苏木素染色液氧化程度的监控方法、苏木素染色液的质量控制方法技术

本发明专利技术涉及一种苏木素染色液氧化程度的监控方法、苏木素染色液的质量控制方法，属于苏木素染色液技术领域。本发明专利技术的苏木素染色液氧化程度的监控方法，包括以下步骤：(1)利用紫外分光光度计检测氧化前苏木素染色液的稀释液的OD值，记为OD

【技术实现步骤摘要】
苏木素染色液氧化程度的监控方法、苏木素染色液的质量控制方法
本专利技术涉及一种苏木素染色液氧化程度的监控方法、苏木素染色液的质量控制方法，属于苏木素染色液

技术介绍
苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-Eosinstaining)，简称HE染色法，是各个医院实验室最常用的染色方法，也是各病理科最经典的染色技术。HE染色法的染色原理如下，细胞核内的染色质主要成份是去氧核糖核酸(简称DNA)，DNA的双螺旋结构中，两条链上的磷酸基向外，带负电荷，呈酸性，很容易与带正电荷的苏木精碱性染料以离子键或氢键的方式结合而被染色，苏木精在碱性溶液中呈蓝色，所以细胞核被染成蓝色。苏木精染色后显现出的结果为：细胞核呈蓝色，软骨基质和钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。再利用胞浆染料伊红染胞浆，使胞浆的各种不同成分又呈现出深浅不同的粉红色。通过苏木精-伊红染色法染色后，各种组织或细胞成分与病变的一般形态结构特点均可显示出来。HE染色法的核心是苏木素染液的配制，它是决定染色质量优劣的关键。苏木素染液的配方很多，其原理是一样的，都是先对苏木素进行氧化，氧化分子中一个羟基成为羰基，形成共轭π键，使氧化的苏木素具有的染色的能力；如果继续氧化则形成过氧化苏木素，剩余的羟基进一步被氧化共轭π键破坏，发色团被破坏，失去染色的能力。氧化苏木素在媒染剂的作用下，与细胞核染色质结合。常用的氧化苏木素的方法有两种：一是自然氧化，二是人工氧化。但这两种氧化方法都不易掌握氧化程度，如果氧化程度不够，着色慢且染色力较弱，如果过度氧化，易形成颗粒沉淀和表层金属氧化薄膜，影响染色效果和使用寿命，所使用的苏木素染色液的氧化程度将会影响染色得到的片子的质量，若无法确认苏木素染色液的氧化程度，将会导致染色出来的片子质量时好时坏。为了提高染色出来的片子的质量，就需要得到质量可控的含苏木素的染色液，目前，采取的策略主要有：一种策略是需要经常调整染色时间，去除金属氧化膜，另一种策略是需要配制新的HE染色液；这两种方式都较为繁琐，影响工作效率。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种苏木素染色液氧化程度的监控方法，该苏木素染色液氧化程度的监控方法，缓解了现有技术无法确认苏木素染色液的氧化程度，而导致染色出来的片子质量时好时坏的情况。本专利技术的第二个目的在于提供一种苏木素染色液的质量控制方法。本专利技术的技术方案如下：一种苏木素染色液氧化程度的监控方法，包括以下步骤：(1)利用紫外分光光度计检测氧化前苏木素染色液的稀释液的OD值，记为OD0；(2)利用紫外分光光度计检测氧化后苏木素染色液的稀释液的OD值，记为ODt；(3)氧化前后，苏木素染色液的稀释液的OD值规律变化，变化规律为：氧化程度越大，OD值的数值越大；根据ODt相对于OD0的增加程度，监控苏木素染色液的氧化程度。本专利技术的苏木素染色液氧化程度的监控方法，能够根据ODt相对于OD0的增加程度，监控苏木素染色液的氧化程度，该监控方法操作简单，结果明了，较易实施。缓解了现有技术无法确认苏木素染色液的氧化程度，而导致染色出来的片子质量时好时坏的情况。应当理解的是，氧化前苏木素染色液指得是，没有经过氧化的苏木素染色液，既没有经过自然氧化，也未经过氧化剂氧化；氧化后苏木素染色液指的是经过氧化的苏木素染色液。应当理解的是，步骤(1)和步骤(2)所采用的稀释液中苏木素的浓度是一致的。本专利技术的苏木素染色液氧化程度的监控方法的原理为：苏木素染色液在未氧化前，其在紫外分光光度计检测下有其OD值，但是经过氧化剂氧化后，氧化分子中一个羟基成为羰基，形成共轭π键，使氧化的苏木素具有的染色的能力，其紫外吸收OD值增加，进而通过检测氧化后的OD值来监控苏木素的的氧化程度。氧化后的苏木素再过媒介离子(如Al3+或是Fe3+)进而对细胞核进行染色。为了进一步提高监控精确度和准确度，优选地，所述紫外分光光度计的检测波长为562nm。紫外分光光度计的检测波长为562nm时，氧化前后的苏木素染色液的OD值相差较为明显，有利于提高监控氧化程度的准确度和精确度。为稀释的苏木素染色液在氧化前后测得的OD值相差较小，为了进一步提高监控精确度和准确度，优选地，所述苏木素染色液的稀释液是利用5％硫酸铝水溶液对苏木素染色液进行稀释得到的。5％硫酸铝水溶液对OD值的影响较小，且以5％硫酸铝水溶液作为稀释剂对苏木素染色液进行稀释后，可大幅提高氧化前后的苏木素染色液的稀释液的OD值的差。优选地，所述苏木素染色液的稀释液中苏木素的浓度为0.125mg/mL。苏木素染色液的稀释液中苏木素的浓度为0.125mg/mL时，氧化后的苏木素OD值在2.5～3.5范围内时，氧化程度均合适，氧化前苏木素染色液仅为0.23，即氧化前后的苏木素的OD值相差较大。对于苏木素染色液的具体种类不作限定，采用本领域常规的苏木素染色液即可，比如Ehrlich苏木素染色液、Harris苏木素染色液、Cole苏木素染色液、Mayer苏木素染色液、Carazzi苏木素染色液、改良Lillie-Mayer苏木素染色液以及Gill改良苏木素染色液。优选地，所述苏木素染色液主要由以下方法制备得到：将苏木素和硫酸铝溶于水中，然后加入碘酸钠进行氧化，分离除去固体，收集分离液，加入甘油，混匀即为苏木素染色液。优选地，所述苏木素与硫酸铝的质量比为1:10。所述苏木素与碘酸钠的质量比为10:1。氧化的温度为45℃。所述氧化的时间为2～5min。所述甘油在苏木素染色液中的体积分数为5％。一种苏木素染色液的质量控制方法，包括以下步骤：(1)采用上述苏木素染色液氧化程度的监控方法监控苏木素染色液的氧化程度，以OD值评价苏木素染色液的氧化程度；结合苏木素染色液的染色效果，确定质量合格的OD值，记为ODs；所述OD值是对苏木素染色液的稀释液检测得到的；(2)利用紫外分光光度计检测待检测苏木素染色液的稀释液的OD值，记为ODt，判断ODt是否满足ODs；如满足，则待检测苏木素染色液的质量合格。本专利技术的苏木素染色液的质量控制方法，只要确定了ODs后，即可根据待测苏木素染色液的稀释液的OD值，快速确定待检测苏木素染色液的质量是否合格，使苏木素氧化到合适的程度，使染片效果大大提高。该质量控制方法快速准确，易于推广使用。解决了现有苏木素染色液质量无法控制，而导致染色出来的片子质量时好时坏的情况。为了提高苏木素染色液的质量控制的准确度和精确度，优选地，所述紫外分光光度计的检测波长为562nm。为了提高苏木素染色液的质量控制的准确度和精确度，优选地，所述苏木素染色液的稀释液是利用5％硫酸铝水溶液对苏木素染色液进行稀释得到的。为了提高苏木素染色液的质量控制的准确度和精确度，优选地，所述苏木素染色液的稀释液中苏木素的浓度为0.125mg/mL。优选地，所述苏木素染色液主要由以下方法制备得到：将苏木素和硫酸铝溶于水中，然后加入碘酸钠进行氧化，分离除去固体，收集分离本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种苏木素染色液氧化程度的监控方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)利用紫外分光光度计检测氧化前苏木素染色液的稀释液的OD值，记为OD

