一种检测牛早期妊娠的方法技术

本发明专利技术提供一种检测牛早期妊娠的方法，包括：在母牛配种后的第7‑‑14天，收集母牛的晨尿或者上一次小便后1‑2小时再小便的尿液；将牛的HCG检测试纸插入尿液中5‑10秒，试纸质控线C未显色、检测线T显色，检测结果无效；质控线C显色，检测线T未显色，母牛的HCG水平低下；质控线C及检测线T都显色，与HCG比色卡进行对比；HCG＜10mIU/ml,母牛未怀孕；HCG≧10mIU/ml,母牛可能怀孕，需要连续测试两次；两次检测的HCG上升，且后一次是前一次的1‑2倍，母牛怀孕，且为活胎；两次检测的HCG维持不变或下降，表明母牛怀孕，但胚胎停育，及时采取保胎措施或停止妊娠。

【技术实现步骤摘要】
一种检测牛早期妊娠的方法
本专利技术涉及一种检测方法，尤其是一种检测牛早期妊娠的方法，属于动物检测方法

技术介绍
目前，牛的妊娠检测主要有外部观察法和试情法，以及超声波检测法，免疫学检测法、红细胞凝集实验、血清酸滴定法等。外部观察法和试情法通常是以母牛配种后17-21天，观察母牛是否返情来检测是否妊娠，但牛胚胎停止发育，母牛在短时间内也不会返情，会处在假妊娠状态。超声波诊断法是利用超声波的物理特性，把超声波的物理特性和动物组织结构的声学特点密切结合的一种物理学检测，该方法需要在母牛配种40天后才能测出牛是否妊娠，60天后准确率才能达到100%。免疫学诊断法即利用妊娠前后母牛血清孕酮激素物质进行检测，根据其含量来判断母牛是否妊娠。但由于这些激素在妊娠和未妊娠母牛血清中，因品种、个体差异等因素的影响，目前还很难在生产中推广。红细胞凝集实验即将妊娠早期母牛体内特异性抗原与红细胞相结合，用其制备抗血清，与妊娠10---15天的母牛红细胞混合时会发生红细胞凝集现象，如未妊娠，则不发生红细胞凝集现象，此法对母牛妊娠28---60天的准确率为90%，但母牛胚胎停止发育后也会发生红细胞凝集现象，易导致母牛长期处于假妊娠状态。血清酸滴定法即母牛在胚胎快速生长过程中，机体生产出一种特有的免疫球蛋白，在酸性环境中与其它蛋白质形成低溶性复合物（絮状物）的特性，准确率可达90.81%，但母羊胚胎停止发育后也会发生与其它蛋白质形成低溶性复合物（絮状物）的特性，也易导致母牛长期处于假妊娠状态，操作过程繁琐，并且需要在18--25度的室温环境下才能进行，不利于现场检测。
技术实现思路
鉴于上述牛的生理特征，本专利技术提供一种检测牛早期妊娠的方法，以确定母牛是否妊娠以及胚胎是否存活，减少母牛空怀孕所造成的经济损失，缩短母牛的非繁殖天数，同时及时对妊娠母牛进行合理的饲养和管理，提高繁殖效率，促进母牛的集约化管理，提高牛的生产效益。本专利技术通过下列技术方案完成：一种检测牛早期妊娠的方法，其特征在于包括下列步骤：1）在母牛配种后的第7---14天，收集母牛的晨尿或者上一次小便后1-2小时再小便的尿液1-10ml；2）将牛的促绒毛膜性腺激素HCG检测试纸插入步骤1）的尿液中5--10秒，取出，于15-18分钟后，观察该检测试纸中的质控线C与检测线T是否显色：3）显色结果如下：试纸质控线C未显色、检测线T显色，表明检测结果无效，需要重新检测；试纸质控线C显色，检测线T未显色，表明母牛的促绒毛膜性腺激素HCG水平低下，需要隔日进行检测；试纸质控线C及检测线T都显色，用该显色与HCG比色卡进行下列对比；31）当促绒毛膜性腺激素HCG＜10mIU/ml,表明母牛未怀孕；32）当当促绒毛膜性腺激素HCG≧10mIU/ml,表明母牛可能怀孕，需要连续测试两次，每隔一天测试一次；33）当步骤32）的两次检测试结果的促绒毛膜性腺激素HCG上升，且后一次的促绒毛膜性腺激素HCG是前一次的1-2倍，表明母牛怀孕，且为活胎；34）当步骤32）的两次检测结果的HCG维持不变或下降，表明母牛怀孕，但胚胎停育，及时采取保胎措施或停止妊娠。