过滤的细胞培养盖及细胞培养方法技术

本文提供了一种生物反应器。所述生物反应器包括具有壁的容器，所述壁至少部分限定用于容纳流体的内部隔室；至少一个端口；以及被构造成与所述至少一个端口可移除地接合的至少一个盖，所述至少一个盖包含过滤材料。本文还提供了一种细胞培养方法，其包括：将细胞和细胞生长培养基加入到生物反应器的容器中，以及将微载体加入到所述容器中以在微载体上形成显著融合的细胞。所述细胞培养方法还包括：洗涤融合的细胞，收获融合的细胞以形成含有细胞的溶液，以及通过使溶液流过与生物反应器的至少一个端口可移除地接合的盖中的过滤材料，从所述容器移除含有细胞的溶液。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】过滤的细胞培养盖及细胞培养方法相关申请的交叉引用本申请要求2017年11月29日提交的美国临时申请系列第62/592,011号的优先权权益，本文以该申请的内容为基础并将其全文纳入本文，如同在下文完整阐述。
本公开一般涉及细胞培养系统，更具体地，涉及包括过滤盖并且所述过滤盖用于使细胞与微载体分离的细胞培养系统。
技术介绍
微载体细胞培养通常在生物反应器中进行。在培养期间，细胞在微载体的表面上生长。一旦细胞培养过程完成，经培养的细胞从微载体剥离，接着使含有细胞的经培养的溶液与微载体分离以用于进一步处理。从微载体剥离细胞的常规过程包括使微载体在生物反应器中沉降。使微载体沉降一般包括在生物反应器中停止搅拌。然后可以移除生物反应器中的细胞培养基。接着可以进行至少一个洗涤步骤，其中，将含有例如达氏(Dulbecco)磷酸盐缓冲盐水的洗涤溶液加入到生物反应器中并接着搅拌生物反应器的内容物，持续短的时间。在短时间的搅拌后，使微载体再次沉降，并且从生物反应器移除洗涤溶液。然后将包含细胞剥离剂(例如胰蛋白酶)的收获溶液加入到生物反应器中并继续搅拌。配合着搅拌，收获溶液从微载体剥离大量细胞。在常规分离过程期间使微载体沉降可能耗时，并且例如完成常规分离过程的时间可增加几乎50％。另外，细胞和微载体在生物反应器中的沉降可造成聚集，其中细胞和微载体在生物反应器的底部变得紧凑。由于变得紧凑，细胞可能经历以营养物和氧气耗尽，细胞废产物浓度高和极端pH为特征的环境。这样的环境对细胞生长、细胞健康和/或细胞功能可具有直接不利影响。在从微载体剥离细胞后，常规地使微载体与包含剥离细胞的经培养的溶液分离。进行这种分离的一种常规技术包括使溶液通过容器中的刚性网筛。该筛允许经培养的流体通过，但阻止微载体通过。然而，随着微载体在筛上积累，它们开始堵塞筛并且阻止流体从中通过。堵塞的微载体还可困住细胞并阻止细胞通过网筛。一旦筛被堵塞，则过程停止直到筛畅通。这些过程步骤可能昂贵且耗时，并且还被认为在微载体细胞培养中导致细胞收率降低。另外，由于网筛是单独的系统部件，因此需要从进行细胞培养过程的容器转移经培养的溶液以使其通过网筛。由于该转移，这些网筛可能增加污染细胞或者细胞培养溶液的风险。用于使微载体与包含剥离细胞的经培养的溶液分离的几种其他技术例如包括差异化梯度离心、声共振、切向流过滤、旋转过滤器以及使用锥形或倾斜板的沉降。大多数的这些技术要求昂贵的资本设备或者操作复杂。
技术实现思路
根据本公开的实施方式，提供了一种生物反应器。所述生物反应器包括具有壁的容器，所述壁至少部分限定用于容纳流体的内部隔室；至少一个端口；以及被构造成与所述至少一个端口可移除地接合的至少一个盖，所述至少一个盖包含过滤材料。根据本公开的实施方式，提供了一种细胞培养方法。所述细胞培养方法包括：将细胞和细胞生长培养基加入到生物反应器的容器中，以及将微载体加入到所述容器中以在微载体上形成显著融合的细胞。所述细胞培养方法还包括：洗涤融合的细胞，收获融合的细胞以形成含有细胞的溶液，以及通过使溶液流过与生物反应器的至少一个端口可移除地接合的盖中的过滤材料，从所述容器移除含有细胞的溶液。在以下的具体实施方式中给出了其他特征和优点，其中的部分特征和优点对本领域的技术人员而言，根据所作描述就容易看出，或者通过实施包括以下具体实施方式、权利要求书以及附图在内的本文所述的各个实施方式而被认识。应理解，前面的一般性描述和以下的具体实施方式都仅仅是示例性的，并且旨在提供用于理解权利要求的性质和特性的总体评述或框架。所附附图提供了进一步理解，附图被结合在本说明书中并构成说明书的一部分。附图说明了一个或多个实施方式，并与说明书一起用来解释各种实施方式的原理和操作。附图说明通过以下的说明和附图能够更加清晰地理解本公开，以下附图仅作为非限制性的实例给出，其中：图1示出了根据本公开的实施方式所述的一种示例性生物反应器；图2A是根据本公开的实施方式所述的具有过滤器的被局部切除的盖的透视图；图2B是根据本公开的实施方式所述的具有过滤器的盖的透视图；图3是根据本公开的实施方式所述的具有过滤器的盖的顶视图；图4是根据本公开的实施方式所述的生物反应器的剖视透视图；图5是根据本公开实施方式所述的生物反应器的分解图；以及图6例示了根据本公开实施方式所述的一种细胞培养方法。具体实施方式下面对本公开的实施方式作详细说明，这些实施方式的实例在附图中示出。只要可能，在附图中使用相同的附图标记表示相同或相似的部分。除非上下文明确有其他的说明，否则单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数的指代物。阐述相同特征的所有范围的端点可独立地组合并包含所述端点。所有参考文献都以参考的方式纳入本文中。如在本文中所使用的，“具有”、“具备”、“含有”、“包括”、“包含”、“含”等以其开放含义使用，通常表示“包括但不限于”。除非另外说明，本文中使用的所有科技术语的含义具有本领域通用的含义。本文提供的定义是用来帮助理解本文经常用到的某些术语，不对本公开的范围构成限制。下文首先概括地描述本公开，然后在几个示例性实施方式的基础上详细描述本公开。在各个示例性实施方式中彼此组合示出的各特征并非都必须实现。特别地，各个特征也可以省略或与相同的示例性实施方式或其他示例性实施方式所示的其他特征以其他方式组合。本公开的实施方式涉及包括密封盖并且在所述盖中具有过滤器的生物反应器。本文所述的盖允许从微载体分离细胞且无需留出时间使微载体在生物反应器中沉降，这进而减少了完成细胞与微载体分离的过程所需的时间量，并且还减少了与进行所述过程相关的成本。使细胞与微载体分离并且无需留出时间使微载体在生物反应器中沉降还防止了微载体在生物反应器中变得紧凑的状态，这进而减少或消除了与微载体变得紧凑有关的对细胞生长、细胞健康和/或细胞功能的不利影响。本公开的实施方式还允许在单个容器中进行细胞与微载体分离的过程。通过促进本文所述的在单个容器盖中进行分离过程，还降低了与从初始系统或容器移除细胞并将细胞转移到后续系统或容器相关的污染风险以及细胞收率损失。降低的污染风险的实例包括细胞潜在地暴露于污染物，例如，来自各种系统或容器的材料的可提取物和可浸出物和/或可能来自各种系统或容器的材料的微粒，或在将细胞或细胞产物从一个系统或容器转移到另一系统或容器期间可能源自环境的微粒。暴露于这些污染物可能导致昂贵的下游产物受污染，由于污染，最终需要弃去这些下游产物。如本文中所使用的，术语“流体”用于指能够流动的任何物质，例如但不限于液体、液态悬浮物、气体、气态悬浮物等。在本公开的全文中使用术语“流体和/或其他组分”来表示可包含以下组分的流体：具有用于细胞生长的营养物质的细胞培养基，，细胞，细胞培养过程的副产物以及可以常规添加到生物处理系统中或在生物处理系统中形成的任何其他生物材料或组分。本文所述的容器可以包含一种或多种细本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种生物反应器，其包括：/n具有壁的容器，所述壁至少部分限定用于容纳流体的内部隔室；/n至少一个端口；和/n至少一个盖，其被构造成与所述至少一个端口可移除地接合，所述至少一个盖包含过滤材料。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171129 US 62/592,0111.一种生物反应器，其包括：
具有壁的容器，所述壁至少部分限定用于容纳流体的内部隔室；
至少一个端口；和
至少一个盖，其被构造成与所述至少一个端口可移除地接合，所述至少一个盖包含过滤材料。


