一种负载MSCs来源外泌体的口服微球的制备方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种负载MSCs来源外泌体的口服微球的制备方法及应用。其制备方法包括以下步骤：(1)ALG/CST外核溶液的配制，(2)ALG/CNC内核溶液的配制，(3)分离间充质干细胞来源的外泌体，(4)制备负载MSCs外泌体的微球。本发明专利技术将疏水性的ALG/CST与亲水性的ALG/CNC结合起来，用ALG/CST包裹外泌体内核，克服ALG易酸解，CNC载药量低等缺点，有效保护外泌体免受胃酸和消化液的破坏作用，同时具有pH敏感性的小肠缓释释放的靶向性，使得MSCs可通过的口服方式安全运送到小肠部位，借由小肠吸收功能进行损伤修复、免疫调节及抗炎作用，实现RA及其他相关自身免疫性疾病的治疗。

【技术实现步骤摘要】
一种负载MSCs来源外泌体的口服微球的制备方法及应用
本专利技术涉及生物材料领域，具体涉及一种负载MSCs来源外泌体的口服微球的制备方法及应用。
技术介绍
越来越多的研究证实，间充质干细胞来源的外泌体通过在细胞间传递信号分子，能够促进血管生成、减少炎症、修复受损的组织。与MSCs相比，外泌体具有更好的稳定，移植治疗后存活率高、无明显不良反应等优点。此外，外泌体中含有大量且种类繁多的蛋白细胞因子及生物活性分子，是MSCs发挥抗炎、抗纤维化及免疫调节功能的主要方式。因此，MSCs外泌体在防治系统性红斑狼疮及其并发症、类风湿性关节炎及糖尿病等免疫系统疾病具有一定的临床应用前景。类风湿性关节炎(RheumatoidArthritis,RA)是一类以关节滑膜增生和软骨破坏为特征的慢性自身免疫性疾病，具有较高的致残率和致畸率，是目前临床面临的难题之一。越来越多的干细胞研究揭示其治疗效果的作用模式主要通过旁分泌产生。人脐带血MSC来源的外泌体(MSC-Exo)可以通过其自身的活性物质，介导细胞之间的信号交流，从而在RA模型小鼠治疗中发挥持续的治疗效果本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种负载MSCs来源外泌体的口服微球，其特征在于：其制备方法包括以下步骤：/n(1)ALG/CST外核溶液的配制：/n分别称取海藻酸钠ALG和壳聚糖CST，各加入到双蒸水中分散，分别制备海藻酸钠溶液和壳聚糖溶液，充分溶解；冷却至室温后将二者按照一定比例混合，充分搅拌直至均匀；/n(2)ALG/CNC内核溶液的配制：/n分别称取海藻酸钠ALG和羟甲基纤维素钠CNC-Na，各加入到双蒸水中分散，分别制备海藻酸钠溶液和羟甲基纤维素钠溶液，充分溶解；冷却至室温后将二者按照一定比例混合，充分搅拌直至均匀；/n(3)分离间充质干细胞来源的外泌体：/n选取处于对数生长期的MSCs用于外泌体的提取，采用M...

【技术特征摘要】
1.一种负载MSCs来源外泌体的口服微球，其特征在于：其制备方法包括以下步骤：
(1)ALG/CST外核溶液的配制：
分别称取海藻酸钠ALG和壳聚糖CST，各加入到双蒸水中分散，分别制备海藻酸钠溶液和壳聚糖溶液，充分溶解；冷却至室温后将二者按照一定比例混合，充分搅拌直至均匀；
(2)ALG/CNC内核溶液的配制：
分别称取海藻酸钠ALG和羟甲基纤维素钠CNC-Na，各加入到双蒸水中分散，分别制备海藻酸钠溶液和羟甲基纤维素钠溶液，充分溶解；冷却至室温后将二者按照一定比例混合，充分搅拌直至均匀；
(3)分离间充质干细胞来源的外泌体：
选取处于对数生长期的MSCs用于外泌体的提取，采用MSC完全培养基培养，当细胞生长至70～80％融合度时，将MSC完全培养基更换为含5％无外泌体血清的培养基，继续培养36～72小时；收集细胞培养上清，采用超速离心法提取外泌体；
(4)制备负载MSCs外泌体的微球：
将MSCs来源的外泌体按一定密度均匀混合于ALG/CNC内核溶液，将混合了外泌体的ALG/CNC内核溶液和ALG/CST外核溶液分别置于同轴电喷装置的相应注射器中，通过同轴电喷技术，在高电压的作用下将混合溶液喷射到氯化钙溶液中，获得包裹外泌体的微凝胶液滴，通过电压、流速、接收距离及内外轴直径大小进行调控内外核大小及壁厚。


2.根据权利要求1所述的负载MSCs来源外泌体的口服微球，其特征在于：步骤(1)中，ALG/CST外核溶液的浓度质量分数为1％ALG/1％CST。


3.根据权利要求1所述的负载MSCs来源外泌体的口服微球，其特征在于：步骤(2)中，ALG/CNC内核溶液的浓度质量分数为1％ALG/2％CNC。


4...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙凌云，甘璟璟，赵远锦，
申请(专利权)人：南京鼓楼医院，
类型：发明
国别省市：江苏;32