一种大葱花培育种用诱导培养基及诱导培养方法技术

本发明专利技术提供了一种大葱花培育种用诱导培养基，其培养基配方包括KNO

【技术实现步骤摘要】
一种大葱花培育种用诱导培养基及诱导培养方法
本专利技术属于蔬菜培育高新
，具体涉及一种大葱花培育种用诱导培养基以及大葱花药诱导培养方法。
技术介绍
大葱（学名：Allium.fistulosumL.var.gigantumMakino）是百合科（Liliaceae）葱属（Allium）葱种下一变种，叶圆筒形而中空，叶鞘茎部包含成假茎，二、三年生草本植物，是我国广泛栽培的蔬菜。文献记述，葱的起源地为西伯利亚、中国西北和东北及中亚等。中国栽培大葱历史悠久，由于其适应性强，栽培地域广，形成了大量的地方品种。大葱是人们四季常食的调味品，又是营养丰富的蔬菜，所含的植物菌素，除能提高食欲，增强消化功能外，还具有杀菌消炎作用。经研究证明，大葱具有降血脂、血糖、血压及补脑的作用，大葱所含的硫化物可减少人体胆固醇在血管中的沉积，防止发生血栓，因此，葱的食用价值越来越被世界人民所重视。中医认为，葱性温味辛，具有散寒健胃、祛痰、杀菌、利肺通阳、发汗解表、通乳止血、定痛疗伤的功效。育种的最终目的是选育优质、抗病、丰产的新品种。品质是任何作物育种计划不可缺少的重要目标。对于蔬菜作物来讲，品质育种更是日益受到重视，改善蔬菜品质已成为蔬菜研究工作者重要的研究课题。大葱是典型的异花授粉作物，育成优良自交系至少需要6~10年的时间。从20世纪70年代开始，以细胞工程和基因工程为主体的现代生物技术应用于作物品种改良，为蔬菜作物开辟了一条品种改良新途径。生物技术与常规育种技术的有机结合，具有创造变异多、育种目的性强、育种时间缩短、后代选择稳定等优点，为培育高产、高抗、多抗、优质品种提供了新的技术手段。花培育种，即花药离体培养育种，现代育种的手段之一，是将花粉培育成单倍体植株，再经染色体自然或人工加倍得到纯合二倍体的一种育种方法。这种染色体加倍产生的纯合二倍体，在遗传上非常稳定，不发生性状分离，因此，花培育种能极早稳定分离后代、缩短育种年限。同时，花培加倍后的纯合二倍体植株，可排除杂合体中显性因子掩盖隐性因子造成的干扰，提高选择的准确性和可靠性。由于花粉植株是由单倍体直接加倍形成的，故隐性性状得以纯合表现，而且花粉植株不论来源于F1或F2，其当代株系均表现丰富的多样性，如株高、生育期、育性及抗性等。这些性状相互交叉，组成了具有多种形态特征的花培株系，因此，花培育种既可充分利用植物的种质资源，又可获得性状的多样性。这样既大大缩短了育种年限，又能丰富种质资源。花药培养育种，花培育种的这些显著优点，引起了世界各国育种工作者的浓厚兴趣。我国于20世纪70年代开始了花培育种，迄今已取得了巨大的成就。花培育种已与常规杂交育种、远缘杂交育种、诱变育种以及转基因技术相结合，发展形成了一套育种技术体系。花药离体培养是把发育到一定阶段的花药接种到人工培养基上，以改变花药内花粉粒的发育途径，形成花粉胚或花粉愈伤组织，随后由胚状体直接发育为植株或使愈伤组织分化成植株。影响花药培养效率的因素很多，包括供试植株的基因型（品种或类型）、预处理、花粉小孢子的发育时期、培养基、培养方法、培养条件等。国内外学者对影响蔬菜花药培养的一些因素进行了研究，取得了显著的进展，通过优化培养基和改进培养方法，使部分蔬菜材料花药诱导率有了提高，部分蔬菜种花培育种体系得以建立。但是大葱花药培养研究进展缓慢，利用这项技术进行大葱育种的研究鲜见报道，主要原因是花药愈伤组织诱导率低而不稳定，直接限制了大葱花药培养技术在育种上的应用。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术的目的是提供一种能显著提高大葱花药愈伤组织诱导效率、提高大葱花药培养效率的大葱花培育种用诱导培养基及诱导培养方法。为了实现上述目的，本专利技术采用了以下技术方案：一种大葱花培育种用诱导培养基，其特征在于，所述培养基的配方如下（以1L计）：KNO31500-1700mg，CaCl2·2H2O310-340mg，（NH4）2SO4127-153mg，NaH2PO4·H2O100-130mg，MgSO4·7H2O160-190mg，MnSO4·4H2O4.0-7.0mg，ZnSO4·7H2O1.5-2.5mg，H3BO35.0-7.0mg，KI1.0-2.0mg，Na2MoO4·2H2O0.2-0.3mg，CuSO4·5H2O0.02-0.03mg，CoCl2·6H2O0.02-0.03mg，Fe-EDDHA26.4-30.2mg，玉米须提取液30-50ml，水解酪蛋白120-150mg，肌醇90-120mg，丙酮酸钠15.5-21.3mg，延胡索酸20-25mg，天冬氨酸2.0-4.0mg，甘氨酸1.0-3.0mg，腐殖酸钠8-12mg，核黄素0.2-0.4mg，维生素B10.3-0.5mg，维生素B60.5-0.7mg，D-生物素0.8-1.0mg，胆碱2.6-3.0mg，水杨酸0.08-0.12mg，丁酸钠8-12mmol，多效唑0.4-0.6mg，KT0.4-0.6mg，6-BA0.9-1.1mg，对羟基苯甲酸0.8-1.2g，蔗糖25-35g，麦芽糖25-35g，植物凝胶6-8g。所述培养基的pH值为5.8。所述玉米须提取液由以下方法制备：将玉米须在NaOH溶液中浸泡15min，洗涤至中性，然后按照1:10的比例加清水，加热至沸腾，保温30min，静置24h后用功率为300W、频率为40kHz的超声波处理10min，双层纱布过滤后取滤液。包括以下步骤：1）取材与预处理：于晴朗天气的上午采集大葱花蕾，用冰盒带至实验室，镜检选出花粉发育时期为单核靠边期的花蕾，用水湿润后放入垫有试纸的培养皿内，置于4℃低温预处理2~3d；2）灭菌：将花蕾洗净后放入三角瓶中，加入0.1%升汞，加入吐温2滴，放至摇床上震荡10~12min，三角瓶用体积分数75%的乙醇擦拭消毒后放入超净工作台中，倒出消毒液，再用无菌水冲洗3~4次，直到瓶内没有泡沫为止；3）接种与培养：用镊子从灭菌后的花蕾中剥出花药，切除花丝后接种到诱导培养基上，先置于均匀磁场中处理30min，再放入25℃恒温培养箱中暗培养直至愈伤组织形成。所述步骤1）中采集的大葱花蕾为未开放或刚开放。所述步骤1）中镜检的方法为：从花蕾中剥出花药，置于载玻片上，加一小滴卡宝品红染色液，用镊子捣碎花药，挤出其中的小孢子后，去除残渣，然后盖上载玻片置于显微镜下观察小孢子发育时期。所述步骤3）中磁场强度为400mT。本专利技术与现有技术相比所具有的积极效果在于：1）本专利技术提供的诱导培养基是针对大葱花粉发育特性而研制的，首先从培养基中的大量元素、微量元素、有机物及其含量比例进行研究调整；其次发掘和试验了一些附加成分如玉米须提取液、水解酪蛋白、丙酮酸钠、延胡索酸、腐殖酸钠、水杨酸、丁酸钠、对羟基苯甲酸等，在适宜的浓度下能够提高愈伤组织诱导率；第三确定了多效唑、KT和6-BA的激素组合，比前人研究的2,4-D、6-BA的激素组合具有更好的诱导效果。2）本专利技术将大葱花药置于400mT的均匀磁场中处理后再本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种大葱花培育种用诱导培养基，其特征在于，所述培养基的配方如下（以1L计）：/nKNO

