一种利用不定芽诱导雪胆多倍体植株的方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种中药材的多倍体培养方法，具体涉及一种利用不定芽诱导雪胆多倍体植株的方法及其应用。具体过程包括，（1）不定芽的无菌培养；2）多倍体诱导；3）嵌合体分离培养；4）多倍体筛选；5）多倍体扩增和6）多倍体生根。本发明专利技术采用无菌组织培养的方式进行多倍体育种，能为雪胆多倍体种植短期内提供大量、稳定的雪胆多倍体种苗。本发明专利技术利用秋水仙素对雪胆无菌不定芽进行多倍体诱导，后通过形态学鉴定法和染色体压片法筛选并纯化培养获得多倍体雪胆种质，多倍体诱导率为26%。本发明专利技术诱导母本雪胆素含量为1.46%的种质产生的多倍体，经两年的种植比较（一般种植周期3～4年），较同期同母本的两倍体组培苗种植的雪胆素含量高0.2%，有效提高了药材的应用价值及药材市场价格。

【技术实现步骤摘要】
一种利用不定芽诱导雪胆多倍体植株的方法及其应用
本专利技术涉及一种中药材的多倍体培养方法，属于植物作物育种及中药材种植领域，特别涉及雪胆的多倍体培养方法及其应用。
技术介绍
雪胆为葫芦科雪胆属植物，多年生攀援草本，具膨大块茎，主要分布于亚洲亚热带至温带地区，生于海拔800-3500米的疏林下或灌丛中。整个雪胆属全国共有31种，云南具26种。1977版《中国药典》将曲莲（HemsleyaamabilsDiels）及同属数种植物的干燥块根收录入雪胆药材，《中华本草》将中华雪胆（H.chinensisCogn.exForb.etHemsl）曲莲（H.amabilsDiels）以及大籽雪胆（H.macrospermaC.Y.WuexC.Y.Wu.exC.L.Chen）三种雪胆属植物的干燥块根收录入雪胆药材，各地方药材标准均涉及本地所产的雪胆属下品种，而根据各文献的药理、化学成分、资源调查等研究资料显示，雪胆属下各品种的干燥块根均可作为雪胆药材使用。雪胆具清热解毒，利湿消肿，止痛止血的功效，主治咽喉肿痛、牙痛、目赤肿痛，胃痛，痢疾，肠炎，肝炎，尿路感染，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用不定芽诱导培养雪胆多倍体植株的方法，其特征在于，步骤包括：/n（1）不定芽的无菌培养：选择健壮无病虫害雪胆幼嫩茎段，经消毒后，接种于无菌的不定芽诱导培养基上，置于适宜环境下培养，所述不定芽诱导培养基为1/2MS＋NAA 0.1～0.5mg/L＋BA3.0～5.0mg/L；/n（2）多倍体诱导：将培养出的无菌不定芽剪成单芽，置于诱导液中，在适宜环境下进行多倍体的诱导，所述诱导液为含0.2%二甲基亚砜质量浓度为0.05～0.10%秋水仙素溶液；/n（3）嵌合体分离培养：将经诱导的嵌合体洗去残留诱导液后，置于分离培养基上，在适宜环境下培养，所述分离培养培养基为MS＋NAA 0.1～0.5...

【技术特征摘要】
1.一种利用不定芽诱导培养雪胆多倍体植株的方法，其特征在于，步骤包括：
（1）不定芽的无菌培养：选择健壮无病虫害雪胆幼嫩茎段，经消毒后，接种于无菌的不定芽诱导培养基上，置于适宜环境下培养，所述不定芽诱导培养基为1/2MS＋NAA0.1～0.5mg/L＋BA3.0～5.0mg/L；
（2）多倍体诱导：将培养出的无菌不定芽剪成单芽，置于诱导液中，在适宜环境下进行多倍体的诱导，所述诱导液为含0.2%二甲基亚砜质量浓度为0.05～0.10%秋水仙素溶液；
（3）嵌合体分离培养：将经诱导的嵌合体洗去残留诱导液后，置于分离培养基上，在适宜环境下培养，所述分离培养培养基为MS＋NAA0.1～0.5mg/L＋KT4.0～6.0mg/L＋BA2.0～4.0mg/L；
（4）多倍体筛选：嵌合体分离培养成带茎叶植株后，根据形态学鉴定法，以株为单位，选茎叶明显增粗增厚植株，取幼嫩叶，进行染色体鉴定；
（5）多倍体扩增：将筛选出的多倍体，剪成单芽，接种于增殖培养基，在适宜环境下培养，所述增殖培养基为MS＋NAA0.1～0.5mg/L＋KT2.0～4.0mg/L＋BA0.5～2.0mg/L；
（6）多倍体生根：将获得的多倍体苗，接种于生根培养基，在适宜环境下培养，所述生根培养基为1/2MS＋NAA0.5～2.0mg/L＋IBA0～2.0mg/L＋活性炭0.5～1.0g/L。...

【专利技术属性】
技术研发人员：张媛，杨燕，向建英，邓国宾，王德新，王逸之，
申请(专利权)人：西南林业大学，
类型：发明
国别省市：云南;53