真皮成纤维细胞在治疗黑色素瘤中的应用制造技术

本发明专利技术提供一种真皮成纤维细胞在治疗黑色素瘤中的应用，属于生物医学技术领域。本发明专利技术通过研究发现，在体外，高水平表达激活转录因子3的真皮成纤维细胞能抑制黑素瘤细胞的增殖和迁移，并伴随着不同细胞因子(包括IL‑6)的下调。在体内，具有高激活转录因子3表达的真皮成纤维细胞降低了肿瘤的形成。向黑色素瘤细胞中添加重组IL‑6可以逆转那些体外和体内的作用，这表明真皮成纤维细胞的激活转录因子3表达可通过IL‑6/STAT3途径调节黑色素瘤的进程，具有良好的实际应用之价值。

Application of dermal fibroblasts in the treatment of melanoma

【技术实现步骤摘要】
真皮成纤维细胞在治疗黑色素瘤中的应用
本专利技术属于生物医学
，具体涉及真皮成纤维细胞在治疗黑色素瘤中的应用。
技术介绍
本专利技术
技术介绍
中公开的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。人皮肤黑色素瘤起源于黑色素细胞增殖失调，是皮肤中最具侵袭性和致命性的肿瘤之一，占皮肤癌相关死亡的80％以上。尽管最近在黑色素瘤的治疗方面取得了一定进展，包括使用免疫检查点抑制剂，但在针对转移性黑素瘤的治疗方案的选择上仍然是捉襟见肘。被激活的BRAF突变被认为是导致黑色素瘤发生的一个主要因素。然而大约80％的良性黑素细胞痣含有BRAF激活突变，但只有一小部分会发展为恶性黑色素瘤。因此，从痣向黑色素瘤恶性转化的潜在机制尚不清晰。近期研究表明，基质细胞的变化在肿瘤的发生中起着至关重要的作用。肿瘤微环境的主要成分是癌症中活化的成纤维细胞，称为癌相关成纤维细胞(CAFs)。大量研究表明，CAFs分泌大量促进肿瘤细胞增殖和迁移的细胞因子和生长因子的研究表明，衰老的CAF可以促进黑色素瘤的发生和发展，这表明肿瘤微环境的改变可能在黑色素瘤的发生和发展中起重要作用。因此，将CAF作为目标可能为临床治疗黑色素瘤提供潜在的新疗法。转录活化因子3(ATF3)是细胞应激反应中关键的转录因子，在不同组织中具有不同的表达水平和功能。目前发现ATF3可以取决于肿瘤的类型而成为癌基因或抑癌基因。例如，有学者发现在食管鳞状细胞癌(ESCC)病变中ATF3比例下调，而在体外和体内研究中，ATF3过表达可通过调节MDM2的表达导致ESCC细胞的增殖和侵袭性能下降。ATF3在人真皮中也有表达，但是专利技术人发现，尚无其在人皮肤成纤维细胞(Humandermalfibroblasts,HDFs)或黑色素瘤相关成纤维细胞中功能的报道。
技术实现思路
针对现有技术中的不足，本专利技术提供一种真皮成纤维细胞在治疗黑色素瘤中的应用，本专利技术通过研究发现，在体外，高水平表达ATF3的真皮成纤维细胞能抑制黑素瘤细胞的增殖和迁移，并伴随着不同细胞因子(包括IL-6)的下调。在体内，具有高ATF3表达的真皮成纤维细胞降低了肿瘤的形成。向黑色素瘤细胞中添加重组IL-6可以逆转那些体外和体内的作用，这表明真皮成纤维细胞的ATF3表达可通过IL-6/STAT3途径调节黑色素瘤的进程，基于上述研究，从而完成本专利技术。为实现上述技术目的，本专利技术采用的技术方案如下：本专利技术的第一个方面，提供一种真皮成纤维细胞在制备治疗黑色素瘤产品中的应用。其中，所述真皮成纤维细胞优选为激活转录因子3(ATF3)高表达的真皮成纤维细胞。根据本专利技术，“治疗”的概念表示任一适用于治疗黑色素瘤相关疾病的措施，或者对于这种表现的疾病或所表现出来的症状进行预防性治疗，或者避免这种疾病的复发，例如在结束了治疗时间段之后的复发或对已经发作的疾病的症状进行治疗，或者预先介入性的防止或抑制或减少该类疾病或症状的发生。具体的，所述治疗黑色素瘤至少表现在具有如下任意一种或多种用途：1)抑制黑色素瘤细胞的增殖；2)抑制黑色素瘤细胞的迁移；3)抑制黑色素瘤的形成和生长；4)细胞因子下调表达。其中，所述用途3)中，抑制黑色素瘤的形成和生长具体表现为降低黑色素瘤形成数量和/或平均重量。所述用途4)中，细胞因子包括但不限于IL-6和IL-8，特别是IL-6。上述产品可以为药物。本专利技术的第二个方面，提供一种治疗黑色素瘤的药物组合物，所述药物组合物由真皮成纤维细胞与至少一种其它药物活性成分和/或至少一种其它非药物活性成分构成。