细胞营养液及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种促进白发转黑的细胞营养液的制备方法，包括如下步骤：步骤一：成纤维细胞的原代分离；步骤二：成纤维细胞的扩大培养；步骤三：成纤维细胞的诱导培养；步骤四：收集细胞营养液；该促进白发转黑的细胞营养液的制备方法，克服了现有白发转黑药物存在的缺陷，所制备的细胞营养液优点在于：人成纤维细胞经过低剂量的UVB照射可以明显的增加其增殖、迁移、α‑MSH等因子的分泌，增强其培养基白发转黑的作用。采用脂肪干细胞条件培养液培养人成纤维细胞可以模拟后者在体内环境下的生存代谢过程，促进人成纤维细胞分泌更多利于毛囊健康的细胞因子；而且取材广泛，便于大范围进行临床推广。

【技术实现步骤摘要】
细胞营养液及其制备方法
本专利技术属于营养液制备
，具体涉及一种促进白发转黑的细胞营养液及其制备方法。
技术介绍
白发是较为常见的一种毛发病,从青少年到老年皆可发生,通常呈散在性生长,严重者甚至满头全白。影响个人形象以及社交活动，给患者造成很大的心理压力。近年来，随着社会竞争增加以及环境逐渐恶化，白发发生比例上升，并且明显年轻化。白发的发生多与遗传、不良生活习惯、情绪不稳定、环境污染等多种因素导致的毛囊黑素细胞的黑色素生成与色素沉着障碍有关。现代医学认为白发的主要病变机制之一就是毛囊黑素细胞增殖受到抑制，细胞内的酪氨酸酶活性降低，导致黑色素合成减少所致。西医目前对本病尚无特效疗法,中医方剂虽然较多，但没有从毛囊黑素细胞的增殖、色素生成以及毛囊健康的角度去解决问题，所以效果并不显著。目前乌须发的药物主要有三类，包括化学药物、中药和生物制剂。化学药物的乌须发作用机制主要包括物理沉积吸附、扩散和沉着，在头发上进行化学氧化反应将白发染黑，存在一定的毒性。中药可分为内服中药和外用中药，外用中药制剂研究较少，目前还是以传统汤剂为主，应用时不方本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.细胞营养液，其特征在于，所述细胞营养液以成纤维细胞为原料制备而成；所述细胞营养液的制备过程具体包括：/n1）成纤维细胞的原代分离：取新生儿包皮组织，置于磷酸盐缓冲液中漂洗、浸泡后，去除真皮下附着的结缔组织和毛细血管，然后依次用0.2%中性酶溶液、0.25%的胰蛋白酶消化处理后,加入含10%胎牛血清的完全培养基终止消化；离心,漂洗，重悬后，弃掉上清液，获得原代成纤维细胞；/n2）成纤维细胞的扩大培养：将所述原代成纤维细胞计数后按1×10

【技术特征摘要】
1.细胞营养液，其特征在于，所述细胞营养液以成纤维细胞为原料制备而成；所述细胞营养液的制备过程具体包括：
1）成纤维细胞的原代分离：取新生儿包皮组织，置于磷酸盐缓冲液中漂洗、浸泡后，去除真皮下附着的结缔组织和毛细血管，然后依次用0.2%中性酶溶液、0.25%的胰蛋白酶消化处理后,加入含10%胎牛血清的完全培养基终止消化；离心,漂洗，重悬后，弃掉上清液，获得原代成纤维细胞；
2）成纤维细胞的扩大培养：将所述原代成纤维细胞计数后按1×105/cm2密度接种细胞至培养瓶中,置入37℃、5%CO2的培养箱中培养5-7天，获得所述成纤维细胞；将所述成纤维细胞使用磷酸盐缓冲液漂洗一次，0.25%胰酶消化后，按照1:3-4进行传代培养；以后每48-72h传代一次；
3）成纤维细胞的诱导培养：将步骤2）中的20代以内的成纤维细胞，以接种于6孔板中，培养12-18h后，弃去培养液，用磷酸盐缓冲液清洗后，使用UVB照射和/或脂肪干细胞条件培养液处理所述成纤维细胞；
4）收集细胞营养液：将步骤3）处理后的成纤维细胞继续培养48-72h后，收集上清液，获得所述细胞营养液。


2.根据权利要求1所述的细胞营养液，其特征在于，步骤3）中成纤维细胞的诱导采用UVB照射，UVB照射过程为每孔使用2ml磷酸盐缓冲液清洗一次，然后再加入1ml磷酸盐缓冲液，用UVB10-100mJ/cm2照射1-4分钟，后弃去磷酸盐缓冲液。


3.根据权利要求1所述的细胞营养液，其特征在于，步骤3）中成纤维细胞的诱导过程采用脂肪干细胞条件培养液进行处理，脂肪干细胞条件培养液处理过程为用30%-70%的脂肪干细胞营养液和70%-30%的新鲜培养液混合后，给成纤维细胞进行换液，然后继续培养；所述脂肪干细胞营养液的准备过程为：将原代2-7代脂肪干细胞按1-3×105个细胞/瓶接种于75cm2培养瓶中，加12-15ml培养液，正常培养三天后收集培养液，用于成纤维细胞的诱导。


4.根据权利要求1所述的细胞营养液，其特征在于，步骤3）中成纤维细胞的诱导采用UVB照射和脂肪干细胞条件培养液同时处理成纤维细胞。


5.细胞营养液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
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【专利技术属性】
技术研发人员：王哲，明磊国，王清霞，李阿峰，董玲娟，
申请(专利权)人：东莞自然衡健康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44