一种猪繁殖与呼吸综合征抗体的检测方法技术

本发明专利技术涉及动物病毒抗体检测方法技术领域，用于提高检测结果的准确性，尤其涉及一种猪繁殖与呼吸综合征抗体的检测方法，具体包括以下步骤：样品采用分布稀释的方法进行100倍稀释后加入在酶联反应板的孔内，同时加入阳性和阴性对照样品，贴上封板膜，孵育30分钟；弃去各孔中的液体，使用洗涤液对各孔进行清洗，然后向各孔中加入酶结合物，孵育30分钟；清楚干净各孔中的液体，然后再向各孔加洗涤进行清洗，然后向各孔加入显色底物，孵育15分钟；向各孔中加入终止液，轻振混匀，然后在酶标仪450mn波长处测定各孔OD值；该检测方法操作简单、花费的时间较短、普通工人经过短期培训即可进行操作，而且检测结果准确，检测的效率也较高，适于大范围推广使用。

【技术实现步骤摘要】
一种猪繁殖与呼吸综合征抗体的检测方法
本专利技术涉及动物病毒抗体检测方法
，用于提高检测结果的准确性，尤其涉及一种猪繁殖与呼吸综合征抗体的检测方法。
技术介绍
猪繁殖与呼吸综合征(Porcinereproductiveandsyndrome，PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus，PRRSV)引起的一种以感染猪发热、厌食，妊娠母猪晚期流产、早产、产死胎、弱胎和木乃伊胎，各种年龄猪(特别是仔猪)呼吸障碍为特征的高度传染性疾病，该病于1987年最早发现于美国，1991年荷兰人Wensvoot等首次从发病仔猪和母猪体内分离到了该病毒，当时称为Lelystad病毒，随后德国、美国、英国等国家和地区也分离到了该病毒，目前，该病已遍及北美洲及欧洲，在全球范围内传播，郭宝清等首次从国内疑似PRRS感染猪群中分离出PRRSV，从而证实了本病在我国的存在，随后，在2006年我国爆发高致病性PRRS，所有年龄段的猪均易感染，表现为高烧(41)，患病率高达(50-100％)和高死亡率高达(20-100％)，该病传播速度快，导致大量猪被扑杀，给养猪业造成巨大的经济损失，因此，我们迫切需要一种高敏感性、特异性，并且可实现现场快速筛查的检测技术，用于防控疫情发生和疫苗接种后的免疫评价。现有的检测方法通常包括病毒分离鉴定、PCR等常规技术，但是病毒分离存在敏感性差、耗时长等不足；PCR诊断因其操作相对繁琐、对实验场地和实验人员要求均较高，不适于进行推广使用。
技术实现思路
有鉴于此，为了解决现有的检测方法存在耗时长、操作繁琐、对实验场地和实验人员要求较高的问题，本申请提出了一种猪繁殖与呼吸综合征抗体的检测方法，该检测方法操作简单、花费的时间较短、普通工人经过短期培训即可进行操作，而且检测结果准确，检测的效率也较高，适于大范围推广使用。本专利技术提供的技术方案是一种猪繁殖与呼吸综合征抗体的检测方法，具体包括以下步骤：(1)样品采用分布稀释的方法进行100倍稀释后得到稀释样品；(2)在酶联反应板的孔内加入稀释后的样品、阳性和阴性对照样品，然后贴上封板膜，在室温条件下孵育30分钟；(3)揭掉封板膜，弃去各孔中的液体，然后使用洗涤液对各孔进行清洗，并清除干净各孔中的洗涤液，然后向各孔中加入酶结合物，在室温条件下孵育30分钟；(4)清楚干净各孔中的液体，然后再向各孔加洗涤进行清洗，并清除干净各孔中的洗涤，然后向各孔加入显色底物，在室温条件下孵育15分钟；(5)向各孔中加入终止液，轻振混匀，然后在酶标仪450mn波长处测定各孔OD值。通过本申请的技术方案检测得到各孔的OD值后，通过以下公式计算S/P值，通过计算得到的S/P值与阳性对照组和阴性对照组的OD值进行对比，如果样品的S/P值大于或等于阳性对照组的OD值，则该样品为阳性，如果样品的S/P值小于阳性对照组的OD值，则该样品为阴性。进一步的，步骤(1)中的分布稀释方法为：先依次加入体积比为9∶1的样品稀释液和样品血清，混合均匀；再取体积比为9∶1的样品稀释液和经过第一步稀释的血清，振荡混匀即可。进一步的，步骤(2)中每孔加入的样品与步骤(3)中每孔加入的酶结合物的体积比为1∶1。进一步的，步骤(2)中每孔加入的样品与步骤(5)中每孔加入的终止液的体积比为2∶1。进一步的，所述酶结合物是含体积分数为0.04％的辣根过氧化物酶标记的抗猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白的抗体的磷酸盐缓冲液。进一步的，所述磷酸盐缓冲液的PH值为5.5。进一步的，所述酶联反应板包被了抗猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白的抗体。进一步的，所述洗涤液为三羟甲基氨基甲烷缓冲液或磷酸盐缓冲液。基于上述阐述，本申请技术方案与现有技术相比，其有益效果在于：本技术方案操作简单、花费的时间较短、普通工人经过短期培训即可进行操作，而且检测结果准确，检测的效率也较高，适于大范围推广使用；还能起到推动猪繁殖与呼吸综合征病毒防控工作的效果。具体实施方式实旋例1一种猪繁殖与呼吸综合征抗体的检测方法，具体包括以下步骤：(1)样品按100倍稀释，分步稀释：即先加入90uL样品稀释液再加入10uL的样品血清，混合均匀；再取90ul样品稀释液，加入10uL经过第二步稀释的血清，震荡混匀即可；(2)每孔加人100uL稀释后的样品、阳性和阴性对照，贴上封板膜，室温孵育30分钟；(3)揭掉封板膜，弃去各孔中液体，拍净每孔加洗液200ul，洗3次，最后在吸水纸上拍净，每孔加入酶结合物100ul，室温孵孵育30分钟；(4)弃去各孔中液体，拍除净，每孔加洗液200ul，洗3次，后在吸水纸上拍除净，每孔加入显色底物100ul，室温孵育15分钟；(5)每孔加入终止液50ul，轻振混匀，酶标仪450mn波长处测定各孔OD值。经过检测对照组，确定试验成立依据为：阴性对照OD值≤0.3阳性对照OD值≥0.4；计算公式为：S/P值＝(S/P＝样品OD450nm-阴性对照OD450nm平均值)/(阳性对照OD450平均值-阴性对照OD450nm平均值)；判断依据为：S/P值≥0.40为阳性；S/P值＜0.40为阴性；随机选取2组阴性对照样品和阳性对照样品，以及6组试验样品，采用本申请提供的检测方法进行检测，检测结果如下表所示；根据上表的检测结果可知，使用本申请的检测方法检测得到的数据更加的准确，而且本申请中的检测方法操作简单，检测效率高，适于大范围推广使用。以上仅是本专利技术的优选实施方式，应当指出的是，上述优选实施方式不应视为对本专利技术的限制，本专利技术的保护范围应当以权利要求所限定的范围为准。对于本
的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术的精神和范围内，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本专利技术的保护范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种猪繁殖与呼吸综合征抗体的检测方法，其特征在于，具体包括以下步骤：/n(1)样品采用分布稀释的方法进行100倍稀释后得到稀释样品；/n(2)在酶联反应板的孔内加入稀释后的样品、阳性和阴性对照样品，然后贴上封板膜，在室温条件下孵育30分钟；/n(3)揭掉封板膜，弃去各孔中的液体，然后使用洗涤液对各孔进行清洗，并清除干净各孔中的洗涤液，然后向各孔中加入酶结合物，在室温条件下孵育30分钟；/n(4)清楚干净各孔中的液体，然后再向各孔加洗涤进行清洗，并清除干净各孔中的洗涤，然后向各孔加入显色底物，在室温条件下孵育15分钟；/n(5)向各孔中加入终止液，轻振混匀，然后在酶标仪450mn波长处测定各孔OD值。/n

