用于生成和使用人源化构象特异性磷酸化的τ抗体的方法和组合物技术

本公开总体上涉及可以结合至磷酸化的苏氨酸231‑τ蛋白(pT231‑τ)并中和该磷酸化的苏氨酸231‑τ蛋白(pT231‑τ)的活性的构象特异性抗体。本技术的抗体可用于用于治疗有需要的对象中的与升高的顺式‑pT231‑τ蛋白表达相关的神经病症的方法中。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于生成和使用人源化构象特异性磷酸化的τ抗体的方法和组合物相关申请的交叉引用本申请要求2017年11月9日提交的美国临时专利申请No.62/583,850的权益和优先权，该申请的全部公开内容出于任何和所有目的在此通过引用整体并入。
本技术总体上涉及特异性地结合磷酸化的苏氨酸231-τ(tau)蛋白(pT231-τ)的构象特异性抗体的制备及其用途。特别地，本技术涉及顺式-pT231-τ中和抗体的制备及其在治疗与升高的顺式-pT231-τ蛋白表达相关的神经病症中的用途。
技术介绍
提供以下描述以帮助读者理解。提供的信息或引用的参考文献均不被认为是本方法的现有技术。患有阿尔茨海默氏病(AD)和多种其他中枢神经系统病症(诸如额颞叶痴呆、皮克氏病、皮质基底节变性、创伤性脑损伤(TBI)、慢性创伤性脑病变(CTE)和进行性核上性麻痹)的患者的脑部含有包含τ蛋白的神经纤维缠结(NFT)。这种共同的病理特征导致这些各种神经退行性疾病(被称为“τ蛋白病”)。τ相关病理与AD中的神经元和记忆力的进行性丧失密切相关。AD的τ蛋白病中的极早期事件是τ过度磷酸化，特别是在Ser/Thr-Pro基序上的τ过度磷酸化，其引起微管破坏和神经毒性。已发现τ中的磷酸化的Thr231-Pro基序(pT231-τ)以两种不同的顺式和反式构象存在。pT231-τ蛋白的顺式构象主要在AD患者的脑中表达。由于神经元功能障碍发生在缠结形成之前很久，因此主要的挑战是开发免疫疗法，其专门针对在τ蛋白病和AD中记忆力丧失之前的早期致病事件。
技术实现思路
本技术总体上涉及特异性地结合磷酸化的苏氨酸231-τ蛋白(pT231-τ)并中和磷酸化的苏氨酸231-τ蛋白(pT231-τ)活性的构象特异性抗体。本技术的抗体可用于用于治疗与升高的顺式-pT231-τ蛋白表达相关的神经病症的方法中。在一方面，本技术提供了抗体，所述抗体包含SEQIDNO:1至SEQIDNO:4或SEQIDNO:7至SEQIDNO:14的重链免疫球蛋白可变结构域序列或其具有一种或多种保守氨基酸取代的变体，和SEQIDNO:41、SEQIDNO:42或SEQIDNO:45至SEQIDNO:48的轻链免疫球蛋白可变结构域序列或其具有一种或多种保守氨基酸取代的变体。在一些实施方式中，抗体是人源化抗体。在另一方面，本技术提供了抗体的抗原结合片段，其中，抗原结合片段选自由以下组成的组：Fab、F(ab’)2、Fab’、scFv和Fv。在以上实施方式中的任一者中，抗体结合至包含氨基酸序列KVAVVRTPPKSPS(SEQIDNO:56)的磷酸化的苏氨酸231-τ蛋白的表位。在一些实施方式中，抗体特异性地结合至磷酸化的苏氨酸231-τ蛋白(pT231-τ)的顺式构象。在一些实施方式中，抗体具有选自由以下组成的组的同种型：IgA1、IgA2、IgD、IgE、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4和IgM。在一方面，本技术提供了编码本文公开的抗-顺式-pT231-τ抗体的重组核酸序列。在又一方面，本技术提供了宿主细胞或载体，其包含编码本文所描述的抗-顺式-pT231-τ抗体的重组核酸。在一方面，本技术提供了组合物，其包含抗-顺式-pT231-τ抗体和药学上可接受的载剂。在一些实施方式中，组合物包含抗-顺式-pT231-τ抗体，所述抗-顺式-pT231-τ抗体包含SEQIDNO:1至SEQIDNO:4或SEQIDNO:7至SEQIDNO:14的重链免疫球蛋白可变结构域序列或其具有一种或多种保守氨基酸取代的变体，和任选的SEQIDNO:41、SEQIDNO:42或SEQIDNO:45至SEQIDNO:48的轻链免疫球蛋白可变结构域序列或其具有一种或多种保守氨基酸取代的变体。