一种菊花脱毒苗的培养方法技术

本发明专利技术公开了一种菊花脱毒苗的培养方法。所述方法包括如下步骤：(1)将感染病毒的小菊进行预脱毒处理，得到预脱毒小菊；(2)将所述预脱毒小菊的茎段依次在不定芽诱导培养基和增殖培养基中进行培养，得到无菌苗；(3)将所述无菌苗进行热处理，得到热处理后无菌苗；(4)将从所述热处理后无菌苗上剥离的茎尖在CHR‑1培养基中进行培养，直至得到长为0.8‑1.0mm的茎尖；(5)将所述长为0.8‑1.0mm的茎尖在茎尖分化培养基中进行培养，得到小菊植株。通过实验证明：按照本发明专利技术方法获得的小菊植株的脱毒率可达92.5％，该方法在培育菊花脱毒苗中具有良好的应用的前景。

【技术实现步骤摘要】
一种菊花脱毒苗的培养方法
本专利技术属于植物培养
，具体涉及一种菊花脱毒苗的培养方法。
技术介绍
菊花(ChrysanthemumMorifoliumRamat)是菊科(Compositae)菊属(ChrysanthemumL.)的多年生草本植物，具有很高的经济价值和观赏价值，不仅能供观赏、布置园林、美化环境，还可食用和药用。近年来，国内外市场对菊花的需求量越来越大，其经济价值越来越高。目前，菊花生产上存在的主要问题是病毒造成的品种退化，使菊花产量降低、植株矮化，大大降低了经济价值。因此，菊花脱毒苗的培育成为提高菊花经济价值的关键。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种小菊脱毒苗的培养方法。本专利技术提供的小菊脱毒苗的培养方法包括如下步骤：(1)将感染病毒的小菊进行预脱毒处理，得到预脱毒小菊；(2)将所述预脱毒小菊的茎段依次在不定芽诱导培养基和增殖培养基中进行培养，得到无菌苗；(3)将所述无菌苗进行热处理，得到热处理后无菌苗；(4)将从所述热处理后无菌苗上剥离的茎尖在CHR-1培养基中进行培养，直至得到长为0.8-1.0mm的茎尖；所述CHR-1培养基包括NaH2PO4·H2O、KNO3、(NH4)2SO4、MgSO4·7H2O、CaCl2·2H2O、盐酸硫胺素、6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸和活性炭；(5)将所述长为0.8-1.0mm的茎尖在茎尖分化培养基中进行培养，得到小菊植株；所述茎尖分化培养基包括6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸和活性炭。上述方法中，所述步骤(1)中，所述预脱毒处理为用病毒唑溶液注射所述感染病毒的小菊。进一步的，所述病毒唑溶液的溶剂为水，病毒唑浓度可为8-10mg/L或8mg/L或10mg/L，具体为10mg/L。所述注射剂量可为3-5mL或3mL或5mL，具体为5mL。更进一步的，所述注射位置为距离地面2cm处的植株茎秆。上述方法中，所述步骤(1)和所述步骤(2)之间还包括培养所述预脱毒小菊的步骤。所述培养条件可为在空气湿度为50-75％、环境温度为15-30℃、光照时间为14h/天、光照强度为5-10万Lux条件下培养30天。上述方法中，所述步骤(2)包括如下步骤：(2-1)选取所述预脱毒小菊的当年生嫩枝(去除叶片)，将其茎段切成带4-5个芽的小段，得到带4-5个芽的茎段；(2-2)将所述带4-5个芽的茎段消毒灭菌，得到消毒灭菌后的茎段；(2-3)将所述消毒灭菌后的茎段切成长为2-3cm且带有1-3个腋芽的茎段，并接种于不定芽诱导培养基中进行培养；所述不定芽培养基包括6-苄氨基腺嘌呤；(2-4)待所述带1-3个芽的茎段的不定芽长至5-6cm时，再将茎段切成2-3cm且带有1-3个叶芽的茎段，并接种于增殖培养基中进行培养；所述增殖培养基包括6-苄氨基腺嘌呤。所述步骤(2-2)中，所述消毒灭菌的方法包括如下步骤：(2-2-1)将所述带4-5个芽的茎段在洗洁精水中浸泡，冲洗；(2-2-2)将(2-2-1)得到的茎段在多菌灵中浸泡，冲洗；(2-2-3)将(2-2-2)得到的茎段在乙醇溶液中浸泡，冲洗；(2-2-4)将(2-2-3)得到的茎段在次氯酸钠溶液中浸泡，冲洗，得到消毒灭菌后的茎段。