基于核酸甲基化变化的心衰检测装置和应用制造方法及图纸

本发明专利技术提供了一种基于核酸甲基化变化的心衰检测装置和应用。本发明专利技术装置包括：RNA及DNA提取机构、RNA及DNA酶解机构及甲基化RNA及DNA测定机构。本发明专利技术发现心肌梗死大鼠心肌组织及外周血中的甲基化率均有增加趋势，且趋势具有一致性，提示外周血淋巴细胞可能成为心肌组织的良好替代物，且甲基化率与心肌梗死的严重程度呈正相关。初步表明了DNA和RNA甲基化可能在心力衰竭的发生发展中具有一定的潜在作用，可能作为临床心衰诊断的参考指标。

【技术实现步骤摘要】
基于核酸甲基化变化的心衰检测装置和应用
本专利技术属于医学检测领域，具体涉及一种基于核酸甲基化变化的心衰检测装置和应用。
技术介绍
近年来，大多数心衰特异性甲基化改变的研究都集中在基因和启动子特异性改变上，然而全基因组DNA及总RNA甲基化的含量测定对于理解人类心脏疾病的分子病理学，衡量心脏疾病预防的潜在作用，以及监测人体临床试验中正在评估的治疗药物的治疗效应，仍然是一种有价值的技术手段，是用于监测生物体内大规模表观遗传事件的良好的生物标记物。新的研究证据表明，mRNA的转录后修饰对其稳定性、核输出、细胞分裂、翻译为蛋白质、降解和干细胞多能性至关重要。在真核细胞的mRNA中，有两种RNA修饰被广泛研究：N6-甲基腺苷(m6A)和5-甲基胞嘧啶(m5C)。有研究利用甲基化测序法检测到人、小鼠及猪衰竭心脏中的m6A水平增加，但限于该方法的高成本及特异性，所以分析了几种不确定差异甲基化区域的全基因组甲基化分析的检测方法，主要包括高效液相色谱-紫外技术，目前仍被认为是测定水解DNA样品中脱氧胞苷和甲基化胞嘧啶含量的金标准，由于需要相对大量(3-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于核酸甲基化变化的心衰检测装置，其特征在于，所述装置包括：/n(1)RNA及DNA提取机构：通过Trizol法提取RNA，通过DNA提取试剂盒提取DNA；/n(2)RNA及DNA酶解机构：对所述RNA及DNA提取机构提取到的RNA及DNA进行酶解；/n(3)甲基化RNA及DNA测定机构：对所述RNA及DNA酶解机构得到的产品进行电喷雾电离质谱-超高效液相色谱分析。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于核酸甲基化变化的心衰检测装置，其特征在于，所述装置包括：
(1)RNA及DNA提取机构：通过Trizol法提取RNA，通过DNA提取试剂盒提取DNA；
(2)RNA及DNA酶解机构：对所述RNA及DNA提取机构提取到的RNA及DNA进行酶解；
(3)甲基化RNA及DNA测定机构：对所述RNA及DNA酶解机构得到的产品进行电喷雾电离质谱-超高效液相色谱分析。


2.根据权利要求1所述的装置，其特征在于，所述Trizol法包括以下步骤：
(1)向液氮下冻存的心肌组织中加入Trizol裂解液，研磨成浆液状；向-80℃冻存的血液淋巴细胞中加入Trizol裂解液，剧烈涡旋振荡；
(2)室温孵育使核蛋白物完全溶解，加入氯仿涡旋，室温孵育；
(3)离心取上清液至无核酶的EP管中；
(4)加入异丙醇，室温孵育，离心，沉淀RNA；
(5)弃上清，室温干燥，加入75％的乙醇漂洗2次，离心；
(6)弃上清，室温干燥至无明显的乙醇味，分别向组织RNA和血液淋巴细胞RNA中加入无核酶水，经超微量分光光度计检测后-80℃冷冻备用。


3.根据权利要求1或2所述的装置，其特征在于，所述RNA及DNA提取机构中还包括：将提取的RNA及DNA样本经超微量分光光度计检测，测定提取纯度和浓度。


4.根据权利要求1至3中任一项所述的装置，其特征在于，所述RNA及DNA酶解机构中，所述酶解包括以下步骤：
(1)将DNA和RNA样品混合加无核酶水，加热，迅速置于冰上冷却，离心；
(2)加入S1核酸酶和10×S1核酸酶缓冲液，37℃孵育；
(3)在步骤(1)所得混合物中加入碱性磷酸酶、10×碱性磷酸酶缓冲液、磷酸二酯酶及水，37℃孵育酶解；
优选地，所述酶解还包括以下步骤：
(4)酶解后取用琼脂糖凝胶电泳检验酶解效果。


5.根据权利要求4所述的装置，其特征在于，所述步骤(1)中，所述基因组DNA的量为200ng～1μg，优选为300ng～600ng，最优选为500ng；和/或
所述RNA的量为500ng～1.5μg，优选为800ng～1....

【专利技术属性】
技术研发人员：余细勇，林忠晓，常继硕，张灵敏，
申请(专利权)人：广州医科大学，广州医大新药创制有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44