一种S100B蛋白的检测试剂盒及其使用方法技术

本发明专利技术适用于生物技术领域，具体涉及一种S100B蛋白的检测试剂盒及其使用方法，所述试剂盒包括：包被有抗S100B单克隆抗体的酶标板、辣根过氧化物酶标记的检测用抗S100多克隆抗体溶液、标准品、标准品稀释液、样本稀释液、浓缩洗涤液、显色液A、显色液B、终止液以及检测抗体稀释液。本发明专利技术试剂盒灵敏度较高，试剂盒的最低检测限低至1pg/mL；均一性良好，稳定性高，批内变异系数小于10％，批间变异系数都小于5％；特异性好，试剂盒与血清中易干扰测试的血清总胆红素TBIL、甘油三酯TG和总胆固醇TC的交叉反应很低，不会对S100B的测量造成干扰；临床试用效果良好，且单次检测成本低于市场上同类型试剂盒。

【技术实现步骤摘要】
一种S100B蛋白的检测试剂盒及其使用方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种S100B蛋白的检测试剂盒及其使用方法。
技术介绍
S100B蛋白是一种存在于脑内胶质细胞中的特异性蛋白，具有广泛的生物学活性，生理浓度下发挥多种重要的生理学功能，包括影响神经胶质细胞的生长、繁殖和分化，维持钙稳态，并可能对学习记忆等发挥一定的作用等。当脑损伤造成神经胶质细胞膜受损时，S100B蛋白释放至细胞外间隙，并通过受损血脑屏障进入脑脊液和血液，其血清中的含量与一些神经系统等疾病的病情及预后关系密切。目前，颅脑损伤和脑血管性疾病的诊断主要依靠影像学(CT和MRI)检查，但这些现代的影像学技术尚不适用于某些生命体征不稳定或正在使用呼吸机的危重患者，在某些特殊情况下，往往无法及时进行上述检查。因此，检测S100B蛋白水平可以为颅脑损伤和脑血管疾病诊断及预后判断提供一种新的手段，而准确、方便且快捷的检测血清中S100B蛋白的水平尤为重要。目前对于血清S100B的检测方法包括：放射免疫分析法(RIA)、免疫放射测定法(IRMA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、电化学发光法(ECLIA)等。因为RIA与IRMA由于具有放射性，核素半衰期和试剂盒稳定期短，操作繁琐，使之在临床中应用受到限制。目前临床上主要采用的是ELISA和ECLIA法。电化学发光法(ECLIA)是电化学发光(ECL)和免疫测定相结合的产物。该方法是利用链霉亲和素包被的磁珠和生物素化的抗体与S100B抗体连接为一体，形成双抗体夹心，最后通过与抗体偶联的发光剂和电子供体TPA通过氧化还原反应在电极表面周而复始地进行，光强度与发光剂的浓度呈线性关系从而测出待测抗原的含量。电化学发光法的优点包括：标记物可再循环利用，发光时间更长、强度更高、易于测定，其敏感度高，可达pg/mL水平，且反应时间短、试剂稳定性好，但是临床应用时需基于配套的大型仪器来进行检测，该仪器以及电极的更换价格较贵，导致检测费用较高，限制了其在基层医院的开展。酶联免疫吸附试验(ELISA)是以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。ELISA法的优点是：线性范围广，灵敏度高，重复性好，操作方便，实验可靠，比较适合用于临床对于患者疾病的检测以及预后的判断，是目前主流的检测方法之一，但是目前临床上广泛使用的双抗体夹心ELISA检测法，测定的敏感性都比较低，这主要与所用标准品多为S100B/S100A蛋白二聚体有关，即试剂盒所测定的实际上是S100B和S100A两种蛋白的含量，同时抗体的特异性与亲和力不理想也是导致灵敏度不高的部分原因。综上，现有的对于血清S100B的检测方法存在检测费用较高、检测灵敏度更低，特异性和稳定性差的问题。
技术实现思路
