一种快速对番茄果实中花青素进行种类解析和含量测定的方法技术

本发明专利技术公开了一种快速对番茄果实中花青素进行种类解析和含量测定的方法。本发明专利技术使用甲醇/甲酸(9:1,v/v)为溶剂，加入内标后，对番茄果实中花青素进行液液萃取，4℃提取12h后，离心取上清，过膜后，对花青素的质谱信息和光谱信息进行同时采集，对番茄果实中花青素进行定量，并进行结构解析。该检测方法前处理过程简易，检测结果精确，不需要繁琐的前处理提纯步骤。该发明专利技术可用于对番茄果实中花青素进行定性定量分析。

【技术实现步骤摘要】
一种快速对番茄果实中花青素进行种类解析和含量测定的方法
本专利技术涉及一种快速对番茄果实中花青素进行种类解析和含量测定的方法。
技术介绍
由于氧自由基吸收能力，花青素是一类对人体健康有益的物质，同时也具有药用价值。在植物中，花青素可以提高植物抵抗逆境的能力。因此，花青素的识别，纯化及其结构解析成为研究的热点。花青素的结构母核是2-苯基苯并吡喃阳离子，主要包括矢车菊素(cyanindin)、天竺葵素(pelargonidin)、飞燕草素(delphinidin)、芍药素(peonidin)、矮牵牛素(petunidin)和锦葵素(malvidin)几大类。花青素的结构解析很重要，但因其结构相似度高，解析困难。花青素是通过类黄酮代谢通路合成的，如图1所示。苯丙氨酸在一系列酶的作用下，合成花青素，包括PAL，苯丙氨酸氨裂解酶；CA4H，肉桂酸4-羟化酶；4CL，4-香豆酸辅酶A连接酶；CHS，查尔酮合成酶；CHI，查耳酮异构酶；F3H，黄烷酮-3-羟化酶；FLS，黄酮醇合酶；F3’H，类黄酮3'-羟化酶；F3’5’H，类黄酮-3',5本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种对番茄果实中花青素进行种类解析和含量测定的方法，包括：/n1)将原料冷冻磨碎后，使用提取剂a提取，得到提取液a；离心，收集上清液，氮气吹干，再加入提取剂b重新溶解，过滤，收集滤液，得到提取液b；/n所述原料为分开的番茄果皮和番茄果肉；/n2)将所述提取液b用液相色谱和质谱联用进行花青素种类的解析；/n3)对所述提取液b所得不同种类花青素的含量进行定量分析，完成所述番茄果实中花青素的种类解析和含量测定。/n

【技术特征摘要】
1.一种对番茄果实中花青素进行种类解析和含量测定的方法，包括：
1)将原料冷冻磨碎后，使用提取剂a提取，得到提取液a；离心，收集上清液，氮气吹干，再加入提取剂b重新溶解，过滤，收集滤液，得到提取液b；
所述原料为分开的番茄果皮和番茄果肉；
2)将所述提取液b用液相色谱和质谱联用进行花青素种类的解析；
3)对所述提取液b所得不同种类花青素的含量进行定量分析，完成所述番茄果实中花青素的种类解析和含量测定。


2.一种对番茄果实中花青素进行种类解析的方法，包括：权利要求1和4-8中任一所述步骤1)和步骤2)。


3.一种对番茄果实中花青素进行含量测定的方法，包括：权利要求1和4-8中任一所述步骤1)-步骤3)。


4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤1)所述冷冻步骤中，冷冻方式为液氮冷冻；
所述提取步骤中，所述提取剂a为含内标的溶液；所述内标具体为芍药素3-葡萄糖苷；
所述提取剂a中，溶剂为由甲醇和甲酸组成的混合液；所述甲醇和甲酸的体积比为7-9：1；具体为9:1；
所述提取剂a中，内标的浓度具体为1-5μg/ml；具体为3.75μg/ml；
所述提取剂a与所述原料的用量比具体为0.2-0.8g：1-4ml；具体为0.4g：4ml；
所述提取步骤中，温度为-20℃至5℃；具体为4℃；时间为10-14h；具体为12h；
所述提取剂b为由甲醇和甲酸组成的混合液；所述甲醇和甲酸的体积比为7-9：1；具体为9:1；所述提取剂b与所述上清液的体积比为：0.5-2；具体为1:2；所述上清液的具体用量为2ml；
所述离心步骤中，转速为2500-4500rpm；具体为3900rpm；时间为18-22min；具体为20min；
所述过滤步骤中，滤膜孔径为0.22μm。


5.根据权利要求1或4所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，液相色谱检测的条件如下：
色谱柱类型：ACQUITYUPLCCSHC18；
色谱柱参数：2.1mm×100mmi.d.,1.7μm；
流动相A：由体积比为95:5的由乙腈和甲酸组成的混合液；
流动相B：由体积比为95:5的由水和甲酸组成的混合液；
梯度洗脱程序为：所述流动相A初始体积比例为2.5％，流动相A在5min内从2.5％到10％，然后在15min内从10％升到25％，保持5min，然后在5min内从25％变为2.5％；
流速：0.15ml/min；
柱温：25℃；
自动进样器温度：20℃；
进样体积：1μl。


6.根据权利要求1、4或5所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，所述质谱检测的条件如下：
质谱为正离子模式；
离子源：ESI源；
毛细管电压：2.0kV；
离子源温度：100℃；
脱溶剂气温度：300℃；
脱溶剂气流速：800L/h；
锥孔气流：50L/h：
质谱采集模式：FastDDA模式；
分析模式：分辨率模式；
母离子采集范围：900m/z-1000m/z；
子离子采集范围：50m/z-1000m/z；
碰撞能量范围为6V-80V；
光谱条件：二极管阵列检测器波长范围为190nm-800nm。


7.根据权利要求1-6任一所述的方法，其特征在于：所述步骤2)中，解析所得花青素的种类包括飞燕草素-3-(顺式-对香豆酸酰氧基)-芸香糖苷-5-葡萄糖苷、矮牵牛素-3-(咖啡酸酰氧基)-芸香糖苷-5-葡萄糖苷、飞燕草素-3-(反式-对香豆酸酰氧基)-芸香糖苷-5-葡萄糖苷、飞燕草素-3-(阿魏酸酰氧基)-芸香糖苷-5-葡萄糖苷、矮牵牛素-3-(顺式-对香豆酸酰氧基)-芸香糖苷-5-葡萄糖苷、矮牵牛素-3-(反式-对香豆酸酰氧基)-芸香糖苷-5-葡萄糖苷、矮牵牛素-3-(阿魏酸酰氧基)-芸香糖苷-5-葡萄糖苷、锦葵素-3-(顺式-对香豆酸酰氧基)-芸香糖苷-5-葡萄糖苷、锦葵素-3-(反式-对香豆酸酰...

【专利技术属性】
技术研发人员：王海敬，崔霞，邱正坤，周震，
申请(专利权)人：中国农业科学院蔬菜花卉研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11