一种动物专用Diff-Quik染液及制备方法技术

本发明专利技术公开了一种动物专用Diff‑Quik染液及制备方法。一种Diff‑Quik染液，包括第一试剂、第二试剂和第三试剂，其中，第一试剂含有以下成分：固绿、甲醇；第二试剂含有以下成分：伊红Y、磷酸二氢钾、十二水合磷酸氢二钠、超纯水；第三试剂含有以下成分：亚甲基蓝、天青II、天青I、伊红Y、磷酸二氢钾、十二水合磷酸氢二钠、高锰酸钾、超纯水。本发明专利技术的一种Diff‑Quik染液适用于动物血液细胞涂片，染色颜色非常清晰、且染色背景无沉渣、色泽明亮，不同细胞染色后区分度高，且适用范围更广泛；本发明专利技术的一种Diff‑Quik染液相比于现有的Diff‑Quik染液，在染色时间上更具有优势，一般30s~60s内即可完成染色。且本发明专利技术的Diff‑Quik染液制备时间极短，显著提升生产效益。

【技术实现步骤摘要】
一种动物专用Diff-Quik染液及制备方法
本专利技术涉及医学生物检测
，尤其是，本专利技术涉及一种动物专用Diff-Quik染液及制备方法。
技术介绍
Diff-Quik染色是在瑞氏染色（WrightStain）基础上改良的一种快速染色方法，是细胞学检查中常用的染色方法之一。该染色液采用世界卫生组织（WHO）推荐的快速染色方法而配制，与WrightStain类似都是利用WrightStain技术原理改良而来，染色结果与瑞氏染色液也极其相似，但Diff-Quik染色所需的时间极短，一般在90s内即可完成染色。Diff-Quik染色主要用于血细胞涂片、骨髓涂片、阴道分泌物涂片、脱落细胞涂片等。目前市售的Diff-Quik染液主要是用于人体细胞的检测，虽然也能用于动物血液涂片，但是将其应用于动物血液细胞涂片后，会出现染色颜色不够清晰、染色背景可见少量沉渣、不同细胞区分度不高的缺点。
技术实现思路
为了克服上述现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种适用于动物细胞涂片的动物专用Diff-Quik染液及制备方法。为解决上述问题，本专利技术采用如下技术方案：一种Diff-Quik染液，包括第一试剂、第二试剂和第三试剂：所述第一试剂含有以下成分：固绿、甲醇；所述第二试剂含有以下成分：伊红Y、磷酸二氢钾、十二水合磷酸氢二钠、超纯水；所述第三试剂含有以下成分：亚甲基蓝、天青II、天青I、伊红Y、磷酸二氢钾、十二水合磷酸氢二钠、高锰酸钾、超纯水。<br>优选地，所述第一试剂含有以下重量份成分：固绿1~2份、甲醇1000份；所述第二试剂含有以下重量份成分：伊红Y1~2份、磷酸二氢钾1~3份、十二水合磷酸氢二钠2~3份、超纯水1000份；所述第三试剂含有以下重量份成分：亚甲基蓝1~2份、天青II1~2份、天青I1~2份、伊红Y0.03~0.04份、磷酸二氢钾1~2份、十二水合磷酸氢二钠2~3份、高锰酸钾2~3份、超纯水1000份。优选地，所述第二试剂还含有第一防腐剂0.05~0.15份。优选地，所述第三试剂还含有第二防腐剂0.05~0.15份。优选地，所述第一防腐剂、所述第二防腐剂为硫柳汞钠。本专利技术还提供一种动物专用Diff-Quik染液的制备方法，包括以下步骤：配制含固绿的甲醇溶液；配制含伊红Y、磷酸二氢钾、十二水合磷酸氢二钠的第一水溶液；配制含磷酸二氢钾、十二水合磷酸氢二钠的第二水溶液，在20~30℃下向所述第二水溶液中加入天青II、天青I、伊红Y、亚甲基蓝，溶解完全后调节混合溶液pH至3.0~3.3，将所述混合溶液升温至85℃以上后加入高锰酸钾，之后按以下过程进行反应：在90~95℃下等温反应50min以上；按1℃/min升温至98~100℃，保温5~10min；按1℃/min降温至60~70℃，保温5~10min后再次升温至98~100℃，保温2h后自然冷却至室温并放置12~24h。与现有技术相比，本专利技术的技术效果体现在：（1）本专利技术的一种Diff-Quik染液适用于动物细胞涂片，染色颜色非常清晰、且染色背景无沉渣、色泽明亮，不同细胞染色后区分度高；（2）本专利技术的一种Diff-Quik染液不仅能对动物的血细胞涂片、骨髓涂片、阴道分泌物涂片、脱落细胞涂片，还能对动物的皮肤细胞、耳道细胞等进行涂片，适用范围更广泛；（3）本专利技术的一种Diff-Quik染液相比于现有的Diff-Quik染液，在染色时间上更具有优势，一般30s~60s内即可完成染色；（4）常规的Diff-Quik染液从制备到上市大概需要一个月的时间，本专利技术的一种Diff-Quik染液的第三试剂采用高锰酸钾作为氧化剂，配合制备工艺参数的调整控制，可使Diff-Quik染液从制备到上市大概只需3天的时间，显著缩短生产时间，提升效益。附图说明图1为本专利技术实施例3制备的Diff-Quik染液对动物猫的血细胞染色后的镜检结果观察图；图2为本专利技术对比例1的染液对动物猫的血细胞染色后的镜检结果观察图。图1中，a中圆圈圈出的为染色后的粒细胞；b中圆圈圈出的为染色后的单核细胞；c中圆圈圈出的为染色后的淋巴细胞；d中矩形框圈出的为染色后的粒细胞、单核细胞和淋巴细胞；图2中圆圈圈出的为染色后观察到的细胞。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图和实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。本专利技术实施例提供一种Diff-Quik染液，包括第一试剂、第二试剂和第三试剂，其中，第一试剂含有以下成分：固绿、甲醇；第二试剂含有以下成分：伊红Y、磷酸二氢钾、十二水合磷酸氢二钠、超纯水；第三试剂含有以下成分：亚甲基蓝、天青II、天青I、伊红Y、磷酸二氢钾、十二水合磷酸氢二钠、高锰酸钾、超纯水。本专利技术实施例的一种Diff-Quik染液在对动物血液细胞进行血液涂片后，先将血液涂片浸入第一试剂中进行固定；之后，再将血液涂片依次浸入第二试剂、第三试剂中，利用第二试剂、第三试剂中的酸性染料结合血细胞中富含碱性化合物的结构如嗜酸性颗粒，使细胞被染成红色；利用第三试剂中的碱性染料结合血细胞中的核酸或嗜碱性颗粒等酸性化合物，使细胞被染成蓝紫色。因动物皮肤细胞、耳道细胞的特殊性，其不同于人体的皮肤细胞和耳道细胞，例如动物的皮肤上存在大量毛发、耳道内通常会有大量寄生虫，因此，在对取样后的动物皮肤细胞或耳道细胞进行染色时，使用常规市售的Diff-Quik染液染色后会发现染色背景不清晰、不同细胞染色后区分度不高的缺点。本专利技术的一种Diff-Quik染液适用于动物血液细胞涂片，染色颜色非常清晰、且染色背景无沉渣、色泽明亮，不同细胞染色后区分度高；本专利技术的一种Diff-Quik染液不仅能对动物的血细胞涂片、骨髓涂片、阴道分泌物涂片、脱落细胞涂片，还能对动物的皮肤细胞、耳道细胞等进行涂片，适用范围更广泛。本专利技术的一种Diff-Quik染液相比于现有的Diff-Quik染液，在染色时间上更具有优势，一般30s~60s内即可完成染色。优选地，第一试剂含有以下重量份成分：固绿1~2份、甲醇1000份；通常配制以第一试剂中每1000mL甲醇中含有固绿1~2mg为宜。第一试剂在进行血液涂片时起到对血液细胞进行固定的作用，防止血液细胞在后续染色过程中发生变形，便于镜检观察。优选地，第二试剂含有以下重量份成分：伊红Y1~2份、磷酸二氢钾1~3份、十二水合磷酸氢二钠2~3份、超纯水1000份。染色时，第二试剂中的酸性染料会结合血细胞中富含碱性化合物的结构如嗜酸性颗粒，使细胞被染成红色。优选地，第三试剂含有以下重量份成分：亚甲基蓝1~2份、天青II1~2份、天青I1~2份、伊红Y0.03~0.04份、磷酸二氢钾1~2份、十二水合磷酸氢二钠2~3份、高锰酸钾2~3份、超纯水1000本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种动物专用Diff-Quik染液，其特征在于，包括第一试剂、第二试剂和第三试剂：/n所述第一试剂含有以下成分：固绿、甲醇；/n所述第二试剂含有以下成分：伊红Y、磷酸二氢钾、十二水合磷酸氢二钠、超纯水；/n所述第三试剂含有以下成分：亚甲基蓝、天青II、天青I、伊红Y、磷酸二氢钾、十二水合磷酸氢二钠、高锰酸钾、超纯水。/n

