榴莲皮多糖在制备免疫增强药物方面的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种榴莲皮多糖在制备免疫增强药物方面的应用。本发明专利技术使用环磷酰胺建立小鼠免疫力低下模型，分别测定各组小鼠胸腺、脾脏指数，观察组织病理改变，以评价榴莲皮多糖对免疫器官的影响。取小鼠血清，用于测定吞噬细胞活力、抗氧化应激能力、细胞因子含量。取小鼠脾脏，测定白介素‑2（IL‑2）、白介素‑4（IL‑4）、白介素‑6（IL‑6）和肿瘤坏死因子‑

【技术实现步骤摘要】
榴莲皮多糖在制备免疫增强药物方面的应用
本专利技术属于多糖药物
，具体涉及一种榴莲皮多糖在制备免疫增强药物方面的应用。
技术介绍
榴莲为木棉科榴莲属常绿乔木榴莲(DuriozibethinusMurr)的果实，味甘性温，其果肉具有抗炎活性。榴莲皮为榴莲的果皮，属于榴莲果实的副产品，目前研究主要为表面化学作用和吸附功能，但关于其功能活性的研究相对较少，例如吴敏芝等人发现榴莲壳提取物具有止咳、镇痛及抗菌的作用，洪军等人的研究表明，证实榴莲果皮中提取的黄酮类化合物具有抗氧化及抗菌活性。本课题组早期研究发现，榴莲皮多糖可调节肠道菌群，治疗功能性便秘。
技术实现思路
本专利技术目的在于克服现有技术缺陷，提供一种榴莲皮多糖在制备免疫增强药物方面的应用，其治疗效果显著，且无毒副作用。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了一种榴莲皮多糖在制备免疫增强药物方面的应用。上述榴莲皮多糖在制备免疫增强药物方面的应用，具体的，榴莲皮多糖的适宜用量为243-1000mg/kg﹒d。具体的，所述榴莲皮多糖经下述步骤制备获得：将干燥的榴莲皮用75-85％乙醇浸泡，浸泡结束后取出残渣并加水煎煮，煎煮结束后过滤，滤液加95％乙醇至终浓度为70―85％，静置，取沉淀物，水溶后Sevage法除蛋白，再次醇沉，取沉淀物分别用丙酮、石油醚、无水乙醇淋洗，淋洗后所得沉淀即为榴莲皮多糖。进一步优选的，将干燥的榴莲皮用80％乙醇浸泡(80％乙醇浸泡2―4次，每次浸泡24±12h)，浸泡结束后取出残渣并加水煎煮三次，煎煮结束后过滤，合并滤液，减压浓缩，浓缩液加95％乙醇至乙醇终浓度为75％，冰箱中静置过夜(12h)，离心分离，收集沉淀，沉淀用水溶后采用Sevage法除蛋白(选用体积比为4∶1的氯仿—正丁醇混合液，采用本领域常规技术即可)；取上清液加95％乙醇至终浓度为70％，冰箱中静置过夜，沉淀分别用丙酮、石油醚、无水乙醇淋洗，冷冻干燥即为榴莲皮多糖。进一步优选的，煎煮水温80-85℃，第一次煎煮2h，第二次煎煮1h，第三次煎煮0.5h。环磷酰胺为常用抗肿瘤药物，对多种肿瘤均有一定治疗作用。环磷酰胺无体外活性，主要通过肝脏P450酶水解进而发挥作用，其可引起免疫抑制和氧化应激反应。免疫功能较为复杂，涉及机体各个方面，所以关于免疫功能的影响需涉及多个方面。榴莲皮多糖是否同时具有免疫调节的作用，值得研究。本专利技术使用环磷酰胺腹腔注射建立小鼠免疫低下模型，研究了榴莲皮多糖增强免疫力方面的作用。本专利技术利用榴莲皮多糖给予小鼠灌胃200mg/(kg·d)、100mg/(kg·d)、50mg/(kg·d)，注射环磷酰胺70mg/(kg·d)，建立小鼠免疫抑制模型，了解小鼠免疫情况。本专利技术分别测定各组小鼠胸腺、脾脏指数，观察组织病理改变，以评价榴莲皮多糖对免疫器官的影响。取小鼠血清，用于测定吞噬细胞活力、抗氧化应激能力、细胞因子含量。取小鼠脾脏，测定白介素-2(IL-2)、白介素-4(IL-4)、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。取小鼠盲肠内容物，测定短链脂肪酸(SCFA)的含量及肠道菌群的多样性。经试验发现：榴莲皮多糖能够增强小鼠的免疫力，调节肠道菌群，具有较好的免疫增强功效，可用于制备免疫增强和调节肠道菌群药物。附图说明图1为不同组别小鼠的脾组织病理切片(400x)，图中，BC为空白对照组，MC为模型组，PC为阳性对照组，HD、MD、LD分别为榴莲皮多糖的高、中、低剂量组。