进一步的，所述步骤(2-2-1)中，所述浸泡的时间可为10min；所述冲洗的时间可为1min。所述步骤(2-2-2)中，所述多菌灵溶液可为多菌灵1000倍液；所述浸泡的时间可为30min；所述冲洗的时间可为1min。所述步骤(2-2-3)中，所述乙醇溶液可为75％(体积分数)的乙醇溶液；所述浸泡的时间可为30s；所述冲洗的次数可为2次。所述步骤(2-2-4)中，所述次氯酸钠溶液可为有效氯为5％的次氯酸钠溶液；所述浸泡的时间可为8-10min；所述冲洗的次数可为5-6次，每次冲洗的时间可为1min。所述步骤(2-3)中，所述6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)在所述不定芽诱导培养基中的浓度可为0.1-0.5mg/L或0.1-0.2mg/L或0.2-0.5mg/L或0.1mg/L或0.2mg/L或0.5mg/L，具体为0.2mg/L。所述培养条件如下：培养温度为22±2℃，光照强度为2000-3000lx，光照时间为12-14h/天。进一步的，所述不定芽诱导培养基由MS(3/4大量元素)培养基、6-BA、蔗糖和琼脂组成。所述6-BA在所述不定芽诱导培养基中的浓度为0.2mg/L，所述蔗糖在所述不定芽诱导培养基中的浓度为20g/L，所述琼脂在所述不定芽诱导培养基中的浓度为5g/L。所述MS(3/4大量元素)培养基由溶剂和溶质组成，溶剂为水，溶质及其浓度如表2所示。更进一步的，所述不定芽诱导培养基的pH为6.0。所述步骤(2-4)中，所述6-苄氨基腺嘌呤在所述增殖培养基中的浓度可为0.5-1.0mg/L或0.5mg/L或1.0mg/L，具体为0.5mg/L。所述培养条件如下：培养温度为22±2℃，光照强度为2000-3000lx，光照时间为12-14h/天。进一步的，所述增殖培养基由MS培养基、6-BA、蔗糖和琼脂组成。其中，所述6-BA在所述增殖培养基中的浓度为0.5mg/L，所述蔗糖在所述增殖培养基中的浓度为30g/L，所述琼脂在所述增殖培养基中的浓度为5g/L。所述MS培养基由溶剂和溶质组成，溶剂为水，溶质及其浓度如表1所示。更进一步的，所述增殖培养基的pH为6.0。上述方法中，所述步骤(3)中，所述热处理包括三个阶段；第一阶段处理1-5天，处理条件如下：白天28℃、晚上25℃，湿度为30-50％；第二阶段处理6-12天，处理条件如下：白天33℃、晚上28℃，湿度为30-50％；第三阶段处理13-35天，处理条件如下：白天39℃、晚上33℃，湿度为30-50％。所述白天为北京时间8:00-20:00；晚上为北京时间20:00-次日8:00。上述方法中，所述步骤(4)中，所述茎尖剥离的方法包括如下步骤：将所述热处理后无菌苗割下菊苗顶端1-2cm，然后迅速接种于茎尖固定培养基(茎尖固定培养基由MS培养基和琼脂组成。其中，琼脂在茎尖固定培养基中的浓度为5g/L)中，在所述茎尖固定培养基中剥离茎尖，以防在茎尖剥离过程中由于脱水而影响成活率。所述茎尖的具体剥离方法如下：在40倍解剖镜下，一手用镊子轻轻将材料固定于视野中，另一手用手术刀(11号手术刀)将菊花顶芽外面的幼小叶片小心依次剥离，逐层剥掉菊花多余叶片，只保留生长点及生长点一侧的一个叶原基。从所述热处理后无菌苗上剥离的茎尖长为0.1-0.3mm。所述NaH2PO4·H2O在所述CHR-1培养基中的浓度为112.5mg/L。所述KNO3在所述CHR-1培养基中的浓度为2250mg/L。所述(NH4)2SO4在所述CHR-1培养基中本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种小菊脱毒苗的培养方法，包括如下步骤：/n(1)将感染病毒的小菊进行预脱毒处理，得到预脱毒小菊；/n(2)将所述预脱毒小菊的茎段依次在不定芽诱导培养基和增殖培养基中进行培养，得到无菌苗；/n(3)将所述无菌苗进行热处理，得到热处理后无菌苗；/n(4)将从所述热处理后无菌苗上剥离的茎尖在CHR-1培养基中进行培养，直至得到长为0.8-1.0mm的茎尖；/n所述CHR-1培养基包括NaH

