一种具有抗炎活性的鲨鱼复合短肽及制备方法与应用技术

一种具有抗炎活性的鲨鱼复合短肽及制备方法与应用，涉及海洋生物技术领域。制备方法：将新鲜或冻存解冻后去骨的鲨鱼，剪成小块，用醇类溶液去除脂肪，反复漂洗至无味，沥干；用纯水浴浸烫处理鲨鱼块；冷却至室温后进行匀浆处理，用蛋白酶酶解得到酶解液，加热终止反应；将酶解液进行粗过滤，离心处理，取上清液过滤，将滤液除去溶剂，灭菌干燥，即得鲨鱼复合短肽。所述鲨鱼复合短肽具有抗炎活性，可作为配料在制备功能性食品和特殊医学用途配方食品中应用。具有显著的抗炎保肝护肾等生物学活性。简化以往处理原材料的复杂工序，获得了抗炎功效良好的优质复合短肽，达到可工业规模化，成本效益化生产的目的。

【技术实现步骤摘要】
一种具有抗炎活性的鲨鱼复合短肽及制备方法与应用
本专利技术涉及海洋生物
，尤其是涉及一种具有抗炎活性的鲨鱼复合短肽及制备方法与应用。
技术介绍
海洋物种中丰富的蛋白质蕴藏着宝贵的生物活性肽资源。近年来，科研人员从多种生物中提取混合多肽治疗炎症，替代传统的完整生物体入药。有研究表明鹿茸多肽能够对NIH3T3细胞产生抗炎作用并且是由其中多种肽共同作用的结果(高冷,王昊天,牛晓晖,等.鹿茸多肽蛋白的提取及功能研究[J].吉林中医药,2018,38(7):825-828)。海洋中鲨鱼的软骨含免疫活性因子，从中提取的鲨鱼软骨素也证实具有一定的抗炎活性(雷呈祥，彭武林，马丽.鲨鱼软骨活性物质的研究现状[J].海军医学杂志，2007，28(3):279-281)。传统中医药认为鲨鱼肉具有味甘，开胃进食、健脾益气、抗疲劳等功效，然而其是否具有抗炎功效鲜见报道。在鲨鱼的传统加工过程中，主要获取的是商业价值较高的鲨鱼翅、肝脏以及软骨，而鱼皮与鱼肉往往未得到有效利用，造成资源浪费。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有技术存在的上述问题，为了充分开发利用海洋生物资源，提供一种具有抗炎活性的鲨鱼复合短肽及制备方法与应用。所述具有抗炎活性的鲨鱼复合短肽的制备方法，包括以下步骤：1)将新鲜或冻存解冻后去骨的鲨鱼，剪成小块，用醇类溶液去除脂肪，反复漂洗至无味，沥干；2)用纯水浴浸烫处理步骤1)得到的鲨鱼块；3)冷却至室温后进行匀浆处理，用蛋白酶酶解得到酶解液，加热终止反应；4)将所述酶解液进行粗过滤，离心处理，取上清液过滤，将滤液除去溶剂，灭菌干燥，即得到鲨鱼复合短肽。在步骤1)中，所述鲨鱼原料为鲨鱼的鱼皮或鱼肉，所述鲨鱼可选择灰星鲨(Mustelusgriseus)，条纹斑竹鲨(Chiloscylliumplagiosum)或大青鲨(Prionaceglauca)中的一种；所述剪成小块可剪为约1cm3的小块；所述醇类溶液可选自乙醇水溶液、异丙醇水溶液、正丁醇等中的至少一种；所述醇类溶液的浓度可为10％～20％wt；所述去除脂肪的具体方法可为：用10～20倍体积/重量的醇类溶液浸泡10h，间隔8～12h换液一次；优选以l/kg计，醇类溶液的用量为鲨鱼块湿重的10倍体积；所述反复漂洗可倒入150目不锈钢筛网用水反复漂洗；所述水可采用二级反渗透纯水，对鲨鱼复合短肽的制备而言，超纯水洁净无杂质，除盐效果更好。在步骤2)中，所述用纯水浴浸烫处理步骤1)得到的鲨鱼块，以l/kg计，纯水的用量为鲨鱼块湿重的10～15倍体积，浸烫处理的温度可为90～95℃，采取设定常压升温，搅拌转速设定为30rpm，顺时针搅拌5min，逆时针搅拌5min交替进行，处理时间20～30min；纯水浴浸烫处理使鲨鱼组织蛋白受热均匀而变性，利于后续酶解反应的进行。在步骤3)中，所述蛋白酶可选自酸性蛋白酶、枯草杆菌蛋白酶、胶原酶、无花果蛋白酶、木瓜蛋白酶与菠萝蛋白酶等中的至少一种，蛋白酶优选木瓜蛋白酶；蛋白酶加入量按重量为鲨鱼组织湿重的1～6％，优选为3±0.5％；所述蛋白酶酶解的条件可为：pH5.5±1.5，温度53±2.0℃，酶解时间3.5±0.5h；所述加热终止反应的具体条件可为：升温至90～95℃，保持10～20min，以终止反应。