一种胎盘细胞冷冻装置及其冷冻方法制造方法及图纸

本发明专利技术公开了一种胎盘细胞冷冻装置及其冷冻方法，尤其是一种胎盘细胞的冷冻方法，包括如下步骤：S1配置预处理液：选用丙谷二肽、苏亮环二肽、葡甘露聚糖、氯化钠水溶液；质量比例为3‑4:6‑7:1‑2：50；所述氯化钠水溶液，质量浓度为0.9%；S2预处理：将洗涤过后的胎盘细胞采用预处理液淋洗，预处理液淋洗淋洗的流速为1.5ml/min，淋洗时间为10分钟，预处理液的温度为4度，得到预处理后的胎盘细胞；S4加入保存液：在4度条件下，向预处理后的胎盘细胞中加入配置的保存液，加入的保存液量占总体保存液量的一半。本发明专利技术避免了传统的“慢冻”技术因为降温速率的不稳定而造成的细胞复苏成活率低、溶血率高的技术问题，同时，减少了不必要的冷冻损伤和冷冻毒性。

【技术实现步骤摘要】
一种胎盘细胞冷冻装置及其冷冻方法
本专利技术涉及细胞冷冻
，尤其涉及一种胎盘细胞冷冻装置及其冷冻方法。
技术介绍
干细胞(stemcell)是一类具有自我复制能力的多潜能细胞。在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。根据干细胞所处的发育阶段分为胚胎干细胞和成体干细胞，根据干细胞的发育潜能分为三类:全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞，干细胞是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称为“万用细胞。现有的胎盘干细胞在保存时，一般采用传统的梯度降温（慢冻）的方法，通常需要一天的时间，繁琐耗时，不仅加剧了有毒冻存保护剂与细胞的接触时间，增加了细胞损伤的机会，还需要多种冷冻设备。另外一旦没有达到“慢冻”的降温速率要求，冻存效率就会显著下降，造成细胞复苏成活率的降低。
技术实现思路
基于
技术介绍
存在的技术问题，本专利技术提出了一种胎盘细胞冷冻装置及其冷冻方法。本专利技术提出的一种胎盘细胞冷冻装置及其冷冻方法，包括如下步骤：S1配置预处理液：选用丙谷二肽、苏亮环二肽、葡甘露聚糖、氯化钠水溶液；质量比例为3-4:6-7:1-2：50；所述氯化钠水溶液，质量浓度为0.9%；S2预处理：将洗涤过后的胎盘细胞采用预处理液淋洗，预处理液淋洗淋洗的流速为1.5ml/min，淋洗时间为10分钟，预处理液的温度为4度，得到预处理后的胎盘细胞；S3配置保存液：一份平衡液一、一份平衡液二和一份玻璃化液，所述平衡液一包括基础液、2-3％乙二醇、1-1.5％二甲基亚砜、1.5-2.0％丙二醇，上述百分数均为体积百分比；所述平衡液二包括基础液、7-8％乙二醇、3.5-4.0％二甲基亚砜、3.5-4.0％丙二醇、5-30μM(μmol/L)染料木黄酮，上述百分数均为体积百分比；所述玻璃化液包括基础液、14-16％乙二醇、7-8％二甲基亚砜、7-8％丙二醇、0.4-0.6M(mol/L)蔗糖、5-25μΜ(μmol/L)染料木黄酮，上述百分数均为体积百分比；S4加入保存液：在4度条件下，向预处理后的胎盘细胞中加入配置的保存液，加入的保存液量占总体保存液量的一半，静置1-2分钟；S5继续加入剩余的保存液，先采用200-300r/min的速度低速震荡，再静置6-8分钟，装入冻存管中，之后放入冷冻柜中保存。优选的，所述基础液为含有质量分数21-22％SPS的基础试剂，基础试剂为Earle's平衡盐溶液。