本专利技术实施例提供一种S100B蛋白的检测试剂盒，旨在解决现有的对于血清S100B的检测方法存在检测费用较高、检测灵敏度更低，特异性和稳定性差的问题。本专利技术实施例提供的一种S100B蛋白的检测试剂盒，包括：包被有抗S100B单克隆抗体的酶标板、辣根过氧化物酶标记的检测用抗S100多克隆抗体溶液、标准品、标准品稀释液、样本稀释液、浓缩洗涤液、显色液A、显色液B、终止液以及检测抗体稀释液。本专利技术实施例还提供一种上述S100B蛋白的检测试剂盒的使用方法，包括如下步骤：(1)配制如下溶液：用检测抗体稀释液稀释辣根过氧化物酶标记的检测用抗S100多克隆抗体溶液，使辣根过氧化物酶标记的检测用抗S100多克隆抗体与检测抗体稀释液的体积比为1:5000，得到酶结合物；用标准品稀释液溶解标准品，得到多个浓度梯度变化的标准品溶液；将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水按照1:20的体积比稀释得到洗涤液；(2)绘制标准曲线：在包被有抗S100B单克隆抗体的酶标板的相应孔中分别加入所述多个浓度梯度变化的标准品溶液各50μL，轻轻振荡混匀；用封板膜封板后置37℃温育30分钟后，用所述洗涤液充分洗涤5遍，扣干；每孔加入辣根过氧化物酶标记的检测用抗S100多克隆抗体溶液100μL，轻轻振荡混匀；用封板膜封板后置37℃温育30分钟后，用所述洗涤液充分洗涤5遍，扣干；每孔加入显色液A、B液各50μL，轻轻振荡混匀，37℃避光显色15分钟；每孔加终止液50μL，轻拍混匀，设定酶标仪波长于450nm处，用空白孔调零点后测定各孔光密度值；使用双对数log-log线性拟和方式进行数据处理，以各校准品的光密度值的对数为纵坐标(Y轴)，各校准品的浓度的对数为横坐标(X轴)作图，得到标准曲线；(3)待测样品检测在包被有抗S100B单克隆抗体的酶标板的相应孔中待测样品各50μL，轻轻振荡混匀；用封板膜封板后置37℃温育30分钟后，用所述洗涤液充分洗涤5遍，扣干；在所述孔中加入辣根过氧化物酶标记的检测用抗S100多克隆抗体溶液100μL，轻轻振荡混匀；用封板膜封板后置37℃温育30分钟后，用所述洗涤液充分洗涤5遍，扣干；在所述孔中加入显色液A、B液各50μL，轻轻振荡混匀，37℃避光显色15分钟；在所述孔中加终止液50μL，轻拍混匀，设定酶标仪波长于450nm处，用空白孔调零点后测定光密度值；将待测样本溶液的光密度值代入标准曲线，得到待测样本溶液中S100B的含量。本专利技术试剂盒灵敏度较高，试剂盒的最低检测限低至1pg/mL；均一性良好，稳定性高，批内变异系数小于10％，批间变异系数都小于5％；特异性好，试剂盒与血清中易干扰测试的血清总胆红素TBIL、甘油三酯TG和总胆固醇TC的交叉反应很低，不会对S100B的测量造成干扰；临床试用效果良好，且单次检测成本低于市场上同类型试剂盒。附图说明图1是本专利技术实施例提供的标准曲线示意图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。本专利技术实施例提供一种S100B蛋白的检测试剂盒，包括：包被有抗S100B单克隆抗体的酶标板、辣根过氧化物酶标记的检测用抗S100多克隆抗体溶液、标准品、标准品稀释液、样本稀释液、浓缩洗涤液、显色液A、显色液B、终止液以及检测抗体稀释液。在本专利技术实施例中，所述辣根过氧化物酶标记的检测用抗S100多克隆抗体溶液中辣根过氧化物酶标记的检测用抗S100多克隆抗体的浓度为2-3mg/mL，所述辣根过氧化物酶标记的检测用抗S100多克隆抗体溶液的溶剂为浓度为0.15mol/L、pH＝7.4的磷酸缓冲盐溶液。在本专利技术实施例中，所述样本稀释液包括以下物质：质量分数为0.2％的明胶，质量分数为0.2％的酪蛋白，150mmol/L的NaCl，质量分数为0.01％的Tween-20，质量分数为5％的蔗糖，质量分数为0.5本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种S100B蛋白的检测试剂盒，其特征在于，包括：包被有抗S100B单克隆抗体的酶标板、辣根过氧化物酶标记的检测用抗S100多克隆抗体溶液、标准品、标准品稀释液、样本稀释液、浓缩洗涤液、显色液A、显色液B、终止液以及检测抗体稀释液。/n