【技术特征摘要】
1.一种小菊脱毒苗的培养方法，包括如下步骤：
(1)将感染病毒的小菊进行预脱毒处理，得到预脱毒小菊；
(2)将所述预脱毒小菊的茎段依次在不定芽诱导培养基和增殖培养基中进行培养，得到无菌苗；
(3)将所述无菌苗进行热处理，得到热处理后无菌苗；
(4)将从所述热处理后无菌苗上剥离的茎尖在CHR-1培养基中进行培养，直至得到长为0.8-1.0mm的茎尖；
所述CHR-1培养基包括NaH2PO4·H2O、KNO3、(NH4)2SO4、MgSO4·7H2O、CaCl2·2H2O、盐酸硫胺素、6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸和活性炭；
(5)将所述长为0.8-1.0mm的茎尖在茎尖分化培养基中进行培养，得到小菊植株；
所述茎尖分化培养基包括6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸和活性炭。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，所述预脱毒处理为用病毒唑溶液注射所述感染病毒的小菊；
或，所述病毒唑溶液浓度为8-10mg/L；
或，所述注射剂量为3-5mL。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)包括如下步骤：
(2-1)选取所述预脱毒小菊的当年生嫩枝，并将其茎段切成带4-5个芽的小段，得到带4-5个芽的茎段；
(2-2)将所述带4-5个芽的茎段消毒灭菌，得到消毒灭菌后的茎段；
(2-3)将所述消毒灭菌后的茎段切成长为2-3cm且带有1-3个腋芽的茎段，并接种于不定芽诱导培养基中进行培养；
所述不定芽培养基包括6-苄氨基腺嘌呤；
(2-4)待所述带1-3个芽的茎段的不定芽长至5-6cm时，再将茎段切成2-3cm且带有1-3个叶芽的茎段，并接种于增殖培养基中进行培养；
所述增殖培养基包括6-苄氨基腺嘌呤。


4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述步骤(2-2)中的消毒灭菌的方法包括如下步骤：
(2-2-1)将所述带4-5个芽的茎段在洗洁精水中浸泡，冲洗；
(2-2-2)将(2-2-1)得到的茎段在多菌灵中浸泡，冲洗；
(2-2-3)将(2-2-2)得到的茎段在乙醇溶液中浸泡，冲洗；
(2-2-4)将(2-2-3)得到的茎段在次氯酸钠溶液中浸泡，冲洗，得到消毒灭菌后的茎段；
或，所述步骤(2-3)中的培养条件如下：培养温度为22±2℃，光照强度为2000-3000lx，光照时间为12-14h/天；
或，所述步骤(2-4)中的培养条件如下：培养温度为22±2℃，光照强度为2000-3000lx，光照时间为12-14h/天；
或，所述6-苄氨基腺嘌呤在所述不定芽诱导培养基中的浓度为0.1-0.5mg/L；
或，所述6-苄氨基腺嘌呤在所述增殖培养基中的浓度为0.5-1.0mg/L。


5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，所述热处理包括三个阶段；
第一阶段处理1-5天，处理条件如下：白天28℃、晚上25℃，湿度为30-50％...

【专利技术属性】
技术研发人员：左李娜，刘丹，王容，吴海峰，陈天烺，王俊青，赵鹏霞，陈炜，赫文韬，
申请(专利权)人：浙江海丰花卉有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33