【技术特征摘要】
1.一种猪繁殖与呼吸综合征抗体的检测方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
(1)样品采用分布稀释的方法进行100倍稀释后得到稀释样品；
(2)在酶联反应板的孔内加入稀释后的样品、阳性和阴性对照样品，然后贴上封板膜，在室温条件下孵育30分钟；
(3)揭掉封板膜，弃去各孔中的液体，然后使用洗涤液对各孔进行清洗，并清除干净各孔中的洗涤液，然后向各孔中加入酶结合物，在室温条件下孵育30分钟；
(4)清楚干净各孔中的液体，然后再向各孔加洗涤进行清洗，并清除干净各孔中的洗涤，然后向各孔加入显色底物，在室温条件下孵育15分钟；
(5)向各孔中加入终止液，轻振混匀，然后在酶标仪450mn波长处测定各孔OD值。


2.根据权利要求1所述的一种猪繁殖与呼吸综合征抗体的检测方法，其特征在于，步骤(1)中的分布稀释方法为：先依次加入体积比为9∶1的样品稀释液和样品血清，混合均匀；再取体积比为9∶1的样品稀释液和经过第一步稀释的血清，振荡混匀即可。


3.根据权利要求1所述的一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：韦学雷，李炳晓，党国立，袁世轩，
申请(专利权)人：河南威尔皮戈生物技术开发有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41