在本专利技术的意义上，本专利技术所述的药物组合物表示一种物质，其所含有的真皮成纤维细胞对黑色素瘤具有明显治疗作用。其中，所述真皮成纤维细胞优选为激活转录因子3(ATF3)高表达的真皮成纤维细胞。本专利技术的第三个方面，提供诱导和/或促进真皮成纤维细胞高表达ATF3的物质在制备治疗黑色素瘤产品中的应用。其中，所述物质包括但不限于环孢菌素A和苯乙双胍。本专利技术的第四个方面，提供一种体外抑制黑色素瘤细胞增殖和/或迁移的方法，所述方法包括：将高表达激活转录因子3的真皮成纤维细胞与黑色素瘤共培养。其中，所述真皮成纤维细胞为人真皮成纤维细胞；为促使真皮成纤维细胞高表达甚至过表达激活转录因子3，可向共培养体系中添加诱导和/或促进真皮成纤维细胞高表达ATF3的物质，如环孢菌素A或苯乙双胍。以上一个或多个技术方案的有益技术效果：首次报道了真皮成纤维细胞在治疗黑色素瘤中的应用。具体的，研究发现，在体外，高水平表达ATF3的真皮成纤维细胞能抑制黑素瘤细胞的增殖和迁移，并伴随着不同细胞因子(包括IL-6)的下调。在体内，具有高ATF3表达的真皮成纤维细胞降低了肿瘤的形成。向黑色素瘤细胞中添加重组IL-6可以逆转那些体外和体内的作用，这表明真皮成纤维细胞的ATF3表达可通过IL-6/STAT3途径调节黑色素瘤的进程。上述技术方案实际提供了一种潜在新的黑素瘤治疗方法，因此具有良好的实际应用之价值。附图说明构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。图1为本专利技术实施例中ATF3在人黑色素瘤基质细胞中的低表达。其中，A、临床黑色素瘤组织中S100和ATF3的免疫组化染色。图中箭头表示黑色素瘤细胞和基质细胞。B、黑色素瘤标本的中ATF3和阴性对照(NC)的RNAscope原位杂交染色。箭头表示基质细胞。C、正常皮肤、黑色素细胞痣和黑色素瘤组织中ATF3和vimentin的双重免疫荧光染色。箭头表示波形蛋白和ATF3染色阳性的基质细胞；箭头表示波形蛋白阳性和ATF3染色阴性的基质细胞。D、对15例正常人皮肤、15例黑色素细胞痣和17例黑色素瘤组织进行ATF3蛋白表达测定的相关分值。*p<0.05，ns：不显著。所有标尺代表20μm。图2为本专利技术实施例中在共培养实验中，ATF3过表达的人真皮成纤维细胞(HDFs)抑制黑色素瘤细胞的增殖和迁移。其中，A、ATF3mRNA水平的qRT-PCR分析；B、以GAPDH为加载对照，对三株感染ATF3表达(ATF3-OE)或控制新霉素(NEO)逆转录病毒的HDF进行的ATF3蛋白印迹分析。C-D、与3株高表达ATF3(ATF3-OE)或NEO的HDF菌株共培养指定天数后Mel-JuSo(C)和UACC62(D)黑色素瘤细胞的数量。E、与ATF3-OE或控制NEO-HDFs共培养24小时后迁移的Mel-JuSo和UACC62细胞的图像(左面板)和量化(图表)。标尺代表100μm。图3为本专利技术实施例中过表达ATF3的HDFs条件培养基(CM)抑制黑色素瘤细胞生长和迁移；所有条件下均采用ATF3-OE或对照NEOHDF提取的条件培养基。其中，A-B、在指定时本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.真皮成纤维细胞在制备治疗黑色素瘤产品中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.真皮成纤维细胞在制备治疗黑色素瘤产品中的应用。


2.如权利要求1所述应用，其特征在于，所述真皮成纤维细胞为激活转录因子3高表达的真皮成纤维细胞。


3.如权利要求1所述应用，其特征在于，所述治疗黑色素瘤至少表现在具有如下任意一种或多种用途：
1)抑制黑色素瘤细胞的增殖；
2)抑制黑色素瘤细胞的迁移；
3)抑制黑色素瘤的形成和生长；
4)细胞因子下调表达。


4.如权利要求3所述应用，其特征在于，用途3)中，抑制黑色素瘤的形成和生长具体表现为降低黑色素瘤形成数量和/或平均重量；或，用途4)中，细胞因子包括但IL-6和IL-8，优选为IL-6。


5.真皮成纤维细胞在制备抑制黑色素瘤细胞增殖、迁移和/或黑色素瘤的形成和生长的产品中的应用；
优选的，所述真皮成纤维细胞为激活转录因子3高表达的真皮成纤维细胞。

【专利技术属性】
技术研发人员：吴训伟，俎廷建，刘畅，白福响，冷雪，弭军，
申请(专利权)人：山东大学，
类型：发明
国别省市：山东;37