一种冷冻超薄切片的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种冷冻超薄切片的制备方法，包括：利用振动切片机对组织样品进行切割，得到厚度不超过200μm的薄切片；将所述薄切片放入样品台进行高压冷冻；将载有薄切片的样品台转移至冷冻超薄切片机，对载有薄切片的样品台进行预减薄；将预减薄的样品台转移至扫描透射电镜内；利用冷冻聚焦离子束制备冷冻超薄切片。因此本公开制备的冷冻超薄切片厚度为200nm左右，不超过300nm，可以很好的满足扫描透射电镜成像的要求。

【技术实现步骤摘要】
一种冷冻超薄切片的制备方法
本专利技术涉及切片制备领域，特别涉及一种冷冻超薄切片的制备方法。
技术介绍
冷冻超薄切片是将冷冻后的样品加工成厚度在纳米级别的薄片，从而可以在透射电子显微镜上成像的电镜样品制备技术。对于生物样品来说，不经任何化学固定、仅仅用快速冷冻固定得到的含水化样品，能最大限度的保存样品的生理状态，可以进行原位结构的研究。但这种含水化的样品如果用通常的钻石刀进行超薄切片，无可避免的存在样品沿切割方向有压缩、切片表面刀痕严重、操作难度大切片难于收集等问题，无法广泛用于后续冷冻电镜的成像与数据收集。近十年来，冷冻聚焦离子束技术(cryo-focusionbeam，cryo-FIB)的兴起，有望解决冷冻含水超薄切片的制备问题。FIB可将冷冻后的含水化生物样品减薄成厚度合适的切片，用于透射电镜观察及电子断层成像。这样制备得到的生物样品，其状态更接近生理条件，解析的结构分辨率也更高。最终目的是原位解析生物大分子及分子机器的结构，从而在分子、细胞器、细胞等不同层次上阐述生命活动的本质。目前使用冷冻聚焦离子束技术对生物样品进行减本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种冷冻超薄切片的制备方法，其特征在于，包括：/n利用振动切片机对组织样品进行切割，得到厚度不超过200μm的薄切片；/n将所述薄切片放入样品台进行高压冷冻；/n将载有薄切片的样品台转移至冷冻超薄切片机，对载有薄切片的样品台进行预减薄；/n将预减薄的样品台转移至扫描透射电镜内；/n利用冷冻聚焦离子束制备冷冻超薄切片。/n

【技术特征摘要】
1.一种冷冻超薄切片的制备方法，其特征在于，包括：
利用振动切片机对组织样品进行切割，得到厚度不超过200μm的薄切片；
将所述薄切片放入样品台进行高压冷冻；
将载有薄切片的样品台转移至冷冻超薄切片机，对载有薄切片的样品台进行预减薄；
将预减薄的样品台转移至扫描透射电镜内；
利用冷冻聚焦离子束制备冷冻超薄切片。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述将所述薄切片放入样品台进行高压冷冻包括：
将所述薄切片放置于现有样品台的空腔内；
用冷冻保护剂填充所述空腔；
在所述现有样品台上覆盖蓝宝石片后，送入至高压冷冻仪中进行冷冻；
所述将预减薄的样品台转移至扫描透射电镜内包括：
将所述预减薄的样品台在液氮中转移至适用于普通扫描透射电镜的冷冻样品转移梭中；
利用所述冷冻样品转移梭将所述预减薄的样品台送入至所述普通扫描透射电镜的真空腔中。


3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述将所述薄切片放入样品台进行高压冷冻包括：
将所述薄切片放置于样品台的空腔内，所述样品台包括底座和可拆卸的填充部件，所述底座为圆盘状结构，所述底座上设有凸沿，所述凸沿与底座围成用于容置样品的空腔；
用冷冻保护剂填充空腔；
利用所述填充部件对所述凸沿侧壁与底座之间形成的阶梯结构进行填充；
在所述样品台上覆盖蓝宝石片后，送...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙磊，张建国，张丹阳，季刚，徐伟，孙飞，
申请(专利权)人：中国科学院生物物理研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11