在步骤4)中，所述粗过滤可采用300目筛网与棉纱布过滤；所述离心的速度可为8000～10000rpm，离心的时间可为10～20min；所述干燥可采用冷冻干燥或离心喷雾干燥。所述鲨鱼复合短肽具有抗炎活性，可作为配料在制备功能性食品和特殊医学用途配方食品中的应用。所述鲨鱼复合短肽，经体外及体内测试，显示具有显著的抗炎保肝护肾等生物学活性。鲨鱼皮与鲨鱼肉含有丰富的蛋白，通过工艺技术改进，以现代酶解技术方法处理，控制温和的反应过程条件，获得优质的具有营养价值及生物活性的复合短肽，进一步提升了生物资源的附加值及有效利用。本专利技术具有抗炎活性的鲨鱼复合短肽的制备方法，简化了以往处理原材料的复杂工序，获得了抗炎功效良好的优质复合短肽，达到了可工业规模化，成本效益化生产的目的。本专利技术具有抗炎活性的鲨鱼复合短肽的制备方法所获得的短肽种类丰富，综合抗炎效果显著，扩展了复合短肽的在功能食品及医学配方食品的研究与应用。经过实验研究表明，本申请制备的鲨鱼复合短肽，能适度提升巨噬细胞RAW264.7的活力，且其活性的升高，在一定范围内呈现与时间和浓度成正相关，这提示本专利技术鲨鱼复合短肽可能通过提升巨噬细胞的吞噬作用提升机体抗炎能力。经过进一步动物模型研究表明，在小鼠抗炎实验中，通过本申请制备的鲨鱼复合短肽灌胃小鼠15天，并注射细菌脂多糖LPS诱导急性炎症后，发现本申请制备的鲨鱼复合短肽能显著抑制小鼠肝功能指标的急性炎性上升；显著抑制肾功能指标中肌酐的急性炎性上升；综合来看具有与经典抗炎药阿司匹林相当的抗炎效果，且没有明显副作用。研究结果表明，服用本申请制备的鲨鱼复合短肽，具有良好的抗炎活性，避免炎症造成的组织器官功能损伤，有助于调理免疫系统，有望开发为新型的抗炎功能食品配料。本专利技术为充分开发利用海洋生物资源，以鲨鱼皮鱼肉作为原材料，提取一种具有抗炎活性的鲨鱼复合短肽，经细胞学及动物实验测试，发现其除了具有较高的蛋白营养价值之外，还具有抗炎保肝护肾等生物学活性，有望进一步开发为一种新型的抗炎功能食品配料。附图说明图1为本专利技术实施例制备的鲨鱼复合短肽在体外促进巨噬细胞RAW264.7的活力提升结果柱形图。图2为本专利技术实施例制备的鲨鱼复合短肽缓解细菌内毒素引起的小鼠急性肝肾功能损伤检测结果柱形图。具体实施方式以下实施例将结合附图对本专利技术作进一步的说明。实施例1将冻存解冻后去骨的条纹斑竹鲨剪成约1cm3小块，用鲨鱼块湿重的15倍体积的正丁醇水溶液(浓度为10％wt)去除脂肪，缓慢搅拌30rpm12h，中间换一次醇溶液。然后倒入150目不锈钢筛网用水反复漂洗至无味，沥干。用鲨鱼块湿重的15倍体积的纯水于95℃浴浸烫处理20min，冷却后进行匀浆处理。用木瓜蛋白酶酶解得到酶解液，酶解条件为：pH5.0,温度55℃,酶解时间3h，酶量为3％。之后升温至90℃保持20min，以终止反应。反应液用300目筛网与棉纱布过滤，滤液进行8000rpm离心20min，然后冻干以得到鲨鱼复合短肽(命名简称为：SCP)，并在-20℃下保存直至使用。实施例2将冻存解冻后去骨的灰星鲨剪成约1cm3小块，用鲨鱼块湿重的10倍体积的异丙醇水溶液(浓度为15％wt)去除脂肪，缓慢搅拌30rpm12h，中间换一次异丙醇水溶液。然后倒入150目不锈钢筛网用水反复漂洗至无味，沥干。用鲨鱼块湿重的15倍体积的纯水于95℃浴浸烫处理20min，冷却后进行匀浆处理。用菠萝蛋白酶酶解得到酶解液，酶解条件为:pH5.0,温度52℃,酶解时间4h，酶量4％。之后升温至90℃保持20min，以终止反应。反应液用3本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种具有抗炎活性的鲨鱼复合短肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：/n1)将新鲜或冻存解冻后去骨的鲨鱼，剪成小块，用醇类溶液去除脂肪，反复漂洗至无味，沥干；/n2)用纯水浴浸烫处理步骤1)得到的鲨鱼块；/n3)冷却至室温后进行匀浆处理，用蛋白酶酶解得到酶解液，加热终止反应；/n4)将所述酶解液进行粗过滤，离心处理，取上清液过滤，将滤液除去溶剂，灭菌干燥，即得到鲨鱼复合短肽。/n

