一种乙型肝炎病毒HBV来源HBx蛋白的制备方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，具体为一种乙型肝炎病毒HBV来源HBx蛋白包涵体的可溶化和纯化方法。该制备方法包括以下步骤：使用重组表达系统表达HBx；收集含有重组表达的HBx蛋白的细胞，在冷却条件下使用裂解缓冲液破细胞，收集含有HBx蛋白包涵体的部分；在上述获得的含有HBx蛋白包涵体的部分中，加入溶解缓冲液重悬，变性；对上述产物复性并去除核酸，纯化，获得HBx蛋白；上述步骤在小于等于10℃的环境条件下完成。使用本发明专利技术的方法可得到稳定均一的单体HBx样品，浓度可达到15mg/ml。该蛋白样品可以作为科学研究试剂，利用该蛋白样品还可以制备HBx的单克隆抗体。

【技术实现步骤摘要】
一种乙型肝炎病毒HBV来源HBx蛋白的制备方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种乙型肝炎病毒HBV来源HBx蛋白包涵体的可溶化和纯化方法。
技术介绍
乙型肝炎病毒(HBV病毒)中的HBx蛋白，是病毒感染后在人体内复制、引起肝炎和肝癌的关键蛋白，是HBV感染引起相关疾病的一个重要靶标蛋白。HBx蛋白大小约为16.6kDa，由154个氨基酸残基组成，目前还缺乏对于该蛋白结构与功能的基本了解。该蛋白能自发聚合，并具有很强的核酸结合能力，这使得在各种表达系统中都无法顺利获得均一可溶的HBx蛋白样品。使用已报导的结合Trx、MBP等融合蛋白重组表达或变复性方法还无法获得高纯度的、稳定均一的蛋白样品。以前获得的HBx蛋白的缺点在于：一是仍为低可溶性状态，文献报导中最高浓度仅能达到1mg/ml左右；二是仍然未能去除结合的核酸，表现在样品OD260/280(在260nm和280nm的吸光光度比值)接近或大于1，远远高于纯蛋白的正常比值(约0.57)。基于目前这些蛋白样品研究获得的数据，研究结果常常难以被其他实验室重复。获得稳定均一的、可溶有活性本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种HBx蛋白的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：/n(a)使用重组表达系统表达HBx；/n(b)收集含有重组表达的HBx蛋白的细胞，在冷却条件下使用裂解缓冲液破细胞，收集含有HBx蛋白包涵体的部分；/n(c)在步骤(b)获得的含有HBx蛋白包涵体的部分中，加入溶解缓冲液重悬搅拌均匀直到无明显沉淀，之后离心取上清；/n(d)使用亲和层析柱纯化HBx,得到可溶的、变性的HBx；/n(e)HBx蛋白复性，去除核酸；/n(f)将复性后的样品通过分子筛进行纯化，去除核酸，获得HBx蛋白；/n上述步骤在小于等于10℃的环境条件下完成。/n

【技术特征摘要】
1.一种HBx蛋白的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(a)使用重组表达系统表达HBx；
(b)收集含有重组表达的HBx蛋白的细胞，在冷却条件下使用裂解缓冲液破细胞，收集含有HBx蛋白包涵体的部分；
(c)在步骤(b)获得的含有HBx蛋白包涵体的部分中，加入溶解缓冲液重悬搅拌均匀直到无明显沉淀，之后离心取上清；
(d)使用亲和层析柱纯化HBx,得到可溶的、变性的HBx；
(e)HBx蛋白复性，去除核酸；
(f)将复性后的样品通过分子筛进行纯化，去除核酸，获得HBx蛋白；
上述步骤在小于等于10℃的环境条件下完成。


2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(a)所述的重组表达系统是大肠杆菌表达系统。


3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(a)中以包涵体蛋白的方式进行表达时，选择的标签是His标签。


4.如权利要求1所述的制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡小健，李继喜，王森，苏晓琴，李龙，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海;31