所述步骤2）牛的促绒毛膜性腺激素HCG检测试纸经过下列方法制备：21）按下列制备各组分：金溶液：将质量浓度为1%的氯金酸溶液2ml、质量浓度为1%的柠檬酸钠加入纯化水至100ml，加热至溶液呈现紫红色后，冷却至室温，得金溶液；封闭液：将0.005g牛血清白蛋白溶解在300ul纯化水中，加入30ul碳酸钾溶液，混合均匀，得330ul封闭液；样本垫处理液：将0.605g三羧甲氨基甲烷、1.5g氯化钠完全溶解在100ml纯化水中，得样本垫处理液；胶体金结合物稀释液：将0.605g三羧甲氨基甲烷，0.2g聚乙烯吡咯烷酮，5g蔗糖，0.9g氯化钠，0.5g牛血清白蛋白，3ml羊血清，0.15ml吐温20，与100ml纯化水混合均匀，得胶体金结合物稀释液；HCG包被液：将100-200mg牛的促绒毛膜性腺激素单克隆α亚级抗体HCGmAbCoating、质量浓度为1%的海藻糖溶液1ml溶解在0.01MPBS缓冲液100ml中，混合均匀，得HCG包被液；IgG包被液：将羊抗鼠IgG抗体100mg、质量浓度为1%的海藻糖溶液1ml溶解在0.01MPBS缓冲液100ml中，混合均匀，得IgG包被液；22）在底板上划膜22A）将NC膜贴在PVC板上表面的中部，得底板；22B）用XYZ3010喷金划膜仪，并按0.8μl/cm的量，以500mm/s的速度，将IgG包被液均匀地划在步骤22A）底板上的NC膜的上端作为质控线C，将HCG包被液均匀地划在NC膜的下端作为检测线T，质控线C与检测线T相距6mm±1mm，质控线C距离NC膜上端8mm±1mm，检测线T距离NC膜下端7mm±1mm，然后放入干燥箱内，于温度为25℃±2℃、湿度≤30％下干燥18h±2h，得划膜板；23）金垫制备23A）在100ml步骤21）的金溶液中加入1.2ml碳酸钾溶液、1.5-2mgLHmb2，搅拌40min，滴加330ul封闭液，搅拌10min，于4℃、12000r/min的条件下离心40min，直至上清液变为水，弃上清液，取余液5.3ml，加入40ml胶体金结合物稀释液混匀；23B）将40ml胶体金结合物稀释液均匀铺在1080cm2玻璃纤维素膜RB65上，然后放入干燥箱内，于温度为25℃±2℃、湿度≤30％下干燥18h±2h，得金垫；24）样本垫制备24A）按30ml/张的量，将步骤21）的样本垫处理液均匀铺在玻璃纤维素膜SB06上，然后放入干燥箱内，于温度为25℃±2℃、湿度≤30％下干燥18h±2h，得样本垫；25）贴板25A）将步骤23）的金垫贴于步骤22B）划膜板的NC膜下端，并使1-2mm的金垫后端搭在NC膜上；25B）将步骤24）的样本垫贴于步骤25A）的金垫前端上面，并使样本垫后端完全搭在金垫上，样本垫前端贴于PVC板前端；25C）将吸水垫贴于25B）的PVC板后端，并使1-2mm的吸水垫前端搭在NC膜后端；26）将步骤25C）贴板切割成3.0±0.5mm的试纸条，得牛的促绒毛膜性腺激素HCG检测试纸。本专利技术具有下列优点及效果：采用上述方案，可在母牛配种后的第7---14天，取尿样，对牛的早期妊娠进行简单、方便、快速、准确的检测，比现有技术更早地知道牛是否妊娠以及胚胎是否存活，弥补了现有技术仅能判断牛是否妊娠，却不能反应牛胚胎是否存活，进而带来假妊娠、空怀胎所造成的经济损失，以便尽快消除假妊娠、空怀胎，让母牛尽早恢复正常，缩短母牛的非繁殖天数，同时对正常的妊娠母牛进行对应的饲养和管理，一方面提高牛的繁殖效率，另一方面减少种牛哺乳之后的死亡率，促进牛的集约化管理，提高羊的养殖效益。附图说明图1为HCG检测试纸条的结构本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测牛早期妊娠的方法，其特征在于包括下列步骤：/n1）在母牛配种后的第7---14天，收集母牛的晨尿或者上一次小便后1-2小时再小便的尿液1-10ml；/n2）将牛的促绒毛膜性腺激素HCG检测试纸插入步骤1）的尿液中5--10秒，取出，于15-18分钟后，观察该检测试纸中的质控线C与检测线T是否显色：/n3）显色结果如下：/n试纸质控线C未显色、检测线T显色，表明检测结果无效，需要重新检测；/n试纸质控线C显色，检测线T未显色，表明母牛的促绒毛膜性腺激素HCG水平低下，需要隔日进行检测；/n试纸质控线C及检测线T都显色，用该显色与HCG比色卡进行下列对比；/n31）当促绒毛膜性腺激素HCG＜10mIU/ml, 表明母牛未怀孕；/n32）当当促绒毛膜性腺激素HCG≧10mIU/ml, 表明母牛可能怀孕，需要连续测试两次，每隔一天测试一次；/n33）当步骤32）的两次检测试结果的促绒毛膜性腺激素HCG上升，且后一次的促绒毛膜性腺激素HCG是前一次的1-2倍，表明母牛怀孕，且为活胎；/n34）当步骤32）的两次检测结果的HCG维持不变或下降，表明母牛怀孕，但胚胎停育，及时采取保胎措施或停止妊娠。/n...