【技术特征摘要】
1.一种具有抗炎活性的鲨鱼复合短肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1)将新鲜或冻存解冻后去骨的鲨鱼，剪成小块，用醇类溶液去除脂肪，反复漂洗至无味，沥干；
2)用纯水浴浸烫处理步骤1)得到的鲨鱼块；
3)冷却至室温后进行匀浆处理，用蛋白酶酶解得到酶解液，加热终止反应；
4)将所述酶解液进行粗过滤，离心处理，取上清液过滤，将滤液除去溶剂，灭菌干燥，即得到鲨鱼复合短肽。


2.如权利要求1所述一种具有抗炎活性的鲨鱼复合短肽的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述鲨鱼原料为鲨鱼的鱼皮或鱼肉，所述鲨鱼可选择灰星鲨、条纹斑竹鲨或大青鲨中的一种；所述剪成小块可剪为约1cm3的小块。


3.如权利要求1所述一种具有抗炎活性的鲨鱼复合短肽的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述醇类溶液选自乙醇水溶液、异丙醇水溶液、正丁醇中的至少一种；所述醇类溶液的浓度可为10％～20％wt。


4.如权利要求1所述一种具有抗炎活性的鲨鱼复合短肽的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述去除脂肪的具体方法为：用10～20倍体积/重量的醇类溶液浸泡10h，间隔8～12h换液一次；以l/kg计，醇类溶液的用量为鲨鱼块湿重的10倍体积；所述反复漂洗可倒入150目不锈钢筛网用水反复漂洗；所述水可采用二级反渗透纯水，对鲨鱼复合短肽的制备而言，超纯水洁净无杂质，除盐效果更好。


5.如权利要求1所述一种具有抗炎活性的鲨鱼复合短肽的制备方法，其特征在于在步骤2)中，所述用纯水浴浸烫处理步...

【专利技术属性】
技术研发人员：王悦，沈东炎，陈清西，
申请(专利权)人：厦门肽王基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：福建;35