优选的，所述步骤S5中将冻存管放入冷冻柜中，控制冷冻柜的降温速率，直至降到一定温度，然后进行二次降温，调整冷冻柜的降温速率，直至降到一定温度，将二次降温后的胎盘细胞转移至-196℃的液氮中保存。一种胎盘细胞冷冻装置，包括冷冻柜和液氮速冻机。本专利技术中，所述一种胎盘细胞冷冻装置及其冷冻方法，避免了传统的“慢冻”技术因为降温速率的不稳定而造成的细胞复苏成活率低、溶血率高的技术问题，同时，减少了不必要的冷冻损伤和冷冻毒性。具体实施方式下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。实施例一一种胎盘细胞冷冻装置及其冷冻方法，包括如下步骤：S1配置预处理液：选用丙谷二肽、苏亮环二肽、葡甘露聚糖、氯化钠水溶液；质量比例为3-4:6-7:1-2：50；所述氯化钠水溶液，质量浓度为0.9%；S2预处理：将洗涤过后的胎盘细胞采用预处理液淋洗，预处理液淋洗淋洗的流速为1.5ml/min，淋洗时间为10分钟，预处理液的温度为4度，得到预处理后的胎盘细胞；S3配置保存液：一份平衡液一、一份平衡液二和一份玻璃化液，所述平衡液一包括基础液、2％乙二醇、1％二甲基亚砜、1.5％丙二醇，上述百分数均为体积百分比；所述平衡液二包括基础液、7％乙二醇、3.5％二甲基亚砜、3.5％丙二醇、5μM(μmol/L)染料木黄酮，上述百分数均为体积百分比；所述玻璃化液包括基础液、14％乙二醇、7％二甲基亚砜、7％丙二醇、0.4M(mol/L)蔗糖、5μΜ(μmol/L)染料木黄酮，上述百分数均为体积百分比；S4加入保存液：在4度条件下，向预处理后的胎盘细胞中加入配置的保存液，加入的保存液量占总体保存液量的一半，静置1-2分钟；S5继续加入剩余的保存液，先采用200r/min的速度低速震荡，再静置6-8分钟，装入冻存管中，之后放入冷冻柜中保存。本专利技术中，所述基础液为含有质量分数21-22％SPS的基础试剂，基础试剂为Earle's平衡盐溶液。本专利技术中，所述步骤S5中将冻存管放入冷冻柜中，控制冷冻柜的降温速率，直至降到一定温度，然后进行二次降温，调整冷冻柜的降温速率，直至降到一定温度，将二次降温后的胎盘细胞转移至-196℃的液氮中保存。一种胎盘细胞冷冻装置，包括冷冻柜和液氮速冻机。实施例二一种胎盘细胞冷冻装置及其冷冻方法，包括如下步骤：S1配置预处理液：选用丙谷二肽、苏亮环二肽、葡甘露聚糖、氯化钠水溶液；质量比例为3-4:6-7:1-2：50；所述氯化钠水溶液，质量浓度为0.9%；S2预处理：将洗涤过后的胎盘细胞采用预处理液淋洗，预处理液淋洗淋洗的流速为1.5ml/min，淋洗时间为10分钟，预处理液的温度为4度，得到预处理后的胎盘细胞；S3配置保存液：一份平衡液一、一份平衡液二和一份玻璃化液，所述平衡液一包括基础液、3％乙二醇、1.5％二甲基亚砜、2.0％丙二醇，上述百分数均为体积百分比；所述平衡液二包括基础液、8％乙二醇、4.0％二甲基亚砜、4.0％丙二醇、30μM(μmol/L)染料木黄酮，上述百分数均为体积百分比；所述玻璃化液包括基础液、16％乙二醇、8％二甲基亚砜、8％丙二醇、0.6M(mol/L)蔗糖、25μΜ(μmol/L)染料木黄酮，上述百分数均为体积百分比；S4加入保存液：在4度条件下，向预处理后的胎盘细胞中加入配置的保存液，加入的保存液量占总体保存液量的一半，静置1-2分钟；S5继续加入剩余的保存液，先采用200-300r/min的速度低速震荡，再静置6-8分钟，装入冻存管中，之后放入冷冻柜中保存。本专利技术中，所述基础液为含有质量分数21-22％SPS的基础试剂，基础试剂为Earle's平衡盐溶液。