miR-10a介导肿瘤相关成纤维细胞抑制结肠癌肝转移的应用制造技术

本发明专利技术提供了miR‑10a介导肿瘤相关成纤维细胞在如下1)‑6)中至少一种功能的产品中的应用，1)抑制肿瘤细胞增殖；2)促进肿瘤细胞凋亡；3)抑制肿瘤细胞迁移；4)抑制肿瘤细胞侵袭；5)抑制肿瘤细胞成球；6)预防和/或治疗肿瘤；所述肿瘤为结肠癌；所述肿瘤细胞为结肠癌细胞；miR‑10a的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明专利技术从一个全新的角度认识和了解过表达的miR‑10a在体外对肝成纤维细胞活性的影响，并深入探讨其活性改变对结肠癌细胞在肝脏形成转移灶的影响，以期为结肠癌肝转移的分子机制提供表观遗传学依据，为结肠癌的预防和治疗提供新的思路和靶点。

Mir-10a mediates tumor associated fibroblasts in inhibiting liver metastasis of colon cancer

【技术实现步骤摘要】
miR-10a介导肿瘤相关成纤维细胞抑制结肠癌肝转移的应用
本专利技术涉及生物
，特别涉及miR-10a介导肿瘤相关成纤维细胞抑制结肠癌肝转移的应用。
技术介绍
结肠癌(coloncancer)是人类目前最常见的消化道恶性肿瘤之一，我国发生率约为31.39/10万，随着人们生活习惯食物谱的改变，其发病率呈明显的上升趋势。结肠癌的基本治疗方法是手术切除，对高危II期和III/IV期结肠癌患者施行辅助化疗的方案。多数早期结肠患者能够得到成功外科切除，但是对于II/III期患者来说，往往出现复发，这与转移密切相关。约30％的患者在首次确诊时即伴有不同程度的肝转移，约20％的患者在肿瘤进展过程中会发生异时性肝转移。转移是结肠癌患者致死的主要原因，但迄今仍然缺乏检测和预防潜在转移的有效方法，故我们需进一步研究结肠癌的转移机制，寻找可预测性的标记物和治疗靶点。肿瘤的转移是一个多阶段、多步骤的复杂过程，受到肿瘤微环境的密切影响。肿瘤微环境(tumormicroenvironment,TME)是肿瘤细胞和相邻正常组织之间的部位，主要由细胞外基质、可溶性分子和肿瘤相关成纤维细胞(tumorassociatedfibroblasts,TAFs)、免疫细胞、内皮细胞、周细胞及骨髓来源细胞等基质细胞组成，可通过诱导肿瘤血管和淋巴管生成、调节免疫系统和重塑细胞外基质促进肿瘤转移。TAFs是TME中主要细胞成分，其可通过分泌多种生长因子、细胞因子、趋化因子和降解细胞外基质蛋白促进肿瘤的发生发展及转移。例如，Kojima等人发现，与口腔鳞癌细胞共培养的肿瘤相关成纤维细胞通过分泌大量CCL7，增强口腔鳞癌细胞的迁移和侵袭能力；Lederle等人在前列腺癌的研究中发现，TAFs通过分泌CXCL1促进自身的增殖及迁移能力，从而增加TAFs促进肿瘤细胞生长、血管生成及巨噬细胞浸润的能力。然而在结直肠癌中，特别是结直肠癌肝转移过程中，癌细胞与成纤维细胞之间的相互作用尚缺少系统研究，这种相互作用是否以及如何影响结直肠癌肝转移仍不清楚。微小RNA(microRNA,miRNA)是一种约22个碱基的非编码单链小RNA分子，通过部分或完全碱基配对识别靶基因来调节靶基因的表达，是细胞发育、凋亡和代谢等多种维持生命必需的生物学的功能调节因子，在炎症相关肿瘤发生和转移过程当中亦发挥重要作用。近期研究发现miRNA可通过靶向不同信号通路和代谢基质调控TAFs的活性，从而参与肿瘤细胞与TAFs之间的复杂网络信号，影响肿瘤进展。例如：在口腔癌TAFs中miR-335上调使COX-2和PGE分泌水平增加，并通过抑制癌细胞中PTEN基因表达抑制其迁移。在肺癌TAFs中miR-1下调促进SDF1分泌，SDF1通过CXCR4激活NF-κB和Bcl-xL信号通路促进肺癌细胞增殖和顺铂耐药。表明miRNA有望成为治疗靶点。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。本专利技术还有一个目的是提供miR-10a介导肿瘤相关成纤维细胞抑制结肠癌肝转移的应用。为了实现根据本专利技术的这些目的和其它优点，提供了miR-10a介导肿瘤相关成纤维细胞在如下1)-6)中至少一种功能的产品中的应用，1)抑制肿瘤细胞增殖；2)促进肿瘤细胞凋亡；3)抑制肿瘤细胞迁移；4)抑制肿瘤细胞侵袭；5)抑制肿瘤细胞成球；6)预防和/或治疗肿瘤；所述肿瘤为结肠癌；所述肿瘤细胞为结肠癌细胞；miR-10a的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。