【技术特征摘要】
1.一种苏木素染色液氧化程度的监控方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)利用紫外分光光度计检测氧化前苏木素染色液的稀释液的OD值，记为OD0；
(2)利用紫外分光光度计检测氧化后苏木素染色液的稀释液的OD值，记为ODt；
(3)氧化前后，苏木素染色液的稀释液的OD值规律变化，变化规律为：氧化程度越大，OD值的数值越大；根据ODt相对于OD0的增加程度，监控苏木素染色液的氧化程度。


2.根据权利要求1所述的苏木素染色液氧化程度的监控方法，其特征在于，所述紫外分光光度计的检测波长为562nm。


3.根据权利要求1所述的苏木素染色液氧化程度的监控方法，其特征在于，所述苏木素染色液的稀释液是利用5％硫酸铝水溶液对苏木素染色液进行稀释得到的。


4.根据权利要求1所述的苏木素染色液氧化程度的监控方法，其特征在于，所述苏木素染色液的稀释液中苏木素的浓度为0.125mg/mL。


5.根据权利要求1～4任一项所述的苏木素染色液氧化程度的监控方法，其特征在于，所述苏木素染色液主要由以下方法制备得到：将苏木素和硫酸铝溶于水中，然后加入碘酸钠进行氧化，分离除去固体，收集分离液，加入甘油，混匀即为苏木素染色液。


6.一种苏木素染色液的质量控制方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)采用权利要求1～5任一项所述的苏木素染色液氧化程度的监控方法监控苏木素染色液的氧化程度，以OD值评价苏木素染色液的氧化程度；结合苏木素染色液的染色效果，确定质量...

【专利技术属性】
技术研发人员：李莉，梁永波，陈玲，李三华，刘玲玲，齐华，
申请(专利权)人：河南赛诺特生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41