本专利技术中，所述步骤S5中将冻存管放入冷冻柜中，控制冷冻柜的降温速率，直至降到一定温度，然后进行二次降温，调整冷冻柜的降温速率，直至降到一定温度，将二次降温后的胎盘细胞转移至-196℃的液氮中保存。一种胎盘细胞冷冻装置，包括冷冻柜和液氮速冻机。本专利技术：配置预处理液：选用丙谷二肽、苏亮环二肽、葡甘露聚糖、氯化钠水溶液；质量比例为3-4:6-7:1-2：50；所述氯化钠水溶液，质量浓度为0.9%；预处理：将洗涤过后的胎盘细胞采用预处理液淋洗，预处理液淋洗淋洗的流速本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种胎盘细胞的冷冻方法，其特征在于，包括如下步骤：/nS1配置预处理液：/n选用丙谷二肽、苏亮环二肽、葡甘露聚糖、氯化钠水溶液；质量比例为3-4:6-7:1- 2：50；所述氯化钠水溶液，质量浓度为0.9%；/nS2预处理：/n将洗涤过后的胎盘细胞采用预处理液淋洗，预处理液淋洗淋洗的流速为1.5ml/min，淋洗时间为10分钟，预处理液的温度为4度，得到预处理后的胎盘细胞；/nS3配置保存液：一份平衡液一、一份平衡液二和一份玻璃化液，所述平衡液一包括基础液、2-3％乙二醇、1-1.5％二甲基亚砜、1.5-2.0％丙二醇，上述百分数均为体积百分比；所述平衡液二包括基础液、7-8％乙二醇、3.5-4.0％二甲基亚砜、3.5-4.0％丙二醇、5-30μM(μmol/L)染料木黄酮，上述百分数均为体积百分比；所述玻璃化液包括基础液、14-16％乙二醇、7-8％二甲基亚砜、7-8％丙二醇、0.4-0.6M(mol/L)蔗糖、5-25μΜ(μmol/L)染料木黄酮，上述百分数均为体积百分比；/nS4加入保存液：/n在4度条件下，向预处理后的胎盘细胞中加入配置的保存液，加入的保存液量占总体保存液量的一半，静置1-2分钟；/nS5继续加入剩余的保存液，先采用200-300r/min的速度低速震荡，再静置6-8分钟，装入冻存管中，之后放入冷冻柜中保存。/n...

【技术特征摘要】
1.一种胎盘细胞的冷冻方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1配置预处理液：
选用丙谷二肽、苏亮环二肽、葡甘露聚糖、氯化钠水溶液；质量比例为3-4:6-7:1-2：50；所述氯化钠水溶液，质量浓度为0.9%；
S2预处理：
将洗涤过后的胎盘细胞采用预处理液淋洗，预处理液淋洗淋洗的流速为1.5ml/min，淋洗时间为10分钟，预处理液的温度为4度，得到预处理后的胎盘细胞；
S3配置保存液：一份平衡液一、一份平衡液二和一份玻璃化液，所述平衡液一包括基础液、2-3％乙二醇、1-1.5％二甲基亚砜、1.5-2.0％丙二醇，上述百分数均为体积百分比；所述平衡液二包括基础液、7-8％乙二醇、3.5-4.0％二甲基亚砜、3.5-4.0％丙二醇、5-30μM(μmol/L)染料木黄酮，上述百分数均为体积百分比；所述玻璃化液包括基础液、14-16％乙二醇、7-8％二甲基亚砜、7-8％丙二醇、0.4-0.6M(mol/L)蔗糖、5-25μ...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴敬，赵岩，苏波，
申请(专利权)人：河南和泽干细胞基因工程有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41