【技术特征摘要】
1.一种检测牛早期妊娠的方法，其特征在于包括下列步骤：
1）在母牛配种后的第7---14天，收集母牛的晨尿或者上一次小便后1-2小时再小便的尿液1-10ml；
2）将牛的促绒毛膜性腺激素HCG检测试纸插入步骤1）的尿液中5--10秒，取出，于15-18分钟后，观察该检测试纸中的质控线C与检测线T是否显色：
3）显色结果如下：
试纸质控线C未显色、检测线T显色，表明检测结果无效，需要重新检测；
试纸质控线C显色，检测线T未显色，表明母牛的促绒毛膜性腺激素HCG水平低下，需要隔日进行检测；
试纸质控线C及检测线T都显色，用该显色与HCG比色卡进行下列对比；
31）当促绒毛膜性腺激素HCG＜10mIU/ml,表明母牛未怀孕；
32）当当促绒毛膜性腺激素HCG≧10mIU/ml,表明母牛可能怀孕，需要连续测试两次，每隔一天测试一次；
33）当步骤32）的两次检测试结果的促绒毛膜性腺激素HCG上升，且后一次的促绒毛膜性腺激素HCG是前一次的1-2倍，表明母牛怀孕，且为活胎；
34）当步骤32）的两次检测结果的HCG维持不变或下降，表明母牛怀孕，但胚胎停育，及时采取保胎措施或停止妊娠。


2.根据权利要求1所述的检测牛早期妊娠的方法，其特征在于所述步骤2）牛的促绒毛膜性腺激素HCG检测试纸经过下列方法制备：
21）按下列制备各组分：
金溶液：将质量浓度为1%的氯金酸溶液2ml、质量浓度为1%的柠檬酸钠加入纯化水至100ml，加热至溶液呈现紫红色后，冷却至室温，得金溶液；
封闭液：将0.005g牛血清白蛋白溶解在300ul纯化水中，加入30ul碳酸钾溶液，混合均匀，得330ul封闭液；
样本垫处理液：将0.605g三羧甲氨基甲烷、1.5g氯化钠完全溶解在100ml纯化水中，得样本垫处理液；
胶体金结合物稀释液：将0.605g三羧甲氨基甲烷，0.2g聚乙烯吡咯烷酮，5g蔗糖，0.9g氯化钠，0.5g牛血清白蛋白，3ml羊血清，0.15ml吐温20，与100ml纯化水混合均匀，得胶体金结合物稀释液；
HCG包被液：将100-200mg牛的促绒毛膜性腺激素单克隆α亚级抗体H...

【专利技术属性】
技术研发人员：金义达，
申请(专利权)人：昆明天沃生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：云南;53