Fusarielin M及其衍生物、药学上可接受的盐的应用制造技术

本发明专利技术涉及药学领域，具体涉及Fusarielin M及其衍生物、药学上可接受的盐的应用，化合物Fusarielin M对结核分枝杆菌酪氨酸磷酸酶B具有很强的抑制活性，其IC

【技术实现步骤摘要】
FusarielinM及其衍生物、药学上可接受的盐的应用
本专利技术涉及药学领域，具体涉及FusarielinM及其衍生物、药学上可接受的盐的应用。技术背景结核病是由结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis，Mtb)引起的慢性传染病，是全世界最主要的致命传染病之一。根据世界卫生组织2019全球结核病控制报告，在2018年，共有1000万新发患者，约120万人死于结核病(TB)。我国是结核病与耐药结核病高负担国家，加上耐药菌的不断出现，抗结核药物的研发迫在眉睫！结核分枝杆菌酪氨酸磷酸酶B(Mycobacteriumtuberculosisproteintyrosinephosphatase，MptpB)，是结核分枝杆菌侵染宿主细胞所必须的分泌型毒力因子，具有酪氨酸磷酸酶活性。MptpB也是Mtb体外生长的非必需基因，MptpB的缺失不影响Mtb在培养基中的生长，但是严重抑制Mtb在IFN-y激活巨噬细胞中的增殖，并且削弱Mtb感染豚鼠的能力。MptpB与人PTP1B的同源性仅为6％，较低的同源相似性会提高以MptpB为靶点的抗结核药物特异性。因此，以MptpB为靶点进行抗结核药物的筛选，是研制新的强力低毒抗结核药物的重要策略。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术中问题，提供FusarielinM及其衍生物、药学上可接受的盐的应用。本专利技术的目的通过以下技术方案予以实现：FusarielinM及其衍生物或其药学上可接受的盐在作为酪氨酸磷酸酶抑制剂的应用。FusarielinM及其衍生物或其药学上可接受的盐在制备抑制酪氨酸磷酸酶的药物上的应用。优选地，所述酪氨酸磷酸酶为结核分枝杆菌酪氨酸磷酸酶B。FusarielinM及其衍生物或其药学上可接受的盐在制备抗结核病的药物中的应用。上述FusarielinM的分子结构式如式(I)所示：优选地，所述FusarielinM或其衍生物或其药学上可接受的盐的浓度为0.95～1.12μM。与现有技术相比，本专利技术具有以下技术效果：本专利技术提供了化合物FusarielinM或其衍生物或其药学上可接受的盐的应用，化合物FusarielinM对结核分枝杆菌酪氨酸磷酸酶B具有很强的抑制活性，其IC50为1.05±0.08μM。所述化合物FusarielinM能够有效地抑制结核分枝杆菌酪氨酸磷酸酶B的去磷酸化活性，并且细胞毒性很低，对巨噬细胞内分枝杆菌的增殖有明显抑制作用，具有结核病治疗的临床应用潜力。另外，化合物FusarielinM是从微生物分离的天然代谢活性小分子产物，其结构已被解析，可通过大规模发酵分离生产，来源丰富，生产成本低，成药可能性高。附图说明图1结核分枝杆菌酪氨酸磷酸酶B蛋白纯化后的SDS-PAGE电泳结果；其中M泳道为蛋白质分子量标准(Thermo26616)，1、2泳道为纯化后的MptpB(每孔上样量为1μg纯化蛋白)；图2化合物FusarielinM对结核分枝杆菌酪氨酸磷酸酶B酶活性抑制的IC50曲线；图3化合物FusarielinM对结核分枝杆菌酪氨酸磷酸酶B的抑制类型鉴定；图4化合物FusarielinM对细胞内MptpB介导的MAPK通路激活的westernblot检测结果；图5不同浓度化合物FusarielinM处理时细胞内结核杆菌数；图6化合物FusarielinM分子结构式图。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合具体实施例将对本专利技术的技术方案进行详细的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所得到的所有其它实施方式，都属于本专利技术所保护的范围。