【技术实现步骤摘要】
一种基于二代测序探针捕获方法的癌症的基因检测试剂盒
本专利技术属于基因检测试剂盒领域，具体为一种基于二代测序探针捕获方法的癌症的基因检测试剂盒。
技术介绍
自1977年第一代测序技术（Sanger法）应运而生，测序技术已发展至第四代，但就目前的应用场景以及形势，二代测序技术仍为主流。二代测序技术的核心原理，简而言之就是边合成边测序，通过捕捉新合成末端的标记来确定DNA的序列；具有通量高、读长短、周期快等特点。现在二代测序仪的主要供应商为国外的Illumina和LifeTech，而国内华大智造的测序仪也在逐渐崛起。二代测序技术的完整过程分为实验端和生信端。实验端的目的在于将gDNA通过一些操作步骤构建成一个可以进行测序的文库，包括建库和上机两部分。简要步骤如下：双链DNA片段化处理；进行末端修复；在3’端加A；连接测序所需的接头；PCR富集产物（或捕获后PCR富集产物）、QC质控合格后即可上机测序；通过高通量的平行PCR（桥式PCR）和平行测序（边合成边测序）反应，结合微流体检测技术，对后期产出的大规模测序数据进行分析...
【技术保护点】
1.一种基于二代测序探针捕获方法的癌症的基因检测试剂盒，其特征在于：包括质控品、建库试剂、RNA探针；/n质控品：阴性质控品和阳性质控品；建库试剂：末端修复&加A 试剂、加接头试剂、扩增试剂、杂交试剂、捕获试剂、扩增试剂；/nRNA探针为探针panel，探针panel根据NCCN指南推荐的检测基因及相关数据库、文献资源，结合肺癌、结直肠癌、乳腺癌、卵巢癌这四大癌种的靶基因，最终并集为18个目的基因panel，根据所筛基因，明确基因的具体变异位置及所测突变类型；/nRNA探针的合成类型为RNA单链，长度区间在90-120 nt，并标记有生物素。/n
【技术特征摘要】
1.一种基于二代测序探针捕获方法的癌症的基因检测试剂盒，其特征在于：包括质控品、建库试剂、RNA探针；
质控品：阴性质控品和阳性质控品；建库试剂：末端修复&加A试剂、加接头试剂、扩增试剂、杂交试剂、捕获试剂、扩增试剂；
RNA探针为探针panel，探针panel根据NCCN指南推荐的检测基因及相关数据库、文献资源，结合肺癌、结直肠癌、乳腺癌、卵巢癌这四大癌种的靶基因，最终并集为18个目的基因panel，根据所筛基因，明确基因的具体变异位置及所测突变类型；
RNA探针的合成类型为RNA单链，长度区间在90-120nt，并标记有生物素。
2.根据权利要求1所述的一种基于二代测序探针捕获方法的癌症的基因检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒的实验操作流程如下：S1、DNA片段化操作；S2、末端修复&加A尾；S3、加接头；S4、第一步纯化步骤；S5、文库扩增；S6、第二步纯化步骤；S7、杂交反应；S8、捕获反应；S9、PCR富集反应；S10、纯化；S11、质控；S12、上机测序和数据分析。
3.根据权利要求1所述的一种基于直扩型的人MTHFR基因多态性检测试剂盒，其特征在于，DNA片段化操作包括S11、FFPE样本片段化操作；S12、物理打断程序；S13、cfDNA样本片段化操作；
末端修复&加A尾包括S21、末端修复&加A尾反应体系；S22、加A尾反应程序。
4.根据权利要求2所述的一种基于直扩型的人MTHFR基因多态性检测试剂盒，其特征在于，加接头包括S31、加接头反应体系；S32、加接头反应程序；
第一步纯化步骤包括S41、纯化磁珠提前在室温孵育30min；S42、取80μL纯化磁珠加入至加接头的溶液中，vortex30s，室温孵育10min；S43、配置新鲜的75%乙醇；S44、孵育后的混合液放置磁力架上，待上清澄清后，弃去；S45、加300μL75%乙醇，停留1min，弃去，重复两次；S46、离心，弃去残液，待磁珠干燥；S47、加水18μL洗脱磁珠上的DNA，室温孵育5min;放置磁力架上，回收。
5.根据权利要求2所述的一种基于直扩型的人MTHFR基因多态性检测试剂盒，其特征在于，文库扩增包括S51、文库扩增反应体系；S52、文库扩增反应程序；
第二步纯化步骤包括S61、纯化磁珠提前...
【专利技术属性】
技术研发人员：方小云，
申请(专利权)人：俊兮生物科技上海有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31
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