在另一方面，本技术提供了用于治疗有需要的对象中的与升高的顺式-pT231-τ蛋白表达相关的神经病症的方法，所述方法包括向对象施用有效量的包含SEQIDNO:1至SEQIDNO:4或SEQIDNO:7至SEQIDNO:14的重链免疫球蛋白可变结构域序列或其具有一种或多种保守氨基酸取代的变体的抗体，其中，该抗体特异性地结合至顺式-pT231-τ蛋白并中和该顺式-pT231-τ蛋白。在该方法的某些实施方式中，抗体还包含SEQIDNO:41、SEQIDNO:42或SEQIDNO:45至SEQIDNO:48的轻链免疫球蛋白可变结构域序列或其具有一种或多种保守氨基酸取代的变体。在该方法的一些实施方式中，神经病症是τ蛋白病、创伤性脑损伤(TBI)或中风。在另一个实施方式中，τ蛋白病选自由以下组成的组：进行性核上性麻痹(PSP)、慢性创伤性脑病变(CTE)、额颞叶痴呆(FTD)、额颞叶变性、Lytico-Bodig病、缠结优势型痴呆、脑膜血管瘤病、亚急性硬化性全脑炎、皮克氏病、皮质基底节变性和阿尔茨海默氏病(AD)。在某些实施方式中，对象处于所述τ蛋白病的早期。在一个实施方式中，所述τ蛋白病的早期通过获自所述对象的样品中升高水平的顺式pT231-τ或顺式pT231-τ:反式pT231-τ比率的增加来确定。在一些实施方式中，该方法还包括确定获自对象的样品中CSFt-τ、pT181-τ、Αβ42的水平或ApoE4水平。在某些实施方式中，样品选自由以下组成的组：尿液、血液、血清、血浆、唾液、羊水和脑脊液(CSF)。在一些实施方式中，对象具有反复的脑创伤史。另外地或替选地，在该方法的一些实施方式中，将抗体与附加的治疗剂分开地、依序地或同时地施用给对象。在一些实施方式中，附加的治疗剂是多奈哌齐、卡巴拉汀、加兰他敏、美金刚和氯化锂中的一者或多者。在一方面，本技术提供了用于选择用本文公开的抗-顺式-pT231-τ抗体治疗的对象的方法，其包括：(a)检测获自所述对象的样品中的相对于在参考样品中观察到的顺式pT231-τ蛋白水平的提高或顺式pT231-τ蛋白:反式pT231-τ蛋白比率的增加；和(b)选择所述对象用本文公开的抗-顺式-pT231-τ抗体治疗。在一些实施方式中，获自对象的样品选自由以下组成的组：尿液、血液、血清、血浆、唾液、羊水和脑脊液(CSF)。在某些实施方式中，参考样品获自健康对照对象。在另一方面，本技术提供了用于治疗有需要的对象中的与升高的顺式-pT231-τ蛋白表达相关的神经病症的试剂盒，该试剂盒包括特异性地结合至顺式-pT231-τ蛋白并中和该顺式-pT231-τ蛋白的抗体和使用抗体的说明书，其中，抗体包含SEQIDNO:1至SEQIDNO:4或SEQIDNO:7至SEQIDNO:14的重链免疫球蛋白可变结构域序列或其具有一种或多种保守氨基酸取代的变体。在试剂盒的一些实施方式中，抗体还包含SEQIDNO:41、SEQIDNO:42或SEQIDNO:45至SEQIDNO:48的轻链免疫球蛋白可变结构域序列或其具有一种或多种保守氨基酸取代的变体。在一方面，本技术提供了用于检测样品中的顺式-pT231-τ蛋白的试剂盒，该试剂盒本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗体，所述抗体包含SEQ ID NO:1至SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:7至SEQ ID NO:14的重链免疫球蛋白可变结构域序列或其具有一种或多种保守氨基酸取代的变体；和SEQID NO:41、SEQ ID NO:42或SEQ ID NO:45至SEQ ID NO:48的轻链免疫球蛋白可变结构域序列或其具有一种或多种保守氨基酸取代的变体。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171109 US 62/583,8501.一种抗体，所述抗体包含SEQIDNO:1至SEQIDNO:4或SEQIDNO:7至SEQIDNO:14的重链免疫球蛋白可变结构域序列或其具有一种或多种保守氨基酸取代的变体；和SEQIDNO:41、SEQIDNO:42或SEQIDNO:45至SEQIDNO:48的轻链免疫球蛋白可变结构域序列或其具有一种或多种保守氨基酸取代的变体。