【技术特征摘要】
1.一种S100B蛋白的检测试剂盒，其特征在于，包括：包被有抗S100B单克隆抗体的酶标板、辣根过氧化物酶标记的检测用抗S100多克隆抗体溶液、标准品、标准品稀释液、样本稀释液、浓缩洗涤液、显色液A、显色液B、终止液以及检测抗体稀释液。


2.如权利要求1所述的S100B蛋白的检测试剂盒，其特征在于，所述辣根过氧化物酶标记的检测用抗S100多克隆抗体溶液中辣根过氧化物酶标记的检测用抗S100多克隆抗体的浓度为2-3mg/mL，所述辣根过氧化物酶标记的检测用抗S100多克隆抗体溶液的溶剂为浓度为0.15mol/L、pH＝7.4的磷酸缓冲盐溶液。


3.如权利要求1所述的S100B蛋白的检测试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液包括以下物质：质量分数为0.2％的明胶，质量分数为0.2％的酪蛋白，150mmol/L的NaCl，质量分数为0.01％的Tween-20，质量分数为5％的蔗糖，质量分数为0.5/1万的溴钾酚紫，质量分数为0.1％的防腐剂，余量为浓度20mmol/L、pH＝6.0的PBS缓冲液。


4.如权利要求1所述的S100B蛋白的检测试剂盒，其特征在于，所述浓缩洗涤液中Na2HPO4·12H2O的浓度为116g/L，NaH2PO4·2H2O的浓度为11.84g/L，NaCl的浓度为180g/L，吐温20的浓度为5mL/L，防腐剂的浓度为1mL/L，溶剂为水。


5.如权利要求1所述的S100B蛋白的检测试剂盒，其特征在于，
所述显色液A的溶剂是水，溶质及其在所述显色液A中的浓度如下：柠檬酸7.28g/L，磷酸氢二钠23.75g/L，过氧化氢尿0.5g/L；
所述显色液B的溶剂是水，溶质及其在所述显色液B中的浓度如下：甲醇100mL/L，聚乙烯醇1g/L，Na2S2O31.5g/L，盐酸1mL/L，3,3',5,5'-四甲基联苯胺的质量百分数为0.03％，二甲基亚砜的质量百分含量为1％。


6.如权利要求1所述的S100B蛋白的检测试剂盒，其特征在于，所述终止液的溶剂是水，溶质及其在所述终止液中的浓度如下：硫酸200mL/1.8L，乙二胺四乙酸1.35g/1.8L。


7.如权利要求1所述的S100B蛋白的检测试剂盒，其特征在于，所述标准品稀释液的溶剂是20mM、pH7.4的PBS缓冲液，溶质及其在所述标准品稀释液中的浓度如下：质量百分含量1％的酪蛋白，质量百分含量8％的海藻糖，质量百分含量3％的甘露醇，1mmol/LEDTA，质量百分含量0.5％的甘氨酸，150mmol/LNaCl，质量百分含量0.1％的防腐剂Proclin-300。


8.如权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：艾冰花，赵京超，王立杰，常青侠，焉丽波，陈蒙蒙，
申请(专利权)人：艾维可生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37