【技术特征摘要】
1.一种大葱花培育种用诱导培养基，其特征在于，所述培养基的配方如下（以1L计）：
KNO31500-1700mg，CaCl2·2H2O310-340mg，（NH4）2SO4127-153mg，NaH2PO4·H2O100-130mg，MgSO4·7H2O160-190mg，MnSO4·4H2O4.0-7.0mg，ZnSO4·7H2O1.5-2.5mg，H3BO35.0-7.0mg，KI1.0-2.0mg，Na2MoO4·2H2O0.2-0.3mg，CuSO4·5H2O0.02-0.03mg，CoCl2·6H2O0.02-0.03mg，Fe-EDDHA26.4-30.2mg，玉米须提取液30-50ml，水解酪蛋白120-150mg，肌醇90-120mg，丙酮酸钠15.5-21.3mg，延胡索酸20-25mg，天冬氨酸2.0-4.0mg，甘氨酸1.0-3.0mg，腐殖酸钠8-12mg，核黄素0.2-0.4mg，维生素B10.3-0.5mg，维生素B60.5-0.7mg，D-生物素0.8-1.0mg，胆碱2.6-3.0mg，水杨酸0.08-0.12mg，丁酸钠8-12mmol，多效唑0.4-0.6mg，KT0.4-0.6mg，6-BA0.9-1.1mg，对羟基苯甲酸0.8-1.2g，蔗糖25-35g，麦芽糖25-35g，植物凝胶6-8g。


2.根据权利要求1所述的一种大葱花培育种用诱导培养基，其特征在于，所述培养基的pH值为5.8。


3.根据权利要求1所述的一种大葱花培育种用诱导培养基，其特征在于，所述玉米须提取...

【专利技术属性】
技术研发人员：富阿丽，
申请(专利权)人：富阿丽，
类型：发明
国别省市：河北;13