除特殊说明，本实施例中所用的设备均为常规实验设备，所用的材料、试剂无特殊说明均为市售得到，无特殊说明的实验方法也为常规实验方法。实施例1一、结核分枝杆菌酪氨酸磷酸酶B(MptpB)的表达与纯化将表达MptpB的大肠杆菌BL21(DE3)T程菌接种于含有卡那霉素(50μg/mL)的LB培养液，37℃震荡培养过夜获得培养物。将2mL上述培养物接种于100mL含卡那霉素的LB培养液中，37℃震荡培养至OD600＝0.6，加入终浓度为0.1mM的IPTG，于20℃，180rpm震荡培养过夜，诱导工程菌表达蛋白MptpB。将诱导过夜的表达结核分枝杆菌酪氨酸磷酸酶B的工程菌离心(5000×g，4℃，离心5min)，收集菌体，并将菌体重悬于20mL预冷的裂解缓冲液(25mMTris，20mM咪唑，500mMNaCl，pH7.8)，再次离心。重复上述步骤一次，以洗去培养基。后面的步骤都在冰上进行，所用缓冲液、离心机均需提前预冷至4℃。使用10mL裂解缓冲液重悬菌体，并加入终浓度为1％TritonX-100，5mMDTT，1×蛋白酶抑制剂，冰水浴超声15min破碎菌体，破碎后的菌液进行离心(11000rpm，20min，4℃)，收集上清液进行纯化。利用NiSepharose6FastFlow琼脂糖凝胶亲和层析纯化，将上清液加入此镍层析柱，使目标蛋白与填料充分结合，然后加入10mL的洗涤缓冲液(25mMTris，50mM咪唑，500mMNaCl，pH7.8)洗去非特异结合的杂蛋白。最后，用10mL洗脱缓冲液(25mMTris，350mM咪唑，500mMNaCl，pH7.8)将目的蛋白洗脱下来。将蛋白洗脱液转移至10kDa孔径的超滤管，5000×g，4℃离心15min进行浓缩，弃去外层收集管中液体。加入5-10mL的保存缓冲液(25mMTris，100mMNaCl，pH7.8)5000×g，4℃离心15min，如此反复几次，直到将洗脱蛋白中的咪唑置换出来。离心直到超滤浓缩的液体体积为2mL，并分装保存于4℃，按照BCA蛋白定量试剂盒(Pierce)测定纯化后MptpB蛋白的浓度。纯化蛋白经SDS-PAGE电泳分析，证明实验获得了大小正确、纯度在90％以上的MptpB酶(见图1)。结核分枝杆菌酪氨酸磷酸酶A(MptpA)、人酪氨酸磷酸酶1B的大肠杆菌表达和纯化步骤与MptpB相同。二、FusarielinM对结核分枝杆菌酪氨酸磷酸酶B(MptpB)的酶抑制活性分析采用对硝基苯磷酸二钠(pNPP)为底物，在反应缓冲液(50mMTris，100mMNaCl，pH7.0)中进行化合物抑制结核分枝杆菌酪氨酸磷酸酶B的抑制实验，所用的结核分枝杆菌酪氨酸磷酸酶B是上述纯化得到的重组结核分枝杆菌酪氨酸磷酸酶B蛋白。(1)半抑制浓度IC50值的测定反应总体积为200μL，3个平行孔，在96孔板中依次加入1.5μg的MptpB，梯度的化合物(终浓度：0μM，0.05μM，0.1μM，0.5μM，1μM，5μM，10μM)，化合物和MptpB在室温预混合5min。孵育结束后，加入终浓度为本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.Fusarielin M及其衍生物或其药学上可接受的盐在作为酪氨酸磷酸酶抑制剂的应用。/n

【技术特征摘要】
1.FusarielinM及其衍生物或其药学上可接受的盐在作为酪氨酸磷酸酶抑制剂的应用。


2.FusarielinM及其衍生物或其药学上可接受的盐在制备抑制酪氨酸磷酸酶的药物上的应用。


3.根据权利要求1或2所述应用，所述酪氨酸磷酸酶为结核分枝杆菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈冬妮，陆勇军，陈森华，刘岚，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东;44