【技术特征摘要】
1.一种动物专用Diff-Quik染液，其特征在于，包括第一试剂、第二试剂和第三试剂：
所述第一试剂含有以下成分：固绿、甲醇；
所述第二试剂含有以下成分：伊红Y、磷酸二氢钾、十二水合磷酸氢二钠、超纯水；
所述第三试剂含有以下成分：亚甲基蓝、天青II、天青I、伊红Y、磷酸二氢钾、十二水合磷酸氢二钠、高锰酸钾、超纯水。


2.如权利要求1所述的一种动物专用Diff-Quik染液，其特征在于，
所述第一试剂含有以下重量份成分：固绿1~2份、甲醇1000份；
所述第二试剂含有以下重量份成分：伊红Y1~2份、磷酸二氢钾1~3份、十二水合磷酸氢二钠2~3份、超纯水1000份；
所述第三试剂含有以下重量份成分：亚甲基蓝1~2份、天青II1~2份、天青I1~2份、伊红Y0.03~0.04份、磷酸二氢钾1~2份、十二水合磷酸氢二钠2~3份、高锰酸钾2~3份、超纯水1000份。


3.如权利要求2所述的一种动物专用Diff-Quik染液，其特征在于，所述第二试剂还含有第一防腐剂0.05~0.15份...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡卫江，丁蓉龙，李建卫，孙菠，
申请(专利权)人：嘉兴优瑞生物科技有限公司，浙江清华长三角研究院，
类型：发明
国别省市：浙江;33