一种提高油菜低氮胁迫耐受性和氮吸收累积的方法技术

本发明专利技术公开了一种提高油菜低氮胁迫耐受性和氮吸收的方法，首先对盆栽的条件下褪黑素适宜浓度进行优化，其次再检测植株地上部、地下部干重和养分积累量，最后利用荧光定量PCR检测油菜硝酸盐转运蛋白NRT2基因家族的表达情况，进而明确外源喷施褪黑素对17个油菜NRT2家族成员基因表达的影响。采用本发明专利技术的方法能为提高油菜应对低氮胁迫和氮吸收累积提供有效途径，并且为提升大田油菜低氮耐受力提供参考依据。

【技术实现步骤摘要】
一种提高油菜低氮胁迫耐受性和氮吸收累积的方法
本专利技术属于农业类植物生产领域，涉及一种提高油菜低氮胁迫耐受性和氮吸收累积的方法，具体涉及一种应用褪黑素来提高油菜低氮胁迫耐受性和氮吸收累积的方法。
技术介绍
油菜是我国重要的油料作物，用途广泛，不仅是食用油的主要来源，提供了当前国产油料作物产油量的57％，而且还可以作为蔬菜和饲料等。近年来，我国的油菜种植面积逐年增加，目前已占到世界的30％左右。油菜需肥量大，尤其是对氮肥的需求，而实际生产中，土壤肥力偏低、养分供应不足的情况时常存在，其中氮肥供应不足会严重影响油菜的产量与品质。我国年氮肥消耗量为2500万吨(纯氮)，为世界之首，但氮肥报酬递减率越来越严重，许多地方出现了氮肥增加、产量不再增加甚至减少的现象，严重违反了低碳经济的要求。而油菜生产化肥投入较多，但肥料利用率较低，不仅造成资源浪费，而且带来农业面源污染潜在风险。此外，氮肥增加使作物体内硝酸盐含量增加已成为制约我国农产品出口创汇的主要因子之一。因此，提高油菜应对低氮胁迫的适应性和抗逆性对油菜的生产具有重要意义。目前，从植物本身出发本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种提高油菜低氮胁迫耐受性和氮吸收累积的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：/n(1)选种：选择大小一致、消毒处理的油菜种子备用；/n(2)育苗：将油菜种子均匀的播撒在被营养液浸透的石英砂中，并以干净的石英砂将种子表面覆盖，待种子露尖后再次浇灌等比例的营养液培养，直至幼苗长至四叶一心；/n(3)移栽：将上述长至四叶一心的幼苗先以清水浇灌2日后，通过浇灌等量不同氮浓度的营养液进行正常氮和低氮处理，同时配制不同浓度的褪黑素对低氮处理的油菜幼苗进行叶面喷洒，喷洒量以叶面有水珠，但不成柱流下为宜，每三天喷施一次，连续喷施两周，以未喷施MT的低氮处理油菜幼苗作为对照；/n(4)检测植株地上部和地下...

【技术特征摘要】
1.一种提高油菜低氮胁迫耐受性和氮吸收累积的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：
(1)选种：选择大小一致、消毒处理的油菜种子备用；
(2)育苗：将油菜种子均匀的播撒在被营养液浸透的石英砂中，并以干净的石英砂将种子表面覆盖，待种子露尖后再次浇灌等比例的营养液培养，直至幼苗长至四叶一心；
(3)移栽：将上述长至四叶一心的幼苗先以清水浇灌2日后，通过浇灌等量不同氮浓度的营养液进行正常氮和低氮处理，同时配制不同浓度的褪黑素对低氮处理的油菜幼苗进行叶面喷洒，喷洒量以叶面有水珠，但不成柱流下为宜，每三天喷施一次，连续喷施两周，以未喷施MT的低氮处理油菜幼苗作为对照；
(4)检测植株地上部和地下部干重和养分含量，计算养分积累量：
干重测定：分别收获不同浓度褪黑素喷施处理两周后油菜植株的地上部和地下部，称取鲜重后105℃杀青30min，75℃烘干至恒重后称取干重；
根冠比：不同处理油菜植株的地下部分与地上部分干重的比值；
氮含量测定：油菜植株地上部和根部样品烘干磨碎后，准确称取0.1500g左右样品，用H2SO4-H2O2法消煮后，过滤定容到50mL，用凯氏定氮法测定氮含量，计算氮累积量(Naccumulation，mg/plant)＝生物量×氮含量；
(5)利用荧光定量PCR检测油菜硝酸盐转运蛋白NRT2基因家族成员的表达情况：
采用HMMER(v3.1)软件的hmmbuild根据已知作物NRT2序列比对构建NRT2基因家族蛋白结构域的隐马尔可夫模型文件(HMMprofile)，采用软件HMMER(v3.1)软件的hmmsearch程序将blast比对上的蛋白序列进行结构域搜索并打分，设置阈值0.001进行过滤，筛选出油菜候选NRT2蛋白；将候选NRT2蛋白运用NCBICD-Search工具进行蛋白结构域注释，同时对序列进行clustalw2比对，从比对信息中进一步确认序列的结构域，最后确定NRT2家族成员基因为17个；采集不同浓度褪黑素喷施处理两周的油菜叶片和根系，使用Magen的RNA提取...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦璐，童佳峰，沈欣杰，廖星，韩配配，
申请(专利权)人：中国农业科学院油料作物研究所，
类型：发明
国别省市：湖北;42