNO：18]。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的多核苷酸，其中所述2A切割肽是具有氨基酸序列EGRGSLLTCGDVEENPGP(SEQIDNO：16)的Thoseaasigna2A肽。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的多核苷酸，其中所述2A切割肽的C末端氨基酸是Gly、Ala、Ser或Thr。
11.根据权利要求1至10中任一项所述的多核苷酸，其中所述免疫原性蛋白质是T细胞抗原且其免疫原性片段包含T细胞表位。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的多核苷酸，其中编码所述免疫原性蛋白质或其片段的序列的5'的编码衣壳蛋白的核苷酸序列具有野生型黄病毒的核苷酸序列。
13.根据权利要求1至11中任一项所述的多核苷酸，其中所述免疫原性蛋白质或其免疫原性片段的密码子使用适合于在细菌中表达。
14.根据权利要求1至12中任一项所述的多核苷酸，其中具有同义密码子的序列是：
atgtctggtcgtaaagctcagggaaaaaccctgggcgtcaatatggtacgacgaggagttcgc(SEQIDNO：14)
和
agcggccgcaaagcccagggtaagacactgggcgtgaacatggttcgtcgcggcgtccgg(SEQIDNO:15)。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的多核苷酸，其中所述黄热病病毒是YF17D减毒病毒。
16.根据权利要求1至15中任一项所述的多核苷酸，其是细菌人工染色体(BacterialArtificialChromosome)。
17.根据权利要求16所述的多核苷酸，其中所述BAC包含用于将所述BAC扩增至每个细菌细胞超过10个拷贝的诱导型细菌ori序列以及病毒表达盒，该病毒表达盒包含所述多核苷酸的cDNA并包含用于在哺乳动物细胞中转录所述病毒cDNA和用于将转录的RNA加工成感染性RNA病毒的顺式调节元件。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的多核苷酸，其中所述T细胞抗原选自由HBC核心抗原、OVA和EBNA1组成的组。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的多核苷酸，其中所编码的T细胞抗原包含SEQIDNO：3的氨基酸序列或其包含T细胞表位的片段。
20.根据权利要求1至18中任一项所述的多核苷酸，其中所编码的T细胞抗原包含SEQIDNO：7的氨基酸序列或其包含T细胞表位的片段。
21.根据权利要求1至18中任一项所述的多核苷酸，其中所编码的T细胞抗原包含SEQIDNO：10的氨基酸序列或其包含T细胞表位的片段。
22.根据权利要求1至18中任一项所述的多核苷酸，其中所编码的T细胞抗原包含SEQIDNO：13的氨基酸序列。
23.一种黄病毒融合构建体，其特征在于所述黄病毒在其氨基末端前面是：
-黄病毒衣壳蛋白的部分，其包含黄病毒衣壳蛋白的N末端部分或由...
【专利技术属性】
技术研发人员：R·布德维恩斯，K·达迈尔，J·内茨，
申请(专利权)人：勒芬天主教大学，
类型：发明
国别省市：比利时;BE
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