优选的是，所述结肠癌细胞为SW480。优选的是，所述产品为试剂盒或药物。本专利技术至少包括以下有益效果：过表达miR-10a抑制了TGF-LX-2细胞的增殖能力；过表达miR-10a抑制了TGF-LX-2细胞中IL-6和IL-8的分泌；过表达miR-10a的TGF-LX-2细胞的条件培养基抑制了SW480细胞的增殖能力；过表达miR-10a的TGF-LX-2细胞的条件培养基抑制了SW480细胞的迁移能力；过表达miR-10a抑制了TAFs的迁移能力；过表达miR-10a抑制了TAFs中IL-6、IL-8的表达；TAFs的条件培养基促进了SW480细胞的迁移能力；本专利技术从一个全新的角度认识和了解过表达的miR-10a在体外对肝成纤维细胞活性的影响，并深入探讨其活性改变对结肠癌细胞在肝脏形成转移灶的影响，以期为结肠癌肝转移的分子机制提供表观遗传学依据，为结肠癌的预防和治疗提供新的思路和靶点。本专利技术的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本专利技术的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。附图说明图1qRT-PCR检测TGF-β1处理LX-2细胞后α-SMA的相对表达水平；注：**：P<0.01，与未处理组相比(n＝3，±SD)；图2qRT-PCR检测TGF-LX-2细胞中转染miR-10amimic或NC后miR-10a的相对表达水平；注：**：P<0.01，与对照组相比(n＝3，±SD)；图3CCK-8实验检测过表达miR-10a对TGF-LX-2细胞增殖能力的影响；注：*：P<0.05，**：P<0.01，与对照组相比(n＝3，±SD)；图4ELISA实验检测过表达miR-10a对TGF-LX-2细胞中IL-6和IL-8分泌水平的影响；注：*：P<0.05，**：P<0.01，与对照组相比(n＝3，±SD)；图5CCK-8实验检测过表达miR-10a的TGF-LX-2细胞条件培养基对SW480细胞增殖能力的影响；注：*：P<0.05，**：P<0.01，与对照组相比(n＝3，±SD)；图6划痕实验检测过表达miR-10a的TGF-LX-2细胞条件培养基对SW480细胞迁移能力的影响；注：*：P<0.05，**：P<0.01，与对照组相比(n＝3，±SD)；图7第四代正常肝组织和结肠癌肝转移灶组织来源的原代细胞的形态学观察；注：组织块法建立人肝原代细胞，光学显微镜下观察(100×)；图8流式细胞术检测第四代NFs和TAFs中α-SMA和CK-18的表达；图9qRT-PCR检测第四代NFs和TAFs中miR-10a的相对表达水平，注：**：P<0.01，与NFs组相比(n＝3，±SD)；图10ELISA检测第四代NFs和TAFs中炎性因子IL-6和IL-8的分泌水平；注：*：P<0.05，**：P<0.01，与NFs组相比(n＝3，±SD)；图11qRT-PCR检测TAFs中转染miR-10amimic或NC后miR-10a的相对表达水平；注：**：P<0.01，与对照组相比(n＝3，±SD)；图12CCK-8实验检测过表达miR-10a对TAFs增殖能力的影响；注：*：本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.miR-10a介导肿瘤相关成纤维细胞在如下1)-6)中至少一种功能的产品中的应用，其特征在于，/n1)抑制肿瘤细胞增殖；/n2)促进肿瘤细胞凋亡；/n3)抑制肿瘤细胞迁移；/n4)抑制肿瘤细胞侵袭；/n5)抑制肿瘤细胞成球；/n6)预防和/或治疗肿瘤；/n所述肿瘤为结肠癌；/n所述肿瘤细胞为结肠癌细胞；/nmiR-10a的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。/n

【技术特征摘要】
1.miR-10a介导肿瘤相关成纤维细胞在如下1)-6)中至少一种功能的产品中的应用，其特征在于，
1)抑制肿瘤细胞增殖；
2)促进肿瘤细胞凋亡；
3)抑制肿瘤细胞迁移；
4)抑制肿瘤细胞侵袭；
5)抑制肿瘤细胞成球；
6)预防和/或治疗肿瘤；
所...

【专利技术属性】
技术研发人员：章广玲，郑璇，王梅梅，熊亚南，
申请(专利权)人：华北理工大学，
类型：发明
国别省市：河北;13