一种使用高特异性和高灵敏性SPR芯片检测BNP的方法技术

本发明专利技术公开了一种使用高特异性和高灵敏性SPR芯片检测BNP的方法，属于BNP检测技术领域。它包括以下步骤：(1)制备特异性适体修饰的金纳米颗粒；(2)制备抗体功能化修饰的磁纳米颗粒；(3)制备适体修饰的SPR芯片；(4)SPR光学检测BNP。本发明专利技术使用灵敏的SPR技术检测极微量的目标物BNP，该方法利用抗体功能化修饰的磁纳米颗粒结合BNP，高特异适体修饰的金纳米颗粒进行高特异性筛选，起到双重选择的效果，同时通过级联缀合能形成大的复合物，从而连接在SPR芯片上，导致SPR角度的显著增大，能检测低至pg级的微量BNP；本发明专利技术同时结合特异性抗体和适体，改善了传统的抗原抗体法所出现的假阳性问题，检测时间短，操作方便。

【技术实现步骤摘要】
一种使用高特异性和高灵敏性SPR芯片检测BNP的方法
本专利技术涉及一种使用高特异性和高灵敏性SPR芯片检测BNP的方法，属于BNP检测

技术介绍
脑尿钠肽(BNP)是由心肌细胞分泌的由32个氨基酸组成的一种短肽，已作为标准的分子生物标志物在慢性心力衰竭(HF)的诊断和预后中提供重要生理病理信息。临床上以BNP100pg/ml作为临界值的隐形预测值达到90％，可以减少74％的临床不确定性；而BNP超过400pg/ml提示患者存在心力衰竭的可能性达到95％。由于BNP的含量低至pg级别和生物样本的复杂性，因此与其他心血管生物标志物相比，BNP的检测更具挑战性。另外，BNP具有20分钟的短的半衰期，这意味着需要高特异性的快速灵敏的对其进行检测。这可能也是迄今为止所报道的检测真实样本的BNP传感器数量有限的原因。目前已经开发了一些检测BNP的方法，包括试剂盒和荧光免疫测定等。试剂盒操作方便，但是在检测中容易出现假阳性的结果；荧光免疫法检测较为准确，但操作较为复杂，且灵敏度不高。因此限制了进一步的应用。表面等离子共振技术(SPR)是一本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种使用高特异性和高灵敏性SPR芯片检测BNP的方法，其特征在于，它包括以下步骤：/n(1)制备特异性适体修饰的金纳米颗粒：将BNP适体修饰在金纳米颗粒上；/n(2)制备抗体功能化修饰的磁纳米颗粒：将BNP抗体修饰在磁纳米颗粒上；/n(3)制备适体修饰的SPR芯片：将BNP适体修饰在整个SPR芯片的金片上；/n(4)SPR光学检测BNP：/na.向待测BNP溶液中加入过量的抗体功能化修饰的磁纳米颗粒，抗体功能化修饰的磁纳米颗粒通过BNP抗体与BNP溶液中的目标物BNP抗原完全结合；/nb.再向上述混合液中加入过量的特异性适体修饰的金纳米颗粒，特异性适体修饰的金纳米颗粒上的BNP适体进一步结...

【技术特征摘要】
1.一种使用高特异性和高灵敏性SPR芯片检测BNP的方法，其特征在于，它包括以下步骤：
(1)制备特异性适体修饰的金纳米颗粒：将BNP适体修饰在金纳米颗粒上；
(2)制备抗体功能化修饰的磁纳米颗粒：将BNP抗体修饰在磁纳米颗粒上；
(3)制备适体修饰的SPR芯片：将BNP适体修饰在整个SPR芯片的金片上；
(4)SPR光学检测BNP：
a.向待测BNP溶液中加入过量的抗体功能化修饰的磁纳米颗粒，抗体功能化修饰的磁纳米颗粒通过BNP抗体与BNP溶液中的目标物BNP抗原完全结合；
b.再向上述混合液中加入过量的特异性适体修饰的金纳米颗粒，特异性适体修饰的金纳米颗粒上的BNP适体进一步结合目标物BNP抗原的另一个位点，特异性适体修饰的金纳米颗粒、抗体功能化修饰的磁纳米颗粒与BNP抗原三者形成一个大的复合物；
c.通过外部磁场进行磁分离，去除混合液中未结合的特异性适体修饰的金纳米颗粒，剩余复合物重悬于等量的磷酸缓冲盐溶液PBS中；
d.将重悬后的混合液加入适体修饰的SPR芯片上进行特异性反应，反应时间10分钟，复合物中的金纳米颗粒上的BNP适体和SPR芯片上的互补链结合，将复合物链接到SPR芯片表面，之后用磷酸缓冲盐溶液PBS清洗，通过SPR仪器在SPR芯片上进行检测，得到检测结果。


2.根据权利要求1所述一种使用高特异性和高灵敏性SPR芯片检测BNP的方法，其特征在于，所述特异性适体修饰的金纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：
a.选取粒径为20nm左右的金纳米颗粒；
b.将质量浓度为0.05％的氯金酸溶液加入到装有回流冷凝装置的圆底烧瓶中，加热并快速搅拌，当氯金酸溶液沸腾20～30分钟后，一次性快速加入约3.5mL质量浓度为5％的柠檬酸三钠溶液，再持续加热150分钟，当溶液...

【专利技术属性】
技术研发人员：王沂，黄任强，董成，
申请(专利权)人：上海乐合生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31