一种利用微量临床穿刺样本进行染色质免疫共沉淀文库制备的方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种利用微量临床穿刺样本进行染色质免疫共沉淀文库制备的方法及其应用。本发明专利技术利用高敏型Tn5转座酶成功开发了一种基于微量临床穿刺样本的染色质免疫共沉淀测序文库制备方法，可以对微量的穿刺组织样本有效快速进行ChIP‑seq文库构建。相比于传统的ChIP‑seq建库方式，该方法大大降低样本起始量(5‑50mg)，有效缩短了建库时间(约1.5天)，满足了测序市场对微量样本和大规模样本处理速度的需求。

【技术实现步骤摘要】
一种利用微量临床穿刺样本进行染色质免疫共沉淀文库制备的方法及其应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种利用微量临床穿刺样本进行染色质免疫共沉淀文库制备的方法及其应用。
技术介绍
染色质免疫共沉淀测序技术(chromatinimmunoprecipitationfollowedbysequencing，ChIP-Seq)是一种将染色质免疫共沉淀(chromatinimmunoprecipitation，ChIP)与高通量测序相结合的革命性技术。该技术可在全基因组范围内鉴定转录因子、组蛋白修饰、核小体和RNA结合蛋白等在染色质上的结合位点。与传统的基于芯片的ChIP-chip(chromatinimmunoprecipitationcombinedwithDNAtilingarrays)不同，ChIP-seq提供了一种高分辨率、高特异性、高覆盖度的研究蛋白质-DNA相互作用的新策略。ChIP-seq技术可以应用到任何基因组序列已知的物种，可以研究任何一种DNA相关蛋白与其靶定DNA之间的相互作用，并能确切得到蛋白质所结合的每一个片段的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.Tn5转座系统在构建染色质免疫共沉淀文库中的应用；/n或，Tn5转座系统在制备构建染色质免疫共沉淀文库的产品中的应用；/n或，Tn5转座系统在基于微量组织样本构建染色质免疫共沉淀文库中的应用；/n或，Tn5转座系统在制备基于微量组织样本构建染色质免疫共沉淀文库的产品中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.Tn5转座系统在构建染色质免疫共沉淀文库中的应用；
或，Tn5转座系统在制备构建染色质免疫共沉淀文库的产品中的应用；
或，Tn5转座系统在基于微量组织样本构建染色质免疫共沉淀文库中的应用；
或，Tn5转座系统在制备基于微量组织样本构建染色质免疫共沉淀文库的产品中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述微量组织样本的最低起始量为5mg；
或，所述组织样本为穿刺组织样本。


3.一种染色质免疫共沉淀文库的构建方法，包括如下步骤：
1)将组织样本依次进行甲醛处理和染色质DNA片段化，然后与特异性目的蛋白抗体孵育，得到目的蛋白-DNA复合物；
2)用Tn5转座系统将所述目的蛋白-DNA复合物中的DNA片段进行片段化、末端修复和连接接头，然后用蛋白酶消解所述目的蛋白，得到DNA产物；
3)以所述DNA产物为模板进行PCR扩增，得到染色质免疫共沉淀文库。


4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述1)，所述组织样本的最低起始量为5mg；
或，所述组织样本为穿刺组织样本。


5.根据权利要求3或4所述的方法，其特征在于：所述1)包括如下步骤：
1-1)向组织样本中加入甲醛溶液进行交联反应，得到交联产物；
1-2)将所述交联产物进行匀浆破碎，得到组织碎片；
1-3)...

【专利技术属性】
技术研发人员：薛愿超，苏瑞宝，王磊，
申请(专利权)人：中国科学院生物物理研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11