一种抑制hsa_circ_0027479表达的siRNA及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抑制人hsa_circ_0027479环状RNA表达的核苷酸及其应用，其特征是：所述的核苷酸特异性结合于人hsa_circ_0027479环状RNA，所述核苷酸的序列由AAAUUCUUGGGACCCUGAUGCUC序列或者互补序列中的18‑22个连续核苷酸序列组成，特别是其包含序列：AAAUUCUUGGGACCCUGAU和UCUUGGGACCCUGAUGCUC。本发明专利技术抑制人hsa_circ_0027479环状RNA，能够有效抑制A549和XWLC‑05细胞中hsa_circ_0027479环状RNA表达，与抗肿瘤药物联合可以增加其抑制其生长和增殖，从而有效治疗多种肿瘤。

【技术实现步骤摘要】
一种抑制hsa_circ_0027479表达的siRNA及其应用
本专利技术属于医学材料技术和药物领域，具体地本专利技术涉及一种环状RNAs核苷酸，尤其是涉及人环状RNAs核苷酸。该核苷酸可与hsa_circ_0027479互补，从而抑制人hsa_circ_0027479的表达，与其他抗肿瘤药物其起到抗肿瘤的作用。
技术介绍
CircRNA是由外显子或内含子反向剪接形成的闭合环结构的非编码RNA。CircRNA主要存在于细胞质中，根据其基因组的来源及构成序列的不同，可分为外显子来源的环状RNA、内含子来源的环状RNA、由内含子及外显子共同形成的环状RNA。CircRNA不仅可调控基因表达，也可作为原癌基因和抑癌基因在肿瘤发生发展过程中发挥特殊作用。CircRNA在肿瘤组织及癌旁正常组织中的表达差异显著，可作为微小RNAs海绵、调节亲本基因的表达、与RNA结合蛋白相互作用等在肿瘤细胞周期、细胞凋亡、血管形成、侵袭等方面发挥作用。CircRNA最经典的作用是海绵样作用，通过竞争性结合数个miRNA，从而抑制了该miRNA对靶基因的负性调节作用，形成CircRNA-miRNA-mRNA调控网络来调节肿瘤的发生发展。此外CircRNA不仅可通过结合和调控致癌蛋白促进肿瘤进展，而且其生成过程中与线性剪接竞争，影响其线性基因表达，为肿瘤发生创造有利条件。circRNAs是肿瘤防御系统的重要组成部分，其异常表达可能是肿瘤启动的早期关键性事件。其可作为肿瘤的分子标志物或潜在治疗靶点，为肿瘤的早期诊断、疗效评价、预后预测和肿瘤基因治疗提供一个新的靶点。。RNA干扰(RNAinterference，RNAi)技术利用双链小RNA高效、特异性降解细胞内同源RNA从而沉默靶基因，从而实现干扰靶基因的功能。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种能够特异高效地抑制hsa_circ_0027479表达的siRNA及其应用。本专利技术的目的是这样实现的，包括合成核苷酸的序列由AAAUUCUUGGGACCCUGAUGCUC(SEQIDNO.1)序列中的18-22个连续核苷酸序列组成或者互补序列中的18-22个连续核苷酸序列组成。特别是其包含序列：AAAUUCUUGGGACCCUGAU(SEQIDNO.2)和UCUUGGGACCCUGAUGCUC(SEQIDNO.3)或者互补序列。核苷酸为核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸或者核糖核苷酸与脱氧核糖核苷酸的嵌合体。核苷酸进一步被核糖修饰、碱基修饰、磷酸骨架修饰、氟代修饰、硫代修饰、甲氧基修饰、胆固醇修饰的一种或几种。核苷酸和其他抗肿瘤治疗药物特别是三价无机砷。制备治疗癌症药物中的应用。癌症包括：肝癌、贲门癌、结胃癌、、鼻咽癌、卵巢癌、前列腺癌症、慢性或急性白血病、脑瘤、食道癌、口腔癌、尿道癌、皮肤癌、直肠癌、中耳癌、骨癌、肠癌、胆囊癌、喉癌、牙龈癌、肺癌、胰腺癌、乳腺癌、宫颈癌、、大肠癌、睾丸癌、内分泌系统的癌症、淋巴细胞性淋巴瘤。本研究受国家自然科学基金的支持（81860572）。本专利技术（优点）：专利技术的核苷酸具有很好的hsa_circ_0027479抑制效果，作用于特异性的靶位点，特异性强、毒性低、副作用小和修饰半衰期长，可以与多种抗肿瘤药物合用。具体实施方式下面对本专利技术作进一步的说明，但不以任何方式对本专利技术加以限制，基于本专利技术教导所作的任何变换或替换，均属于本专利技术的保护范围。具体实施方式。