2.如权利要求1所述的生物反应器，其还包括设置在容器的内部隔室中的搅拌器。


3.如前述权利要求中任一项所述的生物反应器，其中，所述至少一个端口包括外螺纹，其中，所述至少一个盖包括内螺纹，并且其中，所述至少一个盖的内螺纹被构造成与所述至少一个端口的外螺纹配合。


4.如前述权利要求中任一项所述的生物反应器，其包含注塑聚合物。


5.如前述权利要求中任一项所述的生物反应器，其中，所述过滤材料包含多孔材料，所述多孔材料的平均孔径在约1μm至约100μm之间。


6.如前述权利要求中任一项所述的生物反应器，其中，所述至少一个盖包括在所述至少一个盖的顶部中的开口，其将过滤材料暴露于容器外部的环境。


7.如前述权利要求中任一项所述的生物反应器，其中，所述至少一个盖包括设置在过滤材料上方的上支承板和设置在过滤材料下方的下支承板。


8.如前述权利要求中任一项所述的生物反应器，其至少包括第一端口和第二端口。


9.如权利要求8所述的生物反应器，其至少包括第一盖和第二盖，所述第一盖被构造成与第一端口可移除地接合，并且所述第二盖被构造成与第二端口可移除地接合。


10.如权利要求9所述的生物反应器，其中，第一盖包含过滤材料，并且第二盖不包含过滤材料。


11.如权利要求8-9中任一项所述的生物反应器，其中，第二盖包括通气口。


12.一...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·J·西贝克，
申请(专利权)人：康宁股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US