具体实施方式以下结合实施例对本专利技术的技术方案作进一步地详细介绍，但本专利技术的保护范围并不局限于此。下述实施例中，如无特殊说明，乙醇均指的体积浓度。实施例下述应用试验中所用榴莲皮多糖经下述步骤获得：取干燥榴莲皮4.2kg，将干燥的榴莲皮用80％乙醇浸泡(80％乙醇浸泡3次，每次浸泡24h)，浸泡结束后取出残渣并加水煎煮三次(煎煮水温80-85℃，第一次煎煮2h，第二次煎煮1h，第三次煎煮0.5h)。煎煮结束后过滤，合并滤液，减压浓缩，浓缩液加95％乙醇至乙醇终浓度为75％，冰箱中静置过夜(12h)，离心分离，收集沉淀，沉淀用水溶后采用Sevage法除蛋白(选用体积比为4∶1的氯仿—正丁醇混合液，采用本领域常规技术即可)。取上清液加95％乙醇至终浓度为70％，冰箱中静置过夜(12h)，沉淀分别用丙酮、石油醚、无水乙醇淋洗，冷冻干燥(12h，-50±5℃)即为榴莲皮多糖，约53g。应用试验一、试验动物SPF级昆明小鼠，雄，20-22g，购买于河南省实验动物中心，许可证号：SCXK(豫)2017-0004。实验前适应性饲养1周(温度25±2℃，光照12h/d，湿度40～45％)，喂养标准饲料，自由饮水。二、试验试剂与仪器表1实验试剂表2实验仪器三、实验分组及给药昆明小鼠按体重随机分为6组，每组10只。高、中、低剂量组分别灌胃200、100、50mg/kg榴莲皮多糖，阳性对照组灌胃香菇菌多糖片3g/kg，模型组、空白组灌胃生理盐水；连续给药21天。第18、19、20、21天，空白组注射生理盐水，其余组以70mg/kg腹腔注射环磷酰胺进行造模。末次给药后，小鼠禁食不禁水12h，称重，脱颈处死。四、指标测定1、胸腺指数和脾脏指数的测定取脾脏和胸腺，清洗，称重。计算小鼠脾脏指数和胸腺指数。胸腺指数＝胸腺重量(mg)/体重(10g)；脾脏指数＝脾脏重量(mg)/体重(10g)。2、ELISA法测定血清中细胞因子水平取冻存的血清，ELISA试剂盒分别测定IL-2、IL-4、IL-6和TNF-α含量。3、抗氧化应激能力测定取脾脏约50mg，用眼科剪尽快剪碎组织块，加入约脾脏体积9倍的生理盐水，在匀浆管中进行匀浆。将制备好的10％匀浆以2500g离心10min，取上清。按照试剂盒说明书分别检测MDA含量、CAT、SOD和T-AOC活性。4、乳酸脱氢酶(ACP)和酸性磷酸酶(LDH)活力测定取冻存的血清，按照试剂盒使用说明，分别用微量酶标法和微板法测定乳酸脱氢酶和酸性磷酸酶的活力值。5、HE染色法小鼠胸腺、脾脏部位冲洗干净，将其放入4％的多聚甲醛溶液中，固定24h，之后脱水，常规石蜡包埋，切片。采用苏木素-伊红染色5min，之后脱水，用中性树胶封片。五、数据处理结果采用均值±SD值表示，数据统计采用SPSS19.0软件单因素方差分析法(One-WayANOVA)比较其显著性差异。六、榴莲皮多糖增强免疫力的结果与分析1、榴莲皮多糖对小鼠胸腺指数和脾脏指数的影响表3给出了榴莲皮多糖对小鼠免疫器官的影响。表3可以看出，与空白组相比，模型组的脾脏指数和胸腺指数显著降低(P<0.001)，造模成功；与模型组相比，高剂量组的胸腺、脾脏指数显著升高(P<0.01本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.榴莲皮多糖在制备免疫增强药物方面的应用。/n

【技术特征摘要】
1.榴莲皮多糖在制备免疫增强药物方面的应用。


2.如权利要求1所述榴莲皮多糖在制备免疫增强药物方面的应用，其特征在于，榴莲皮多糖用量为243-1000mg/kg﹒d。


3.如权利要求1所述榴莲皮多糖在制备免疫增强药物方面的应用，其特征在于，所述榴莲皮多糖经下述步骤制备获得：将干燥的榴莲皮用75-85%乙醇浸泡，浸泡结束后取出残渣并加水煎煮，煎煮结束后过滤，滤液加95%乙醇至终浓度为70―85%，静置，取沉淀物，水溶后Sevage法除蛋白，再次醇沉，取沉淀物分别用丙酮、石油醚、无水乙醇淋洗，淋洗后所得沉淀即为榴莲皮多糖。

【专利技术属性】
技术研发人员：康文艺，张岩，王金梅，马常阳，刘振花，姜慧敏，蒋圣军，梁琼心，
申请(专利权)人：河南大学，
类型：发明
国别省市：河南;41