实施例本实施例中的沉默RNA序列为：AAAUUCUUGGGACCCUGAU(SEQIDNO.2)和UCUUGGGACCCUGAUGCUC(SEQIDNO.3)以及互补序列,所有的序列都是从5端到3端,所有序列都在末端加上dTdT。hsa_circ_0027479的RNA序列信息存在于UCSC数据库中。本课题受本研究受国家自然科学基金的支持（81860572）。对照合成首先，由上海吉玛制药技术有限公司合成核苷酸，合成包含其互补序列的双链RNA序列，对照组使用吉玛制药技术有限公司的阴性对照siRNA货号为A06001序列为对照组的阴性对照。细胞培养：将A549或者XWLC-05细胞在含有10％胎牛血清的1640培养基于37℃，5％CO2条件下培养。以2500个每孔铺于96孔板内。RNA转染采用百代公司Rfect转染试剂进行转染，通过荧光定量PCR来经常RNA干扰的效率。以下分别为对照组、沉默组1、沉默组的沉默效率，A549细胞分别为：1.001±0.041，0.199±0.021，0.243±0.038；XWLC-05细胞分别为0.998±0.071,0.181±0.014,0.254±0.020,数据使用2^-ΔΔCt表示。荧光定量使用的引物：hsa_circ_0027479上游：ATGAGAAAATTCTTGGGACCCTG(SEQIDNO.4)下游：GCTCTCCATGCTTGACCACA(SEQIDNO.5)，内参采用“陈江容,张若冰,张媛,胡娟,周梅,何越峰.砷及其代谢产物对P21基因表达的影响[J].职业与健康,2018,34(23):3213-3216.”文章中的ACTB基因。两个细胞使用96孔板转染转染后48小时加入砷，亚砷酸钠溶于培养基中，不加砷的加入等量培养基，亚砷酸钠的终浓度为A549为60微摩尔每升，XWLC-05细胞砷的终浓度为40微摩尔每升，再培养48小时后MTS检测细胞活力。用Promega公司MTS检测，采用490nm吸光度，计算细胞活力。未加砷对照组：为使用阴性对照片段后不加入亚砷酸钠，本组的活力定为100.0%。未加砷实验组1：核苷酸片段1沉默的结果。未加砷实验组2：沉默核苷酸片段2沉默的结果。加砷对照组：为使用阴性对照片段后加入亚砷酸钠的结果。加砷实验组1：沉默核苷酸片段1沉默后加入亚砷酸钠的结果。加砷实验组2：沉默核苷酸片段2沉默后加入亚砷酸钠的结果。以下为各组的细胞活力均为百分比（%）：未加砷对照组：A549为101.4±2.9，XWLC-05为99.9±4.1，未加砷实验组1：A549为93.9±5.0，XWLC-05为94.7±4.0，未加砷实验组2:A549为94.1±4.2，XWLC-05为93.9±2.9，加砷对照组：A549为87.1±4.2，XWLC-05为86.4±3.3，加砷实验组1：A549为64.3±2.8，XWLC-05为57.4±3.1，加砷实验组2：A549为65.1±2.9，XWLC-05为58.1±3.7。序列表<110>昆明医科大学<120>一种抑制hsa_circ_0027479表达的siRNA及其应用<141>2019-12-24<160>5<170>SIPOSequenceListing1.0<210>1<211>23&本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抑制hsa_circ_0027479环状RNA表达的核苷酸，其特征在于：所述核苷酸的序列由AAAUUCUUGGGACCCUGAUGCUC序列或者互补序列中的18-22个连续核苷酸序列组成。/n

【技术特征摘要】
1.一种抑制hsa_circ_0027479环状RNA表达的核苷酸，其特征在于：所述核苷酸的序列由AAAUUCUUGGGACCCUGAUGCUC序列或者互补序列中的18-22个连续核苷酸序列组成。


2.根据权利要求1所述的核苷酸，其特征在于其序列为AAAUUCUUGGGACCCUGAU或者UCUUGGGACCCUGAUGCUC及其互补序列。


3.根据权利要求1所述的核苷酸，其特征在于：所述核苷酸为核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸或者核糖核苷酸与脱氧核糖核苷酸的嵌合体。


4.根据权利要求1所述的核苷酸，其特征在于所述核苷酸进一步被核糖修饰、碱基修饰、磷酸骨架修饰...

【专利技术属性】
技术研发人员：何越峰，王萌婕，谭婧文，孙明军，平妮娜，蒋成兰，李舒婷，
申请(专利权)人：昆明医科大学，
类型：发明
国别省市：云南;53