2.如权利要求1所述的抗体，其中，所述抗体结合至包含氨基酸序列KVAVVRTPPKSPS(SEQIDNO:56)的磷酸化的苏氨酸231-τ蛋白的表位。


3.如权利要求1或2所述的抗体，其中，所述抗体特异性地结合至磷酸化的苏氨酸231-τ蛋白的顺式构象。


4.如权利要求1至3中任一项所述的抗体，其中，所述抗体是人源化抗体。


5.一种如权利要求1至4中任一项所述的抗体的抗原结合片段，其中，所述抗原结合片段选自由以下组成的组：Fab、F(ab’)2、Fab’、scFv和Fv。


6.如权利要求1至4中任一项所述的抗体，其中，所述抗体具有选自由以下组成的组的同种型：IgA1、IgA2、IgD、IgE、IgG1、IgG2、IgG3、IgG4和IgM。


7.一种重组核酸序列，其编码如权利要求1至2中任一项所述的抗体。


8.一种宿主细胞或载体，其包含如权利要求7所述的重组核酸序列。


9.一种组合物，其包含如权利要求1至2中任一项所述的抗体和药学上可接受的载剂。


10.一种用于治疗有需要的对象中的与升高的顺式-pT231-τ蛋白表达相关的神经病症的方法，所述方法包括向所述对象施用有效量的包含SEQIDNO:1至SEQIDNO:4或SEQIDNO:7至SEQIDNO:14的重链免疫球蛋白可变结构域序列或其具有一种或多种保守氨基酸取代的变体的抗体，其中，所述抗体特异性地结合至顺式-pT231-τ蛋白并中和所述顺式-pT231-τ蛋白。


11.如权利要求10所述的方法，其中，所述抗体还包含SEQIDNO:41、SEQIDNO:42或SEQIDNO:45至SEQIDNO:48的轻链免疫球蛋白可变结构域序列或其具有一种或多种保守氨基酸取代的变体。


12.如权利要求10或11所述的方法，其中，所述神经病症是τ蛋白病、创伤性脑损伤(TBI)或中风。


13.如权利要求12所述的方法，其中，所述τ蛋白病选自由以下组成的组：进行性核上性麻痹(PSP)、慢性创伤性脑病变(CTE)、额颞叶痴呆(FTD)、额颞叶变性、Lytico-Bodig病、缠结优势型痴呆、脑膜血管瘤病、亚急性硬化性全脑炎、皮克氏病、皮质基底节变性和阿尔茨海默氏病(AD)。


14.如权利要求13所述的方法，其中，所述对象处于所述τ蛋白病的早期。


15.如权利要求14所述的方法，其中，所述τ蛋白病的早期通过获自所述对象的样品中的升高水平的顺式pT231-τ或顺式pT231-τ:反式pT231-τ比率的增加来确定。


16.如权利要求15所述的方法，其还包括确定获自所述对...

【专利技术属性】
技术研发人员：尚卡尔·库马尔，鹤下直哉，迈克尔·阿里亚尼安，马丁·杰弗森，
申请(专利权)人：品通治疗有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US